發(fā)布時(shí)間：2020-07-12 21:16

【摘要】：背景:神經(jīng)母細(xì)胞瘤病理分期中危組和高危組的患者,采取放射治療可以顯著增加腫瘤的局部控制率,提高患者生存率。然而,部分神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者的放射治療效果不好,存在放療抵抗的現(xiàn)象。文獻(xiàn)報(bào)道,在腫瘤的放療抵抗作用中,NF-κB(nuclear factor κB,NF κB)通路的激活起到重要作用。目的:本研究旨在探討NF-κB通路在γ輻射所致SH-SY5Y細(xì)胞損傷中的作用功能與機(jī)制。方法:常規(guī)培養(yǎng)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞—SH-SY5Y細(xì)胞系,不同劑量(0、0.2、0.5、2、5、10和20 Gy)γ射線照射細(xì)胞,分別在照射后不同時(shí)間點(diǎn)(4、8、24和48小時(shí))收集細(xì)胞。(1)使用倒置顯微鏡觀察SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。(2)采用MTT(Thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)實(shí)驗(yàn)檢測SH-SY5Y細(xì)胞增殖數(shù)量。(3)采用PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測SH-SY5Y細(xì)胞周期變化與凋亡細(xì)胞比例。(4)采用Western blot觀察DNA損傷相關(guān)蛋白、NF-κB通路蛋白、凋亡通路相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。(5)采用熒光定量PCR觀察SH-SY5Y細(xì)胞凋亡通路相關(guān)基因、NF-κB通路基因和細(xì)胞增殖基因的表達(dá)情況。(6)P65-DNA結(jié)合實(shí)驗(yàn)檢測NF-κB(P65)蛋白與DNA的結(jié)合活性。(7)雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測NF-κB(P65)蛋白的轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果:(1)SH-SY5Y細(xì)胞受到γ射線照射后,細(xì)胞腫脹,邊緣毛糙,觸角增多。隨著照射后時(shí)間延長和照射劑量增大,上述形態(tài)學(xué)改變越明顯。(2)與對照組相比,γ射線照射組的細(xì)胞數(shù)量呈現(xiàn)劑量依賴性減少(P0.01)。(3)與對照組相比,γ射線照射組的細(xì)胞凋亡比例和G2/M期細(xì)胞比例呈現(xiàn)劑量依賴性增加(P0.01)。(4)與對照組相比,γ射線照射組的細(xì)胞DNA損傷相關(guān)蛋白γH2ax、NF-κB通路蛋白p65與磷酸化p65、凋亡通路蛋白Cleaved Caspase-3與Parp的表達(dá)量增加。(5)與對照組相比,γ射線照射組的細(xì)胞NF-κB通路基因p65的表達(dá)上調(diào)(P0.01),凋亡通路基因Caspase-3、Bax和Parp的表達(dá)上調(diào)(P0.05),細(xì)胞增殖基因Pcna下調(diào)(P0.01),細(xì)胞周期調(diào)控基因p21上調(diào)(P0.01)。(6)與對照組相比,γ射線照射組的細(xì)胞NF-κB(P65)蛋白與DNA的結(jié)合活性增加(P0.05),NF-κB(P65)蛋白的轉(zhuǎn)錄活性增加(P0.01)。結(jié)論:(1)γ輻射可激活炎癥、凋亡、DNA損傷通路,導(dǎo)致SH-SY5Y細(xì)胞損傷。輻射損傷效應(yīng)包括促進(jìn)SH-SY5Y細(xì)胞的凋亡、G2/M期阻滯和增殖抑制。(2)γ輻射可能通過NF-κB通路的激活導(dǎo)致SH-SY5Y細(xì)胞的損傷,p65蛋白是其中關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子。
【學(xué)位授予單位】：長江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R730.55;R739.4
【圖文】：

1 SH-SY5Y 細(xì)胞接受 0Gy 和 10Gyγ射線照射后 24、48 小時(shí)的細(xì)胞形態(tài)(x4Fig 1 The SH-SY5Y cell morphology changes after receiving γ irradiation射線照射對 SH-SY5Y 細(xì)胞增殖的影響 MTT 法檢測 SH-SY5Y 細(xì)胞的生長，如圖 2 所示，與對照組相比，0y、10 Gy、20 Gyγ射線照射組的 SH-SY5Y 細(xì)胞相對存活率降低，（P<相比，0.2 Gyγ射線照射組的細(xì)胞相對存活率無變化（P>0.05）。以胞的相對存活率隨著輻射劑量的增加而降低，呈現(xiàn)劑量依賴性。

Y 細(xì)胞接受 0Gy 和 10Gyγ射線照射后 24、48 小時(shí)he SH-SY5Y cell morphology changes after receivin射對 SH-SY5Y 細(xì)胞增殖的影響測 SH-SY5Y 細(xì)胞的生長，如圖 2 所示，與20 Gyγ射線照射組的 SH-SY5Y 細(xì)胞相對存 Gyγ射線照射組的細(xì)胞相對存活率無變化（存活率隨著輻射劑量的增加而降低，呈現(xiàn)劑

第 2 章 研究報(bào)告2.2.3γ射線照射對 SH-SY5Y 細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響如圖 3 所示，采用流式細(xì)胞儀對 PI 單染后的 SH-SY5Y 細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞周期分析。如圖 4A 所示，sub-G1 期的細(xì)胞代表著因輻射發(fā)生凋亡的細(xì)胞，與對照組相比，5 Gy、10 Gy、20 Gyγ射線照射組 sub-G1 期的細(xì)胞比例增加（P<0.01）。如圖 4D所示，與對照組相比，10 Gy、20 Gyγ射線照射組 G2/M 期細(xì)胞比例增加（P<0.01）。以上結(jié)果說明，γ輻射可導(dǎo)致 SH-SY5Y 細(xì)胞發(fā)生 G2/M 期阻滯。γ輻射可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，凋亡細(xì)胞比例隨著輻射劑量的增加而增加，呈現(xiàn)劑量依賴性。

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本文編號：2752499