【摘要】：目的:過敏原sIgE抗體的準確定量對食物過敏的診斷、治療有著指導性意義;同時,過敏原分子診斷也逐漸成為趨勢,在精準檢測和精準脫敏中體現了重要價值。本研究以蛋清中的四種過敏原為具體實例,希望建立一種均相化學發(fā)光免疫分析方法用于檢測血清中的sIgE抗體;同時,從分子診斷的角度出發(fā),分析單個過敏原組分在評估蛋清過敏中的臨床價值。方法:1.蛋清sIgE抗體光激化學發(fā)光方法的初步建立:基于光激化學發(fā)光(LICA)平臺,以生物素標記四種過敏原,以抗人IgE抗體包被發(fā)光微球,與血清樣本共同孵育;然后加入鏈霉親和素包被的感光微球,構成整個反應體系。優(yōu)化各試劑的最佳工作濃度及孵育時間,初步建立蛋清sIgE抗體分子診斷方法。2.蛋清sIgE抗體光激化學發(fā)光方法的性能驗證:對初步建立的方法進行分析性能評估,如靈敏度、精密度、準確度等。并從70例蛋清過敏的患者中挑選出8例對單組分過敏的患者,與ImmunoCAP做相關性分析,進而驗證該方法的準確性。3.蛋清過敏原分子診斷的臨床價值評估:選擇70例過敏患者和30例健康對照,以ImmunoCAP方法為標準,做受試者工作曲線,計算靈敏度、特異度及曲線下面積,分析單一過敏原組分在評估過敏中的臨床價值。并將四組分兩兩組合進行研究,選擇具有最佳診斷價值的組合方式。結果:1.蛋清sIgE抗體光激化學發(fā)光方法的初步建立:將血清稀釋倍數、過敏原濃度、抗人IgE抗體濃度、發(fā)光微球濃度及第一階段孵育時間進行優(yōu)化,最終確定最佳血清稀釋倍數1:10、過敏原濃度0.665μg/ml、抗人IgE抗體濃度1μg/ml、發(fā)光微球濃度20μg/ml、第一階段孵育時間30 min為最佳工作條件。2.蛋清sIgE抗體光激化學發(fā)光方法的性能驗證:用該方法檢測蛋清四種過敏原,其批內及批間精密度(變異系數)分別為1.83~4.13%和2.70%~8.70%;在將陽性血清高倍比例稀釋時,檢測結果與陰性血清依然能區(qū)分開來,表明該方法的靈敏度良好;在準確度試驗(稀釋試驗)中,其回收率為90.29~117.93%;同樣,對單組分過敏的患者進行檢測,該方法與ImmunoCAP相關性良好(r~2=0.929)。3.蛋清過敏原分子診斷的臨床價值評估:蛋清過敏原卵類黏蛋白(Gal d 1)和卵白蛋白(Gal d 2)在評估蛋清過敏中有同樣的價值,曲線下面積(AUC)均為0.81,特異度分別為90.0%和93.3%,靈敏度較低,分別為61.4%和58.6%。但是,當把Gal d 1和Gal d 2聯合應用分析時,靈敏度可以達到72.4%。結論:本研究基于過敏原分子診斷,建立了檢測蛋清sIgE抗體的光激化學發(fā)光分析方法。該方法具有較好的分析性能,有一定的臨床應用價值,有望在食物過敏分子診斷領域發(fā)揮更大的作用。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R446.6
【圖文】：

圖 1 LICA 檢測血清 sIgE 的原理圖Figure 1 Principle of LICA for the determination of sIgE in human sera.研究目的本文基于光激化學發(fā)光（LICA）平臺，建立一種新型血清 sIgE 抗體體外檢測方法，以蛋清中四種主要過敏原：卵類黏蛋白（OM，Gal d 1）、卵白蛋白（OA，Gal d 2）、卵轉鐵蛋白（OT，Gal d 3）、溶菌酶（Gal d 4）[21]為具體實例，對食物過敏原 sIgE 抗體進行分子診斷。同時，分析單個過敏原組分在評估蛋清過敏中的臨床價值。研究方法1.基于光激化學發(fā)光（LICA）平臺，將血清樣本與生物素標記的蛋清四種過敏原、抗人 IgE 抗體包被的發(fā)光微球、鏈霉親和素包被的感光微球共同孵育，構成整個反應體系。優(yōu)化最佳工作濃度及工作時間，初步建立蛋清 sIgE 抗體的 LICA檢測方法。2.對初步建立的方法進行分析性能驗證，如靈敏度、精密度、準確度。并

天津醫(yī)科大學碩士學位論文 對象和方法系，其原理如圖 2 所示。用稀釋液配制成不同濃度的標準品溶液：0，0.003，0.013，0.054，0.217，0.435 IU/ml，形成 hIgE 濃度-信號值強度的劑量曲線。然后，由hIgE 濃度推理獲得 sIgE 的濃度[23]，得到 sIgE-信號值強度的劑量曲線，其橫坐標濃度單位為 IU/ml。選取 8 例只對單一組分過敏的患者血清并檢測，根據這 8 例血清 ImmunoCAP 的檢測結果將劑量反應曲線的橫坐標校準為濃度單位 kUA/L，最終得到 sIgE 定量的劑量-反應曲線。在定標過程中，每次檢測均做復孔。制備的標準品溶液分裝后于-20℃保存?zhèn)溆谩?

【參考文獻】

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1 邵潔,羅海燕,APurohit G Pauli;樺樹花粉相關的食物過敏綜合征一例[J];中華兒科雜志;2005年02期

本文編號：2733188