【摘要】：研究背景人類免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)是引起獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS,又稱為艾滋病)的病原體,HIV感染的潛伏期一般8-10年。傳統(tǒng)免疫學(xué)方法檢測抗HIV抗體,只能判斷是否感染HIV,不能區(qū)分HIV新發(fā)感染,難以準(zhǔn)確監(jiān)測HIV流行趨勢及評價干預(yù)措施的效果。基于橫斷面樣本估算HIV新發(fā)感染率的實驗室檢測方法在近年來有一定的研究進(jìn)展,但尚未有公認(rèn)的金標(biāo)準(zhǔn)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)HIV-1跨膜糖蛋白gp41中57氨基酸多肽(gp41-p57)能夠區(qū)分HIV-1近期和長期感染,但具體的抗原決定簇氨基酸序列,以及HIV不同基因型氨基酸的差異對檢測結(jié)果的影響,尚需進(jìn)一步研究確定。研究目的研究gp41-p57多肽抗原在區(qū)分HIV-1近期和長期感染中起主要作用的抗原決定簇及其基因型特異性,初步建立基于我國流行的HIV-1基因亞型gp41抗原區(qū)分HIV近期和長期感染實驗室檢測方法,為HIV新發(fā)感染率的監(jiān)測、預(yù)防或治療措施的效果評價提供研究方法和工具。研究方法1.基于HIV gp41-p57序列,通過人工合成10條長短不一的系列短肽為檢測抗原,以間接ELISA法研究其與HIV-1近期和長期感染樣本的免疫反應(yīng)特征,分析gp41多肽的抗原決定簇。2.合成源自我國流行的CRF01_AE、B、CRF07_BC和CRF08_BC四種亞型的gp41-p57多肽,以間接ELISA法研究其與HIV-1不同基因亞型感染樣本的免疫反應(yīng)特征,分析gp41-p57基因型特異性。3.構(gòu)建原核表達(dá)載體,通過免疫印跡實驗和間接ELISA法分析所純化目的蛋白的免疫活性,獲得包含HIV-1 CRF01_AE、B、CRF07_BC和CRF08_BC亞型gp41_p57的融合蛋白MP4。4.以融合蛋白MP4為檢測抗原,建立區(qū)分HIV-1近期和長期感染的間接ELISA法,通過與商品化試劑盒LAg-Avidity EIA檢測結(jié)果比較,評價所建立方法的靈敏度、特異度以及陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值。研究結(jié)果1.確定了HIV gp41-p57多肽中QKFLG和GKIIC序列是區(qū)分HIV-1近期感染和長期感染中起主要作用的抗原決定簇。p57多肽兩端序列EAQQHLLQLT和WNSSWSN可能影響抗原抗體的識別或結(jié)合�；趐57多肽建立的方法與商業(yè)化試劑盒檢測結(jié)果的一致率為0.923,約登指數(shù)為0.923,受試者工作曲線下面積為0.987。說明HIV-1 gp41-p57多肽可作為區(qū)分HIV-1近期感染和長期感染方法的檢測抗原。2.HIV不同基因型的gp41_p57多肽序列存在差異,影響檢測結(jié)果的靈敏度。將來自HIV-1優(yōu)勢基因型的gP41-p57多肽混合后作為檢測抗原,可以提高檢測方法靈敏度。3.與商業(yè)化試劑盒比較,基于融合蛋白MP4的檢測方法對37份縱向樣本和159份橫斷面樣本的檢測結(jié)果的一致率分別為0.890和0.730,靈敏度分別為90.91%和96.85%,特異度分別為100.00%和71.88%,近期感染預(yù)測值分別為88.24%和85.19%,長期感染預(yù)測值分別100.00%和85.19%�；谌诤系鞍譓P4的檢測方法對159份樣本重復(fù)檢測三次,僅7份樣本(4.40%)結(jié)果不完全一致,檢測方法的可靠性為95.60%。研究結(jié)論本研究確定了區(qū)分HIV-1近期和長期感染的gp41多肽抗原決定簇及其基因型特異性。基于我國HIV主要基因亞型gp41抗原的融合蛋白MP4,初步建立了區(qū)分HIV-1近期感染和長期感染的間接ELISA法。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R512.91;R446.6
【圖文】：

邐第一章前言邐逡逑進(jìn)行干預(yù)，有利于改善預(yù)后和減少ＨＩＶ的傳播，為ＨＩＶ新發(fā)感染率的監(jiān)測及預(yù)防逡逑或治療措施的效果評價提供方法和工具。逡逑本研究基本技術(shù)路線如下圖：逡逑１＋１０

構(gòu)而影響抗原抗體的結(jié)合，對近期感染階段的影響或更大。逡逑將基于多肽Ｐ５７和ｐｌ－ｐ７間接ＥＬＩＳＡ法檢測５３份ＨＩＶ－１近期與長期感染樣逡逑本的結(jié)果繪制ＲＯＣ曲線（圖３－２），各檢測方法的截斷值見表３－２，其曲線下面逡逑積均大于０．８，提示各檢測方法具有較高的診斷價值。逡逑表３－１樣本的基本信息逡逑Ｔａｂｌｅ邋３－１邋Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ邋ｏｆ邋ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ邋ａｎｄ邋ｓａｍｐｌｅｓ邋ｕｓｅｄ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｓｔｕｄｙ逡逑ＨＩＶ－１感染分期逡逑組別邐基因分型樣本量近期感染，長期感染，邋ｐ逡逑邐樣本量（％）樣本量（％）邐逡逑縱向樣本邐ＮＴ＊邐３７邐１５（４０．５）邐２２（５９．５）邋ＮＴ逡逑感染天數(shù)邐４０－６０２邐４０－１２０邐１２８－６０２邐ＮＴ逡逑平均感染天數(shù)邐２４１±１７８邐７４±２７邐３５５±１４１邐＜０．０５ｂ逡逑橫斷面樣本逡逑門診病人邐ＮＴ邐１６邐８邋（５０．０）邐８邋（５０．０）邋ＮＴ逡逑ＭＳＭ邋人群和邋ＩＤＵ邋人群邋ＣＲＦ０１＿ＡＥ邐５６邐１４（２５．０）邐４２（７５．０）邐０．１０７ｃ逡逑ＣＲＦ０７＿ＢＣ邐４９邐１１（２２．４）邐３８（７７．６）逡逑ＣＲＦ０８＿ＢＣ邐２９邐１（３．４）邐２８（９６．６）逡逑Ｓｕｂｔｙｐｅ邋Ｂ邐１２邐２（１６．７）邐１０（８３．３）逡逑Ｏｔｈｅｒｓ邐１５邐５（３３．３）邐１０（６６．７）逡逑邐Ｔｏｔａｌ邐１６１邐３３（２０．５）邐１２８（７９．５）邐逡逑ａＮＴ，未檢測或未計算。逡逑ｂｐ，Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｏｅｙ檢驗。逡逑ＣＰ邋

逡逑圖３－１邋ＨＩＶ－１邋ｇｐ４１抗原決定簇分析逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－１邋Ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｉｍｍｕｎｏｄｏｍｉｎａｎｔ邋ｅｐｉｔｏｐｅｓ邋ｏｆ邋ＨＩＶ－１邋ｇｐ４１逡逑（Ａ）各多肽與ＨＩＶ－ｌ近期感染（Ｒ，空心圓形）和長期感染樣本（Ｌ，實心方形）反應(yīng)強(qiáng)度的逡逑比較。各組樣本的平均０Ｄ值用短橫線表示，各多肽上方數(shù)值為長期感染樣本平均０Ｄ值與逡逑近期感染樣本平均０Ｄ值的比值。（Ｂ）邋３０份長期感染樣本對各氨基酸殘基的反應(yīng)性。逡逑３０逡逑

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4 戰(zhàn)思恩;李洋遠(yuǎn);曾甲子;謝鑫;翟燕紅;王文娟;莊太鳳;;育齡婦女27334例的弓形蟲近期感染狀況回顧性分析[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2013年11期

5 韋再華,張勇,李國慶;近期感染與腦梗死發(fā)病的相關(guān)性研究[J];心肺血管病雜志;2005年03期

6 張理選;王新光;陳淑如;陳俊釗;郭漢明;黃杰華;;人工髖關(guān)節(jié)置換術(shù)后抗生素使用時間與近期感染率的相關(guān)性[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2014年22期

7 閆樂京,李萍;老年人近期感染與急性腦梗死160例分析[J];中國實用內(nèi)科雜志;2001年11期

8 陳竹青;;老年人近期感染與心律失常100例臨床分析[J];中國藥物與臨床;2012年08期

9 俞信忠;許平;曾艷;吳滿武;范佳鳴;;自然流產(chǎn)婦女風(fēng)疹病毒近期感染的檢測[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2006年03期

10 朱其秀 ,譚蘭 ,孫兆林;近期感染與缺血性腦血管病的關(guān)系[J];中國煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2001年10期

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2 俞信忠;許平;曾艷;吳滿武;鄭淑芳;;6002例孕婦RV、HCMV近期感染的調(diào)查分析(摘要)[A];中國優(yōu)生科學(xué)協(xié)會2004年優(yōu)生科學(xué)學(xué)術(shù)交流大會論文集[C];2004年

3 黃艷儀;黎青;黎泳桃;李秀英;彭文明;許曼;馮志明;史哲;;孕期弓形體感染母兒傳播及宮內(nèi)治療[A];’96全國優(yōu)生科學(xué)大會大會學(xué)術(shù)講演與大會論文摘要匯編[C];1996年

4 陸媛;;HCMV感染對妊娠的篩查分析[A];第九屆中國臨床微生物學(xué)大會暨微生物學(xué)與免疫學(xué)論壇論文集[C];2018年

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3 于海英;LAg-Avidity EIA用于中國HIV-1新發(fā)感染率估算的適用性研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2013年

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5 王佳;近期感染與缺血性腦卒中的相關(guān)性研究與探討[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

6 郭帆;急性腦梗死中醫(yī)證型與近期感染及炎性細(xì)胞因子IL-6的相關(guān)研究[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2007年

7 林翠茹;腦梗死與近期感染關(guān)系的相關(guān)臨床研究與探討[D];天津中醫(yī)學(xué)院;2003年

8 韋再華;近期感染引發(fā)的腦梗死發(fā)病的危險性和免疫機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2002年

9 仲春紅;急性白血病醫(yī)院感染相關(guān)因素分析[D];山東大學(xué);2010年

10 趙慧;近期感染作為缺血性腦卒中危險因素的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2003年

本文編號：2762070