發(fā)布時間：2020-07-09 12:23

【摘要】：目的:膿毒癥(sepsis)及膿毒癥休克常伴有凝血功能障礙、急性肺損傷、循環(huán)衰竭以及腸道屏障破壞等全身各臟器功能障礙。膿毒癥釋放大量炎癥介質(zhì)引起腸道屏障受損,大量細(xì)菌易位入血,引起其他臟器感染損傷,最終造成多臟器功能衰竭甚至死亡。甲烷是最簡單的一種烷烴,可能是地球上目前含量最豐富的一種有機(jī)物。自然環(huán)境中,甲烷在有機(jī)體在缺氧的環(huán)境中降解產(chǎn)生,廣泛的散布到大氣中的一種有害的氣體。人體內(nèi)產(chǎn)生甲烷方式之一是線粒體在低氧條件下受損。近年關(guān)于生物氣體甲烷研究顯示其在哺乳動物的神經(jīng)、腸系膜、肝臟、心肌、糖尿病視網(wǎng)膜病變模型等缺血再灌注損傷模型中,甲烷的治療作用能對抗氧化應(yīng)激使線粒體免受損傷。核因子E2相關(guān)因子2(Nuclear factor E2 related factor2,Nrf2)和血紅素加氧酶-l(heme oxygenase-1,HO-1)能對抗氧化應(yīng)激損傷。富甲烷鹽水(Methane saline,MS)減輕膿毒癥大鼠腸損傷中的作用機(jī)制尚不十分清楚。本研究擬探討MS治療對膿毒癥大鼠腸道組織HO-1及其調(diào)控靶點(diǎn)表達(dá)的影響,為明確其治療機(jī)制提供參考。方法:成年雄性SD大鼠160只,8~10周齡,體重220~280 g,隨機(jī)分為5組:sham組、sepsis組、膿毒癥模型+甲烷鹽水治療組(sepsis+MS)、膿毒癥模型+ZnPPIX組(sepsis+ZnPPIX組)和膿毒癥模型+甲烷鹽水治療+ZnPPIX組(sepsis+MS+ZnPPIX組)。盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)法建立sepsis模型。10%MS治療10ml/kg分別于假手術(shù)或CLP術(shù)后0.5 h、12h和每間隔24h分別給予MS組腹腔注射,其他組給予生理鹽水治療。30mg/kgZnPPIX分別術(shù)前1h給予Sepsis+ZnPPIX組和sepsis+MS+ZnPPIX組腹腔注射。第一部分:100只大鼠隨機(jī)分為5組(n=20),記錄每組大鼠1、2、3、5、7天生存率。再取60只大鼠隨機(jī)分為5組(n=12)。造模后6 h、18 h處死大鼠,測定各個時間點(diǎn)大鼠腸組織SOD、MPO水平,血清及腸組織中腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素1β(IL-1β)及白細(xì)胞介素10(IL-10)的水平。腸損傷評分Chiu’S法評估術(shù)后6h、18 h大鼠腸組織病理改變,FITC熒光標(biāo)記法測定腸道通透性。第二部分:上組60只大鼠術(shù)后6 h、18 h處死大鼠,采用Western blot免疫印跡法測量各個時間點(diǎn)大鼠腸黏膜組織緊密連接蛋白(Occludin)、HO-1以及Nrf2蛋白的表達(dá);采用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)法測定腸粘膜緊密連接蛋白、HO-l mRNA以及Nrf2 mRNA的表達(dá)。結(jié)果:第一部分:假手術(shù)組鹽水治療組大鼠生存率為100%。在膿毒癥組大鼠中,大鼠生存率由24 h的85%降至48 h的40%;MS治療能提高sepsis大鼠的7 d存活率(P0.05);ZnPPIX注射組大鼠生存率降低(P0.05)。膿毒癥大鼠腸組織病理學(xué)評分、腸道通透性比假手術(shù)組增高(P0.05),MS治療可明顯緩解這些變化(P0.05),腸組織損傷注射ZnPPIX后加重(P0.05);MS治療提高sepsis大鼠血清和腸組織IL-10及SOD水平,降低TNF-α、IL-1β及MPO表達(dá)水平(P0.05),注射ZnPPIX使TNF-α、IL-1β和MPO水平升高,SOD和IL-10水平降低(P0.05)。第二部分:與假手術(shù)組相比,造模術(shù)后6h、18 h膿毒癥組大鼠腸組織HO-1、Nrf2蛋白及mRNA表達(dá)升高(P0.05),MS治療后可以上調(diào)膿毒癥大鼠小腸組織HO-1、Nrf2的表達(dá)(P0.05)。與假手術(shù)組相比,其他組大鼠小腸黏膜組織中緊密連接蛋白術(shù)后6 h、18 h顯著降低(P0.05),MS治療可增加緊密連接蛋白活性(P0.05),ZnPPIX抑制HO-1的表達(dá),緊密連接蛋白活性降低,同時逆轉(zhuǎn)MS對膿毒癥大鼠腸道損傷的治療作用(P0.05)。結(jié)論:MS通過Nrf2誘導(dǎo)HO-1的表達(dá),增高大鼠腸道黏膜組織SOD活性,抑制促炎因子的釋放及MPO浸潤,增加大鼠小腸黏膜緊密連接蛋白活性,減輕腸黏膜的損傷、降低腸道通透性及腸道炎癥反應(yīng),從而減輕膿毒癥大鼠的腸道損傷。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R459.7
【圖文】：

富甲烷鹽水注入腹腔治療后，膿毒癥大鼠 3 天生存率為 60%，5 天%，7 天生存率為 60%顯著提高（P<0.05），而使用 HO-1 抑制劑 Z，大鼠生存率 72h 生存率為 20%，120h 生存率為 10%，168h 生存低（P<0.05）。表 1：5 組大鼠生存率比較 (n=20)(day) 0 1 2 3 5 100% 100% 100% 100% 100% 1s 100% 80%a45%a25%a15%as+MS 100% 85% 70%ab60%ab55%ab5s+ZnPPIX 100% 75%a35%ac20%ac10%acs+ZnPPIX+MS 100% 80% 50%ac35%ac20%ac表示與 sham 組比較 P < 0.05,b 與 sepsis 組比較 P < 0.05，c 與 sepsis+MS 組比0.05)。

10 的釋放增加（P<0.05）。富甲烷鹽水治療和 sepsis 組相比，促炎因子表達(dá)下降，腸組織 MPO 下降（P<0.05），腸組織 SOD、抗炎因子增加（P<0.05）。膿毒癥+甲烷鹽水治療組+ZnPPIX 和富甲烷鹽水治療和膿毒癥組相比，促炎因子表達(dá)上升，抗炎因子表達(dá)下降（P<0.05），說明 HO-1 活性被抑制后，富甲烷鹽水對炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用下降。表 2. MS 和 ZnPPIX 處理 5 組大鼠對血漿 TNF-α , IL-1β 和 IL-10 表達(dá)影響 ( x ±s,n=6)GroupsTNF-α(pg/ml) IL-1β(pg/ml) IL-10(pg/ml)6h 18h 6h 18h 6h 18hham 12.4±1.5 12.0±1.6 14.3±2.2 14.2±3.1 13.3±1.4 15.6±1.5epsis 680.2±60.6a315.3±47.2a124.3±8.4a243.4±9.3a55.0±4.4a68.5±5.4aepsis+MS 510.4±48.4ab220.5±52.2ab100.3±7.8ab180.2±8.4ab90.3±6.8ab102.5±7.1aepsis+ZnPPIX 720.6±60.5ac410.6±57.4ac138.8±10.6ac256.5±9.7ac52.0±4.8ac62.6±5.8acepsis+ZnPPIX+MS 660.8±46.5ac328.4±54.2ac120.1±8.8ac200.5±9.6ac60.2±3.9ac70.2±4.4ac（a 表示與 sham 組比較 P < 0.05,b 與 sepsis 組比較 P < 0.05，c 與 sepsis+MS 組比較 P <0.05)。

第一部分甲烷鹽水對膿毒癥大鼠腸損傷及相關(guān)指標(biāo)表達(dá)的影響表 3. MS 治療和 ZnPPIX 處理對各組大鼠腸道 TNF-α , IL-1β 和 IL-10 表達(dá)影響( x±s,n=6)upsTNF-α(pg/mg) IL-1β(pg/mg) IL-10(pg/6h 18h 6h 18h 6h 28.2±4.5 30.3±5.5 83.3±3.2 82.5±3.4 12.5±1.4 1340.5±78.4a1003.4±70.2a624.3±35.4a393.4±39.3a70.0±5.9a1 700.4±56.2ab615.3±87.5ab400.3±44.8ab280.2±48.4ab110.6±7.9ab1PPIX 1480.6±80.8ac995.9±80.9ac700.8±40.6ac416.5±39.7ac71.4±4.4acPPIX+MS 1290.2±78.5ac895.3±77.2ac590.1±48.8ac350.5±42.6ac80.2±5.8ac1（a 表示與 sham 組比較 P < 0.05,b 與 sepsis 組比較 P < 0.05，c 與 sepsis+MS 組比較 P <0.05)。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2747449