發(fā)布時(shí)間：2020-07-24 18:55

【摘要】：目的:了解本地區(qū)大腸埃希菌(Escherichia coli)耐多藥情況、產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase,ESBLs)基因及耐消毒劑基因的攜帶狀況,分析基因與耐藥表型之間的關(guān)系;應(yīng)用ERIC-PCR對(duì)大腸埃希菌進(jìn)行遺傳同源性統(tǒng)計(jì)分析。方法:1.藥敏實(shí)驗(yàn):采用紙片擴(kuò)散法測(cè)定本地區(qū)138株大腸埃希菌臨床菌株對(duì)17種常見(jiàn)抗菌藥物的耐藥性,參照臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)標(biāo)準(zhǔn)判定耐藥情況,并篩選得到ESBLs菌株進(jìn)行判定。2.PCR擴(kuò)增檢測(cè)及測(cè)序:通過(guò)PCR擴(kuò)增檢測(cè)產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶基因CTX-M、TEM、SHV及耐消毒劑基因qacEΔ1、qacE,并將PCR陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物送擎科生物科技有限公司測(cè)序。3.ERIC-PCR基因分型:應(yīng)用該方法擴(kuò)增各大腸埃希菌基因組DNA,檢測(cè)其可擴(kuò)增出的條帶類(lèi)型,采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行遺傳同源性聚類(lèi)分析。結(jié)果:1.藥敏檢測(cè)結(jié)果:1.1 138株大腸埃希菌臨床分離株對(duì)四類(lèi)17種抗菌藥物耐藥情況:耐復(fù)方新諾明97株(70.29%)、耐萘啶酸115株(83.33%)、耐諾氟沙星77株(55.80%)、耐環(huán)丙沙星77株(55.80%)、耐左氧氟沙星54株(39.13%)、耐頭孢西丁4株(2.90%)、耐頭孢呋辛94株(68.12%)、耐頭孢他啶23株(16.67%)、耐頭孢噻肟55株(39.86%)、耐頭孢曲松64株(46.38%)、耐哌拉西林85株(61.60%)、耐哌拉西林/他唑巴坦5株(0.72%)、耐氨曲南39株(28.26%)、耐鏈霉素87株(63.04%)、耐慶大霉素64株(46.38%)、耐阿米卡星5株(3.62%)、亞胺培南全部敏感。1.2耐藥模式分布情況:耐多藥菌株98株(71.01%),雙耐藥菌株27株(19.57%),單耐藥6株(4.35%),全敏感菌株7株(5.07%)。1.3產(chǎn)ESBLs菌株檢出情況:138株臨床分離的大腸埃希菌中共檢出ESBLs陽(yáng)性菌株86株(62.31%)。產(chǎn)ESBLs菌株在不同耐藥模式分布:多耐藥模式77株(89.53%),雙耐藥模式9株(10.47%),在單耐藥、全敏模式菌株中未檢出ESBLs陽(yáng)性菌株。經(jīng)χ~2檢驗(yàn)比較ESBLs陽(yáng)性菌株與ESBLs陰性菌株對(duì)復(fù)方新諾明、萘啶酸、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、氨曲南、頭孢呋辛、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢曲松、哌拉西林、鏈霉素、慶大霉素的耐藥性,耐藥性具有顯著差異。2.耐藥酶與耐消毒劑基因檢測(cè)結(jié)果:2.1 CTX-M、TEM、SHV型ESBLs耐藥基因檢測(cè)結(jié)果:138株E.coli臨床分離株中,94株(68.12%)帶有blaTEM基因,79株(57.25%)帶有blaCTX-M基因,1株(0.72%)帶有blaSHV基因。耐多藥E.coli菌株中檢出blaCTX-M陽(yáng)性菌株70株(71.43%),blaTEM陽(yáng)性菌株70株(71.43%),blaCTX-M+blaTEM陽(yáng)性菌株48株(48.98%),通過(guò)χ~2檢驗(yàn)比較不同耐藥類(lèi)型菌株中blaCTX-M、blaTEM、blaCTX-M+blaTEM檢出率,三種基因檢出率存在顯著差異。2.2耐消毒劑基因檢出情況:138株大腸埃希菌臨床分離株中檢出qacEΔ1陽(yáng)性菌株71株(51.45%),均未檢測(cè)出qacE基因。qacEΔ1陽(yáng)性菌株與qacEΔ1陰性菌株對(duì)復(fù)方新諾明、萘啶酸、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、頭孢呋辛、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢曲松、慶大霉素的耐藥性比較,耐藥性具有顯著差異。在耐多藥E.coli菌株中檢出qacEΔ1陽(yáng)性菌株63株(88.73%),非耐多藥菌株檢出qacEΔ1陽(yáng)性菌株8株(11.27%),通過(guò)χ~2檢驗(yàn)比較耐多藥菌株及非耐多藥菌株耐消毒劑基因qacEΔ1檢出率,在兩種耐藥類(lèi)型的大腸桿菌中耐消毒劑基因qacEΔ1的檢出率存在顯著性差異。3.ERIC-PCR結(jié)果:ERIC-PCR指紋圖譜擴(kuò)增條帶數(shù)2～7條,產(chǎn)物分布在100 bp-2500bp;分為63個(gè)譜型。以80%的遺傳相似性劃分,聚類(lèi)分析得出的結(jié)果43個(gè)類(lèi)型,常見(jiàn)類(lèi)型有三個(gè)(E23、E24和E27)。E23包括耐多藥菌株7株,雙耐藥菌株3株;ESBLs表型陽(yáng)性菌株5株;產(chǎn)CTX-M型ESBLs菌株5株;產(chǎn)TEM型ESBLs菌株8株;產(chǎn)耐消毒劑基因qacEΔ1菌株5株;源自泌尿系感染菌株4株,血流感染1株,呼吸系統(tǒng)1株,其他感染類(lèi)型4株;源自?xún)?nèi)科3株,外科5株,婦產(chǎn)科1株,兒科1株。E24包括耐多藥菌株11株,雙耐藥菌株1株;ESBLs表型陽(yáng)性菌株7株;產(chǎn)CTX-M型ESBLs菌株6株;產(chǎn)TEM型ESBLs菌株8株;產(chǎn)耐消毒劑基因qacEΔ1菌株8株;源自泌尿系感染菌株4株,血流感染2株,其他感染類(lèi)型6株;源自?xún)?nèi)科4株,外科6株,婦產(chǎn)科2株,兒科0株。E27包括多耐藥菌株7株,雙耐藥菌株2株,單耐藥菌株1株;ESBLs表型陽(yáng)性菌株7株;產(chǎn)CTX-M型ESBLs基因7株;產(chǎn)TEM型ESBLs基因6株;耐消毒劑基因qacEΔ1基因5株;源自泌尿系感染菌株2株,血流感染2株,呼吸系統(tǒng)2株,其他感染類(lèi)型4株;源自?xún)?nèi)科4株,外科6株,婦產(chǎn)科0株,兒科0株。結(jié)論:1.本地區(qū)E.coli均表現(xiàn)出對(duì)常用抗菌藥物一定程度的耐藥,且以耐多藥模式常見(jiàn);但對(duì)阿米卡星、β內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物+酶抑制劑、頭酶素類(lèi)及碳青霉烯類(lèi)抗菌藥物的敏感性較高。2.ESBLs耐藥基因以blaCTX-M、blaTEM型為主,耐多藥菌株中blaCTX-M+blaTEM復(fù)合存在現(xiàn)象常見(jiàn)。3.耐消毒劑基因qacEΔ1檢出率高,以耐多藥菌株多見(jiàn)。4.同一類(lèi)型菌株的耐藥性、基因攜帶情況、感染類(lèi)型及科室分布情況經(jīng)遺傳同源性分析,未發(fā)現(xiàn)存在明顯聚集現(xiàn)象。
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R446.5
【圖文】：

西 南 醫(yī) 科 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文經(jīng)χ2檢驗(yàn)比較 ESBLs 陽(yáng)性菌株與 ESBLs 陰性菌株的耐藥性，對(duì)復(fù)方新諾明、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、頭孢呋辛、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢曲松、哌拉西林、氨曲南、萘啶酸、鏈霉素、慶大霉素的耐藥性比較，P 值均小于 0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)頭孢西丁、哌拉西林他唑巴坦、阿米卡星的耐藥性比較，P 值均大于 0.05，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖 2 產(chǎn) ESBLs 菌株的標(biāo)本來(lái)源Fig.2 Specimens source of ESBLs-producing strain產(chǎn) ESBLs 菌株在不同耐藥模式分布：耐多藥模式 77 株（89.53%藥模式 9 株（10.47%），在單耐藥、全敏模式菌株中未檢出 E菌株。經(jīng)χ2檢驗(yàn)比較ESBLs陽(yáng)性菌株與ESBLs陰性菌株的耐藥模小于 0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。具體見(jiàn)表 7。表 7 ESBLs 陽(yáng)性菌株和 ESBLs 陰性菌株的耐藥模式比較Table 7 Comparison between ESBLs positive and negative strain 耐多藥菌株耐藥情況分析ESBLs（+）（n=86）ESBLs（-）（n=52）χ2檢驗(yàn)P 值耐多藥菌株 77 21非耐多藥菌株 9 31 0.000

圖 3 blaTEM 檢出情況Fig.3 blaTEM detection注：M 為 Maker,1，3，5，9，10，11 號(hào)菌株 blaTEM 陽(yáng)性，2，4，blaTEM 陰性圖 4 blaCTX-M 檢出情況Fig.4 blaCTX-M detection注：M 為 Maker，2，3，4，5，8 號(hào)菌株 blaCTX-M 陽(yáng)性，1，6-7，9-12 號(hào)陰性

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