【摘要】：目的:功能良好的血管通路對(duì)血液透析患者至關(guān)重要,血液透析患者首選的血管通路是自體動(dòng)靜脈內(nèi)瘺(Autogenous arteriovenous fistula,AVF),但其失功率較高。AVF狹窄是其失功的最主要原因,可引起內(nèi)瘺血流量下降,最終導(dǎo)致血栓形成及內(nèi)瘺閉塞。而引起AVF狹窄的原因很多,其中包括血管鈣化,它可導(dǎo)致內(nèi)瘺血管僵硬度增加,引起患者透析過(guò)程中血壓不穩(wěn),造成渦流,進(jìn)而引起內(nèi)瘺狹窄。以往研究較多的是橈動(dòng)脈的鈣化,內(nèi)瘺處頭靜脈血管鈣化也是引起AVF擴(kuò)張受限與失功的重要原因,其確切的病理生理機(jī)制目前還不十分清楚,但以往多個(gè)實(shí)驗(yàn)和臨床研究發(fā)現(xiàn),血管鈣化與鈣磷代謝障礙、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、氧化應(yīng)激以及遺傳性障礙等相關(guān)。骨形態(tài)發(fā)生蛋白(Bone morphogenetic protein,BMPs)可與羥基磷灰石及骨基質(zhì)中的膠原結(jié)合,是一種高效的鈣化及骨形成誘導(dǎo)物質(zhì),通過(guò)多種細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑在鈣化形成及骨再生中發(fā)揮重要作用。BMPs有數(shù)種,其中BMP-2(Bone morphogenetic protein-2,BMP-2)骨誘導(dǎo)性最強(qiáng)。Wnt基因是一個(gè)大家族,編碼一大類分泌性糖蛋白因子,包括19種人類蛋白,Wnt3a是其中一員,它在調(diào)節(jié)細(xì)胞的自我更新、增殖、分化和能動(dòng)性等細(xì)胞功能中發(fā)揮重要作用。依據(jù)其功能特征,Wnt家族可以分為兩大類:Wnt1和Wnt5a。其中Wnt3a屬于Wnt1類,主要通過(guò)Wnt/β-catenin信號(hào)途徑在調(diào)節(jié)細(xì)胞功能中發(fā)揮作用。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)免疫組化檢測(cè)AVF頭靜脈血管中BMP-2、Wnt3a、β-catenin表達(dá)情況,并同時(shí)檢測(cè)患者空腹血清鈣(Ca)、血清磷(P)、甲狀旁腺激素(iPTH)、堿性磷酸酶(ALP)和C反應(yīng)蛋白(CRP)水平,探討AVF頭靜脈鈣化與BMP-2、Wnt3a、β-catenin及血清學(xué)指標(biāo)的關(guān)系。方法:選取2016年6月至2017年6月河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院腎內(nèi)科收治的AVF失功患者及擬初次行AVF患者各10例,分別為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組患者行AVF重建術(shù)時(shí),切取狹窄的頭靜脈及其近端組織各約0.5cm作為實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2;對(duì)照組患者初次行AVF端側(cè)吻合術(shù)時(shí),將頭靜脈結(jié)扎切斷后,于遠(yuǎn)心端切取約0.5cm的完整靜脈作為對(duì)照組。行von kossa染色檢測(cè)頭靜脈血管鈣化,免疫組化檢測(cè)BMP-2、Wnt3a、β-catenin,同時(shí)檢測(cè)患者空腹血清Ca、血清P、iPTH、ALP和CRP水平。所有入選的患者均簽署知情同意書(shū),并經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,符合正態(tài)分布的計(jì)量資料均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,采用單因素方差分析和兩樣本均數(shù)比較的t檢驗(yàn);非正態(tài)分布的資料采用中位數(shù)表示,運(yùn)用非參數(shù)檢驗(yàn)(Mann-Whitney);相關(guān)性分析應(yīng)用Spearman分析,以p0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=-0.015,p=0.988);性別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ~2=0.22,p=0.639);實(shí)驗(yàn)組血清Ca低于對(duì)照組(1.90±0.13VS2.22±0.06),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-6.933,p=0.000);實(shí)驗(yàn)組血清P、iP TH、CRP、ALP高于對(duì)照組(2.41±0.36VS1.87±0.18,418.01±264.95VS213.01±105.68,4.06±4.27VS2.28±1.03,106.30±46.57VS72.10±11.45),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t_P=4.139,p_P=0.001;t_(iPTH)=2.273,p_(iPTH)=0.043;t_(CRP)=1.279,p _(CRP)=0.023;t_(ALP)=2.255,p_(ALP)=0.048)。2 von kossa染色鈣鹽沉積為黑色,背景為紅色。依據(jù)血管上鈣化積分,實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2可見(jiàn)較明顯鈣鹽沉積,位于血管中膜,兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(z=-0.847,p=0.436);對(duì)照組鈣鹽沉積弱于實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z_1=-2.202,p_1=0.029;z_2=-1.595,p_2=0.023)。3免疫組織化學(xué)染色3.1 BMP-2免疫組織化學(xué)染色BMP-2主要表達(dá)于平滑肌細(xì)胞胞漿中。在實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2中以強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)為主,主要位于內(nèi)膜和中膜,兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(z=-0.746,p=0.481);而對(duì)照組頭靜脈BMP-2表達(dá)呈弱陽(yáng)性,位于內(nèi)中膜,主要位于內(nèi)膜。實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2頭靜脈BMP-2的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z_1=-2.387,p_1=0.019;z_2=-2.009,p_2=0.042)。3.2 Wnt3a免疫組織化學(xué)染色Wnt3a主要表達(dá)于平滑肌細(xì)胞胞漿中。在實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2中以強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)為主,主要位于內(nèi)膜和中膜,兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(z=-0.990,p=0.353);而對(duì)照組頭靜脈Wnt3a表達(dá)呈弱陽(yáng)性,位于內(nèi)中膜,主要位于內(nèi)膜。實(shí)驗(yàn)組Wnt3a的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z_1=-3.228,p_1=0.001;z_2=-3.116,p_2=0.002)。3.3β-catenin免疫組織化學(xué)染色β-catenin主要表達(dá)于平滑肌胞漿中。在實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2中以強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)為主,主要位于內(nèi)膜和中膜,兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(z=-1.513,p=0.165);而對(duì)照組頭靜脈β-catenin表達(dá)呈弱陽(yáng)性,位于內(nèi)中膜,主要位于內(nèi)膜。實(shí)驗(yàn)組β-catenin的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z_1=-3.474,p_1=0.000;z_2=-3.232,p_2=0.001)。3.4免疫組織化學(xué)染色的陰性對(duì)照陰性對(duì)照組內(nèi)膜和中膜均未見(jiàn)陽(yáng)性染色,血管外膜呈棕黃色,但是未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞,考慮為非特異性染色。4血管的BMP-2、Wnt3a及β-catenin染色積分隨血管鈣化程度的加重,積分逐漸增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z_(BMP-2)=-2.405,p_1=0.000;z_(Wnt3a)=-3.89,p_2=0.001;z_(β-catenin)=-2.405,p_(β-catenin)=0.016);血清Ca、P水平隨鈣化程度的加重,數(shù)值逐漸上升(2.12±0.14vs1.98±0.22;1.91±0.22vs2.41±0.39),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t_(Ca)=1.794,p_(Ca)=0.040;t _P=-3.443,p_P=0.005);血清iPTH、CR P、ALP水平隨鈣化程度的變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。5相關(guān)性分析5.1血管鈣化積分與血清Ca、P呈正相關(guān)(r_(ca)=-0.455,p_(ca)=0.044;r_P=0.821,p_P=0.000),與年齡、i PTH、ALP、CRP無(wú)相關(guān)性(r_(iPTH)=0.200,p_(ca)=0.399;r_(ALP)=0.102,p_(ALP)=0.669;r_(CRP)=0.281,p_(CRP)=0.230)。5.2 BMP-2、Wnt3a及β-catenin染色積分與血清Ca、P呈正相關(guān)(r_(BMP-2)=-0.478,p_(BMP-2)=0.033;r_(Wnt3a)=-0.652,p_(Wnt3a)=0.002;r_(β-catenin)=-0.660,p_(β-caten in)=0.002;r_(BMP-2)=0.744,p_(BMP-2)=0.000;r_(Wnt3a)=0.785,p_(Wnt3a)=0.000;r_(β-catenin)=0.730,p_(β-catenin)=0.000);與年齡、i PTH、ALP、CRP無(wú)相關(guān)性(p0.05)。5.3 Wnt3a/β-catenin染色積分與BMP-2的染色積分成正相關(guān)(r_(Wnt3a)=0.909,p_(Wnt3a)=0.00;r_(β-catenin)=0.796,p_(β-catenin)=0.00)。結(jié)論:1血液透析患者失功AVF頭靜脈血管鈣化是一個(gè)類似于骨形成的過(guò)程,BMP-2和Wnt3a/β-catenin信號(hào)通路可能參與了頭靜脈血管鈣化病變的發(fā)生過(guò)程。2 Wnt3a/β-catenin信號(hào)通路可介導(dǎo)BMP-2的表達(dá),共同調(diào)節(jié)血管鈣化的發(fā)生。3 BMP-2、Wnt3a、β-catenin的高表達(dá)與靜脈鈣化密切相關(guān),可能成為未來(lái)干預(yù)的靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R692.5
【圖文】：

圖 1.1 von kossa 染色無(wú)鈣鹽沉積（40X）g1.1 Von kossa staining in Calcium free salt deposition (4

vonkossa染色輕中度鈣化組（40X）

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 王玉柱;葉朝陽(yáng);金其莊;;中國(guó)血液透析用血管通路專家共識(shí)(第1版)[J];中國(guó)血液凈化;2014年08期

2 盧照

本文編號(hào)：2740383