【摘要】：聯(lián)合國《2018年世界毒品問題報告》顯示,全球至少吸毒一次的人數(shù)保持穩(wěn)定,約為2.75億人,占全球15-64歲人口的5.6%,其中大麻、類阿片及苯丙胺類濫用最為嚴重,約有45萬人因吸毒死亡且呈上升趨勢。甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)屬于濫用最嚴重的苯丙胺(amphetamine,AM)類興奮劑之一,其化學結(jié)構(gòu)中有一個不對稱手性中心,存在2個對映異構(gòu)體,分別為S-(+)-METH和R-(-)-METH,其對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用、毒性及代謝機制均有較大差異。其中R-(-)(左旋)一般影響交感神經(jīng)系統(tǒng),多用于醫(yī)療方面;而S-(+)型(右旋)具有強烈的中樞神經(jīng)系統(tǒng)刺激作用,毒性很強,具有成癮性,為管制藥物,是“冰毒”的主要成分。因此,對METH的絕對構(gòu)型進行區(qū)分并分別研究其對機體靶器官的損傷和毒性機制顯得尤為重要。研究表明,METH亞急性中毒可誘發(fā)多種損傷,如肝損傷、腦神經(jīng)損傷及心血管損傷等,且METH濫用者、成癮性實驗動物的腦和骨代謝物均發(fā)生了顯著變化。另有研究發(fā)現(xiàn),METH濫用者毛發(fā)中的微量元素含量相較正常人出現(xiàn)明顯的紊亂。隨著組學技術(shù)的興起與發(fā)展,多種與疾病、損傷及中毒機制相關(guān)的生物標志物得以發(fā)現(xiàn),而METH致機體亞急性中毒后代謝物整體輪廓變化及相關(guān)標志物發(fā)現(xiàn)依然鮮有研究,而將差異性代謝物、元素與靶器官損傷相結(jié)合的機制研究尚未見報道。基于此,本論文采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法(Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS)首先建立并優(yōu)化了毛發(fā)中METH和AM手性對映異構(gòu)體的定性定量分析方法。結(jié)果表明,線性關(guān)系良好,各構(gòu)型相關(guān)系數(shù)均0.99,日間/日內(nèi)精密度均12%。利用該法對50余例METH濫用者的毛發(fā)進行檢測,其中有35例(70%)同時檢出單一的S-(+)-METH和S-(+)-AM,剩余 15例中有9例(18%)同時檢出了S-(+)-METH、S-(+)-AM、R-(-)-METH和R-(-)-AM,但均以S構(gòu)型為主。該法高效便捷,為后續(xù)單一手性的甲基苯丙胺毒性損傷研究提供分析方法支撐。其次,選取單一手性的S-(+)-METH開展Sprague Dawley(SD)大鼠亞急性中毒模型研究,將24只成年雄性SD大鼠隨機分成兩組,METH組通過4天(一天2次)內(nèi)連續(xù)腹腔注射(Intraperitonealinjection,i.p.)15mg/mL/kg METH造成亞急性中毒;對照(Control)組注射相同量的生理鹽水。與Control組相比,METH組大鼠血清中谷丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase,AST)含量顯著增加,提示存在明顯的肝損傷,病理學組織切片觀察進一步證實了這一現(xiàn)象。為了進一步研究相關(guān)代謝物、微量元素與肝損傷的相關(guān)性,并尋找可能的生物標志物,本研究共選取了在動物血漿中穩(wěn)定存在且具有變異性18種小分子代謝物和19種元素進行整體輪廓定量分析并進行了方法學驗證,采用SIMCA-P軟件中的偏最小二乘判別分析(Partial Least Squares Discrimination Analysis,PLS-DA)模型繪制得分圖(score plot)并歸類,Control組和METH組均可實現(xiàn)完全分離,基于變量重要性投影(variable importance in projection,VIP,VIP1)和t檢驗方法(p0.05),最終確定5種差異性代謝物(脯氨酸、絲氨酸、丙氨酸、生物素和煙酰胺)和6種差異性元素(硼、鈷、硒、鎳、鉀和砷)。基于上述發(fā)現(xiàn),結(jié)合KEGG數(shù)據(jù)庫和Metaboanalyst 4.0程序中相關(guān)代謝物通路的分析表明,METH致大鼠亞急性中毒后可能阻斷了脯氨酸和絲氨酸生物合成的兩種途徑以及煙酰胺代謝。以上研究,為手性甲基苯丙胺的實際司法鑒定工作提供了科學依據(jù)與技術(shù)支持,進一步的肝損傷與代謝、金屬組學相關(guān)性研究為METH導致的亞急性中毒機制提供了科學解釋,相關(guān)差異性代謝物和元素的發(fā)現(xiàn)為可能的METH中毒診斷提供了理論基礎(chǔ)。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R749.64
【圖文】：

２．３．２色譜條件的優(yōu)化逡逑實驗初始使用ＤＡＩＣＥＬ邋ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ？邋ＩＡ－３手性色譜柱，但發(fā)現(xiàn)該色譜柱對逡逑苯丙胺類對映異構(gòu)體選擇性較差（見圖２－２），無法實現(xiàn)分離。最終，本實驗采逡逑用ＳＵＰＥＬＣＯ邋Ａｓｔｅｃ邋ＣＨＩＲＯＢＩＯＴＩＣ？邋Ｖ２手性色譜柱，該色譜柱的填料含有萬古逡逑霉素，對胺類化合物立體選擇性較好。逡逑２逡逑１逡逑產(chǎn)￣？邐Ｉ邐■邐廣一邋＾邐Ｉ邐■逡逑１邋（ｍｉｎ）逡逑圖２－２采用ＤＡＩＣＥＬ邋ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ？邋ＩＡ－３手性色譜柱的總離子流色譜圖逡逑色譜峰：１．邋ＡＭ邋（ｍ／ｚ邋１３６．１／９１．２）；邋２＿邋ＭＥＴＨ邋（ｍ／ｚ邋１５０．１／９１．１）．逡逑Ｆｉｇ．邋２－２邋Ｔｏｔａｌ邋ｉｏｎ邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ邋ｏｆ邋ＤＡＩＣＥＬ邋ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ？邋ＩＡ－３邋ｃｈｉｒａｌ邋ｃｏｌｕｍｎ逡逑Ｐｅａｋ邋ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ：邋１．邋ＡＭ邋｛ｍ／ｚ邋１３６．１／９１．２）；邋２．邋ＭＥＴＨ邋｛ｍ／ｚ邋１５０．１／９１．１）．逡逑２２逡逑

■ｅｓｔ邐？＊0？逡逑圖２－１邋ＭＥＴＨ和ＡＭ質(zhì)譜方法的建立逡逑ａ．邋—級質(zhì)譜；ｂ．二級質(zhì)譜逡逑Ｆｉｇ．２－１邋Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ邋ｏｆ邋ＭＥＴＨ邋ａｎｄ邋ＡＭ邋ｍａｓｓ邋ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ邋ｍｅｔｈｏｄｓ逡逑ａ．邋Ｑｌ；ｂ．ＭＳ２逡逑２．３．２色譜條件的優(yōu)化逡逑實驗初始使用ＤＡＩＣＥＬ邋ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ？邋ＩＡ－３手性色譜柱，但發(fā)現(xiàn)該色譜柱對逡逑苯丙胺類對映異構(gòu)體選擇性較差（見圖２－２），無法實現(xiàn)分離。最終，本實驗采逡逑用ＳＵＰＥＬＣＯ邋Ａｓｔｅｃ邋ＣＨＩＲＯＢＩＯＴＩＣ？邋Ｖ２手性色譜柱，該色譜柱的填料含有萬古逡逑霉素，對胺類化合物立體選擇性較好。逡逑２逡逑１逡逑產(chǎn)￣？邐Ｉ邐■邐廣一邋＾邐Ｉ邐■逡逑１邋（ｍｉｎ）逡逑圖２－２采用ＤＡＩＣＥＬ邋ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ？邋ＩＡ－３手性色譜柱的總離子流色譜圖逡逑色譜峰：１．邋ＡＭ邋（ｍ／ｚ邋１３６．１／９１．２）；邋２＿邋ＭＥＴＨ邋（ｍ／ｚ邋１５０．１／９１．１

逑基于此，本實驗考察采用不同有機相和水相時目標化合物的分離效果（見逡逑圖２－３）。使用乙腈作為有機相、含０．２％邋（Ｖ／Ｖ）冰醋酸的０．０５％邋（Ｖ／Ｖ）氨水逡逑作為水相時，ＭＥＴＨ和ＡＭ手性對映異構(gòu)體始終無法分離（顯示為單峰），而逡逑將有機相更換為甲醇時，ＭＥＴＨ與ＡＭ手性對映異構(gòu)體可實現(xiàn)初步分離，且甲逡逑醇對目標化合物具有更好的分離選擇性，因此將甲醇確定為有機相。開始使用逡逑一元流動相，向甲醇內(nèi)添加不同的酸、堿溶液，并嘗試改變甲醇內(nèi)添加劑的類逡逑型和比例，但均未能獲得較好分離。然后改用二元流動相進行分離，并比較了逡逑含０．２％邋（Ｖ／Ｖ）冰醋酸的０．０５％邋（Ｖ／Ｖ）氨水與含０．１％邋（Ｖ／Ｖ）甲酸的２０ｍｍｏｌ／Ｌ逡逑乙酸銨水溶液作為水相時的分離效果，發(fā)現(xiàn)使用后者時ＭＥＴＨ與ＡＭ的手性對逡逑映異構(gòu)體分離效果較為穩(wěn)定（分離度分別為１．５２和１．６１），峰形較好，響應(yīng)高，逡逑而在前一種流動相下

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 閆娟;曹衛(wèi)東;何丹;劉云;朱江;張波;;甲基苯丙胺亞急性中毒大鼠血清和尿液代謝組學研究[J];中國法醫(yī)學雜志;2018年04期

2 李艷軍,尹瑞云,賴清宏;VX皮下急性、亞急性中毒的生化毒理研究[J];解放軍醫(yī)學情報;1994年05期

3 李耒玉，陳秉炯;職業(yè)性二氯乙烷亞急性中毒的研究概況[J];中國工業(yè)醫(yī)學雜志;1996年01期

4 劉起展;周炯亮;;四氯化碳亞急性中毒引起肝臟損害機理及部位[J];遵義醫(yī)學院學報;1992年02期

5 左繼統(tǒng);周淑嫻;;兒童敵敵畏亞急性中毒(附13例報告)[J];赤腳醫(yī)生雜志;1974年05期

6 孫長儉,白書閣,馬衛(wèi)平,李正求,白晶,尹富華;褪黑素對D-半乳糖亞急性中毒小鼠作用的實驗研究[J];中華老年醫(yī)學雜志;2000年05期

7 周光仙;阿托品治療斷奶仔豬燒堿亞急性中毒[J];中國獸醫(yī)雜志;1994年06期

8 李達,王玉珍;多功能聚氨酯彈性地面涂料亞急性中毒9例報告[J];中國工業(yè)醫(yī)學雜志;1991年02期

9 陳霞;李國良;付正英;張國權(quán);張引國;;丙烯酰胺亞急性中毒對大鼠神經(jīng)元NOS表達的影響[J];武警后勤學院學報(醫(yī)學版);2017年01期

10 李來玉,陳秉炯,黃建勛,何家禧;1,2-二氯乙烷職業(yè)中毒近十年的研究概況[J];中國職業(yè)醫(yī)學;1999年06期

相關(guān)會議論文 前1條

1 張巡淼;孫道遠;陳衛(wèi)杰;謝蘭蘭;;1,2-二氯乙烷亞急性中毒臨床特點分析—附7例報道[A];中華預(yù)防醫(yī)學會第十八次全國職業(yè)病學術(shù)交流大會論文匯編[C];2009年

相關(guān)碩士學位論文 前6條

1 張穎怡;單一手性甲基苯丙胺致大鼠亞急性中毒后的代謝、金屬組學研究[D];南方醫(yī)科大學;2019年

2 閆娟;基于~1H NMR的甲基苯丙胺急性中毒致死和亞急性中毒的大鼠血清、尿液代謝組學研究[D];川北醫(yī)學院;2018年

3 楊宇;諾米芬新對亞急性甲基苯丙胺中毒大鼠多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)的保護作用[D];昆明醫(yī)學院;2009年

4 李玉俠;亞急性氟磺胺草醚中毒對鼠免疫和遺傳的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2012年

5 榮杰;甘肅棘豆對大鼠亞急性毒性及α-甘露糖苷酶分布與表達的影響[D];西北農(nóng)林科技大學;2011年

6 曹湘博;V_E干預(yù)D-半乳糖亞急性中毒擬衰老模型鼠免疫衰老實驗研究[D];吉林大學;2006年

本文編號：2767220