【摘要】：目的:研究低氧預(yù)處理人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)放射性損傷涎腺的功能。方法:(1)應(yīng)用機(jī)械法和酶消化法從人羊膜組織中分離人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞,通過及免疫細(xì)胞化學(xué)染色,細(xì)胞成脂和成骨誘導(dǎo)分化以及細(xì)胞免疫表型鑒定,對(duì)干細(xì)胞特性進(jìn)行鑒定。將細(xì)胞進(jìn)行低氧及常氧預(yù)處理48h,以備動(dòng)物實(shí)驗(yàn)使用,以上實(shí)驗(yàn)步驟由同課題組代敏同學(xué)完成;(2)雌性小鼠18只,一次性使用15Gy的電子線局部照射頭頸部制作涎腺損傷模型和6只正常小鼠,分為4組,空白對(duì)照組(Control)、照射+PBS組(IR+PBS)、照射+常氧處理人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞組[IR+Nor-hAMSCs(IR+Nor)]、照射+低氧預(yù)處理人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞組[IR+HP-hAMSCs(IR+HP)];(3)將注射細(xì)胞濃度調(diào)整為1×10~6/ml,注射劑量為20ml,于小鼠下頜下腺原位移植,細(xì)胞治療后2月對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè);(4)檢查指標(biāo):測(cè)定各組小鼠體重、唾液流量率及滯后時(shí)間后,處死小鼠取下頜下腺稱重,行HE染色、TUNEL組織凋亡檢測(cè)、α-Amy免疫組化檢測(cè),對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:(1)小鼠體重在單純放射損傷后下降,后緩慢恢復(fù)至放射損傷前水平。放射損傷后1周小鼠唾液流量明顯下降,為正常流量的42.9%,放射損傷后2月測(cè)量小鼠唾液流量為正常小鼠的31.6%,下頜下腺組織HE染色顯示:小鼠下頜下腺體內(nèi)腺泡細(xì)胞大量消失,組織結(jié)構(gòu)紊亂,見團(tuán)塊狀炎性細(xì)胞浸潤(rùn),間質(zhì)內(nèi)散在纖維化;(2)細(xì)胞治療后2月,IR+HP組和IR+Nor組唾液流量、腺體重量較IR+PBS組明顯改善,但少于空白對(duì)照組(P0.05),IR+HP組較IR+Nor組有少量增加(P0.05);IR+PBS組滯后時(shí)間長(zhǎng)于空白對(duì)照組(P0.05),IR+Nor組和IR+HP組兩組間滯后時(shí)間大致相同,但仍長(zhǎng)于空白對(duì)照組,各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(3)細(xì)胞治療后2月HE染色:IR+PBS組中腺泡細(xì)胞數(shù)量大量減少,剩余腺泡細(xì)胞呈現(xiàn)空泡性變,結(jié)構(gòu)改變巨大,見團(tuán)塊狀炎性細(xì)胞浸潤(rùn),間質(zhì)出現(xiàn)纖維樣改變。IR+Nor組較IR+PBS組,腺泡細(xì)胞數(shù)量增多,漿液性腺泡輕度水腫,見少量散在炎性細(xì)胞浸潤(rùn),間質(zhì)纖維化減輕。IR+HP組較IR+PBS組,腺泡細(xì)胞數(shù)量顯著增加,細(xì)胞結(jié)構(gòu)接近正常細(xì)胞;(4)細(xì)胞治療后2月細(xì)胞凋亡率:IR+PBS組高于IR+HP組及IR+Nor組(P0.05),IR+HP組低于IR+Nor組(P0.05);(5)免疫組化染色:α-Amy在各組間均有表達(dá),IR+HP組及IR+Nor組較IR+PBS組表達(dá)增加(P0.05),IR+HP組較IR+Nor組的表達(dá)增加(P0.05)。結(jié)論:低氧預(yù)處理的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞較常氧培養(yǎng)方式能更加有效修復(fù)放射損傷涎腺的功能。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R781.7;R730.55
【圖文】：

義醫(yī)學(xué)院碩士研究生論文 王英1.3 放射損傷后小鼠下頜下腺病理變化情況正常小鼠下頜下腺組織的表現(xiàn)主要大量腺泡細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整。傷后 1 月顯示腺泡細(xì)胞數(shù)目較正常組減少，部分腺泡細(xì)胞結(jié)構(gòu)受損，見散在炎浸潤(rùn)。放射損傷后 2 月顯示腺泡細(xì)胞數(shù)目明顯減少，大部分腺泡細(xì)胞結(jié)構(gòu)受損塊狀炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)內(nèi)見散在纖維化。見圖 3、表 1。BA

圖 8 細(xì)胞治療后 2 月對(duì)小鼠小頜下腺組織結(jié)構(gòu)的影響(×200)A.空白對(duì)照組小鼠下頜下腺 HE 染色圖（×200）；B.IR+PBS 組小鼠下頜下腺 HE 染色圖（200）；C.IR+Nor 組小鼠下頜下腺 HE 染色圖（×200）；D. IR+HP 組小鼠下頜下腺 HE 染色圖（200）表 5 細(xì)胞治療后 2 月各組小鼠下頜下腺組織切片中的腺泡細(xì)胞數(shù)量 ( x ±S, n=6)組別 腺泡細(xì)胞數(shù)目（個(gè)）Control 組 162.43±6.73IR+PBS 組 90.43±7.32***IR+Nor 組 110.57±7.59*** ###IR+HP 組 126.57±8.23*** ### ++

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 姚觀平;余麗梅;范振海;方寧;任飛;羅嬌;張小雨;王鈺瑩;劉金偉;;人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞移植骨髓抑制小鼠的造血功能[J];中國組織工程研究;2013年23期

2 霍雙枝;施萍;龐希寧;;人羊膜負(fù)載人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)SD大鼠皮膚創(chuàng)面愈合的影響[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2011年06期

3 張路;方寧;陳代雄;劉祖林;劉金偉;萬衛(wèi)紅;章濤;;人羊膜間充質(zhì)細(xì)胞具有向心肌樣細(xì)胞分化的特性[J];中國生物工程雜志;2007年12期

本文編號(hào)：2718011