發(fā)布時(shí)間：2020-06-20 11:30

【摘要】：研究背景異基因造血干細(xì)胞移植(allo-HSCT)是治療血液系統(tǒng)腫瘤最有效的方法之一,然而急性移植物抗宿主病(aGVHD)的發(fā)生作為allo-HSCT后常見(jiàn)而且嚴(yán)重的并發(fā)癥影響了移植療效,限制了其使用。aGVHD的發(fā)生是由于移植物中供者來(lái)源的成熟T細(xì)胞識(shí)別宿主MHC(主要組織相容性復(fù)合體)抗原,增殖分化為效應(yīng)T細(xì)胞,對(duì)宿主組織或器官發(fā)動(dòng)免疫攻擊,進(jìn)而導(dǎo)致宿主組織器官受損的一系列病理生理過(guò)程。T細(xì)胞在aGVHD的發(fā)生中發(fā)揮了不可替代的重要作用。Ras蛋白由Ras基因編碼,為膜結(jié)合型的GTP/GDP結(jié)合蛋白,TCR被刺激后激活Ras,在成熟T細(xì)胞中,Ras活化導(dǎo)致Raf聚集并被激活,進(jìn)一步通過(guò)MEK/ERK信號(hào)途徑影響淋巴細(xì)胞功能。哺乳動(dòng)物Ras蛋白存在H-ras,N-ras 以及K-ras(K-ras4A,K-ras4B)四種異構(gòu)體,不同Ras蛋白異構(gòu)體間功能不完全相同。目前對(duì)Kras如何影響淋巴細(xì)胞增殖分化發(fā)育等研究較少,具體機(jī)制尚不清楚。我們前期研究發(fā)現(xiàn)Kras缺失對(duì)早期T細(xì)胞發(fā)育沒(méi)有明顯影響,但Kras缺失是否影響成熟CD4+及CD8+T細(xì)胞發(fā)育分化,以及是否通過(guò)影響T細(xì)胞分化發(fā)育從而影響GVHD的發(fā)生發(fā)展亦不清楚。本研究將首次探索Kras在aGVHD發(fā)生發(fā)展中的作用及相關(guān)分子機(jī)制。研究方法1、建立Kras敲除型(VavCreKrasfl/fl)小鼠模型:Kras基因的第一個(gè)外顯子兩端被安插了 LoxP位點(diǎn),將攜帶Krasfl/fl基因的小鼠與攜帶VavCre轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行交配,從而得到整個(gè)造血系統(tǒng)Kras基因第一個(gè)外顯子缺失的小鼠。2、建立小鼠aGVHD模型:給予受體小鼠BALB/c 900rads照射劑量,將來(lái)源于供體小鼠T細(xì)胞,以及取自Rag1-/-小鼠骨髓細(xì)胞一起通過(guò)尾靜脈注射進(jìn)受體小鼠體內(nèi),每?jī)商煊^察小鼠生存情況及表現(xiàn),持續(xù)觀察60天,統(tǒng)計(jì)生存率及GVHD評(píng)分。3、荷瘤小鼠模型(GVL):給予經(jīng)致死劑量輻照的BALB/c小鼠接種帶有熒光素酶(luciferase)的A20細(xì)胞(A20-luc),同一天荷瘤小鼠接受上述骨髓細(xì)胞移植,實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)荷瘤小鼠生存情況。4、采用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)、流式細(xì)胞術(shù)、Western Blot、RNA測(cè)序等方法檢測(cè)T細(xì)胞增殖、活化、細(xì)胞因子分泌,以及抗-CD3刺激下Ras下游信號(hào)通路的活化情況。研究結(jié)果1、在MHC-錯(cuò)配小鼠模型中,供者T細(xì)胞Kras缺失可以減弱aGVHD的發(fā)生及嚴(yán)重程度,但不影響GVL。2、混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中,Kras缺失導(dǎo)致T細(xì)胞增殖能力下降。3、在aGVHD小鼠模型中,T細(xì)胞活化水平未受明顯影響,然而T細(xì)胞分泌的促炎癥細(xì)胞因子減少。4、在aGVHD小鼠模型中,Kras缺失的CD4+T細(xì)胞經(jīng)抗-CD3抗體刺激后,Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路活性降低。研究結(jié)論在aGVHD小鼠模型中,T細(xì)胞Kras缺失通過(guò)減弱T細(xì)胞增殖能力,影響促炎癥細(xì)胞細(xì)胞分泌及減弱TCR相關(guān)信號(hào)通路活性抑制急性移植物抗宿主病發(fā)生,但并不影響移植物抗腫瘤效應(yīng)。本研究為臨床發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)以及開(kāi)發(fā)新的靶向藥物提供了依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R457.7
【圖文】：

圖２．邋Ｒａｓ的活化與失活逡逑Ｒａｓ是ＴＣＲ信號(hào)途徑中的重要信號(hào)分子。Ｒａｓ蛋白由Ｒａｓ基因編碼，型的ＧＴＰ／ＧＤＰ結(jié)合蛋白，定位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，屬于三磷酸鳥(niǎo)苷（ＧＴＰ白，通過(guò)ＧＴＰ與二磷酸鳥(niǎo)苷（ＧＤＰ）的相互轉(zhuǎn)化來(lái)調(diào)節(jié)信息的傳遞，在生長(zhǎng)分化信號(hào)方面起重要作用。鳥(niǎo)苷酸交換因子（ＧＥＦｓ）通過(guò)促進(jìn)ＧＴＰ從而活化ｒａｓ，而ＧＴＰ酶活化蛋白則通過(guò)催化ＧＴＰ水解為ＧＤＰ使Ｒａｓ。與ＧＴＰ結(jié)合的Ｒａｓ特異性活化絲氨酸／蘇氨酸激酶Ｒａｆ，Ｒａｆ磷酸化Ｋ１／２，進(jìn)一步磷酸化并激活絲氨酸／蘇氨酸激酶ＥＲＫ１／２，最終導(dǎo)致轉(zhuǎn)－１上調(diào)，并促進(jìn)其之后的活化。已有研宄表明ＴＣＲ及ＢＣＲ被刺激后激胸腺細(xì)胞及Ｂ細(xì)胞增殖發(fā)育及細(xì)胞因子產(chǎn)生中發(fā)揮重要作用，在成熟Ｔｓ活化導(dǎo)致Ｒａｆ聚集并被激活，進(jìn)一步通過(guò)ＭＥＫ／ＥＲＫ信號(hào)途徑影響淋能［２４］。（圖邋３－１、３－２）。逡逑

圖３－１．邋ＴＣＲ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路模式圖逡逑

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本文編號(hào)：2722351