【摘要】：第一部分海帶多糖對放射誘導(dǎo)下頜下腺氧化應(yīng)激損傷的保護作用目的:采用~(60)Coγ射線來建立放射性下頜下腺損傷的小鼠模型并給予海帶多糖干預(yù),通過觀察小鼠一般情況,唾液流量,頜下腺指數(shù),下頜下腺大體形態(tài),病理形態(tài)以及氧化應(yīng)激指標ROS,MDA,炎性因子TNF-α,IL-6和TGF-β的變化,來探討海帶多糖(Laminaria japonica polysaccharides,LJP)干預(yù)對放射誘導(dǎo)下頜下腺氧化應(yīng)激損傷的影響。方法:將96只健康清潔級昆明小鼠隨機分為4組:對照組,LJP組,放射組(IR組)和放射+LJP組(IR+LJP組),每組24只。觀察和記錄小鼠活動,皮毛顏色等情況,每隔3d對各組小鼠體重,飲水量和攝取飼料量進行測量;IR組和IR+LJP組小鼠給予60Coγ射線一次性照射15Gy建立放射性頜下腺損傷的小鼠模型,在照射前3d開始腹腔注射海帶多糖(100mg/kg/d),連續(xù)給藥7d,即于照射后4d結(jié)束,分別于照射后1d,7d,28d和56d檢測小鼠唾液流量,使用毛果蕓香堿誘導(dǎo)獲得30min內(nèi)唾液總量,按照小鼠體重進行統(tǒng)一標準化處理;觀測下頜下腺的大體形態(tài),分別對小鼠體重和下頜下腺進行稱量,計算頜下腺指數(shù),HE染色觀察其組織病理學(xué)變化;并檢測下頜下腺氧化應(yīng)激指標ROS和MDA表達水平的變化;采用ELISA檢測小鼠血清中炎性細胞因子TNF-α,IL-6和TGF-β分泌的變化。結(jié)果:1.各組小鼠一般情況的變化:與對照組比較,IR組小鼠對觸碰敏感,易煩躁不安,毛發(fā)易脫落,并且毛發(fā)脫落部位易發(fā)生潰瘍,而LJP+IR組小鼠上述異常情況并不明顯;IR組小鼠在照射后飲水量明顯增多(P0.05),在放射后7d飲水量達到高峰,而攝食量和體重明顯減少(P0.05);與IR組比較,隨著時間延長給予LJP干預(yù)的放射小鼠攝食量和體重開始逐漸恢復(fù)(P0.05),飲水量逐漸減少(P0.05);2.各組小鼠唾液流量的變化:與對照組相比,LJP組小鼠的唾液流量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而IR組唾液流量在照射后顯著減少,并隨著照射時間的延長,唾液流量呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(P0.05);經(jīng)LJP干預(yù)后的放射小鼠唾液流量在照射后7d開始逐漸恢復(fù)升高(P0.05);3.下頜下腺大體形態(tài)及其指數(shù)變化:與對照組相比,在照射后7d開始,IR組小鼠頜下腺出現(xiàn)充血腫脹,其頜下腺指數(shù)明顯升高(P0.05);LJP+IR組小鼠頜下腺充血腫脹改善,頜下腺指數(shù)低于放射組(P0.05);4.HE染色顯示:與對照相比,IR組頜下腺組織中出現(xiàn)導(dǎo)管腺泡出現(xiàn)明顯空泡化,核固縮,導(dǎo)管擴張和炎細胞浸潤等病理變化;而LJP+IR組小鼠頜下腺的空泡化和炎細胞浸潤等病變程度明顯輕于IR組;5.氧化應(yīng)激指標ROS和MDA結(jié)果顯示:與對照組相比,LJP組頜下腺中ROS和MDA含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而照射后IR組SMG中ROS和MDA含量顯著升高(P0.05);經(jīng)LJP干預(yù)后的放射小鼠頜下腺組織中ROS和MDA的含量降低(P0.05),在放射后56d恢復(fù)到對照組水平;6.ELISA檢測結(jié)果顯示:與對照組相比,放射后IR組及LJP+IR組小鼠血清中TNF-α和IL-6含量均明顯升高(P0.05),而IR組TGF-β1含量在放射后1d和56d時明顯升高(P0.05);LJP+IR組的TNF-α,IL-6和TGF-β含量明顯低于IR組(P0.05)。結(jié)論:1.γ射線可誘導(dǎo)下頜下腺的氧化應(yīng)激損傷和炎癥反應(yīng)。2.LJP對放射誘導(dǎo)的下頜下腺損傷保護作用可能與增強其抗氧化能力有關(guān)。第二部分基于Nrf2通路研究LJP對放射誘導(dǎo)下頜下腺氧化應(yīng)激損傷保護作用的分子機制目的:通過進一步探討與氧化應(yīng)激有關(guān)的重要通路Nrf2中Nrf2/HO-1,NQO1,/MnSOD以及線粒體蛋白Sirt3表達位置和變化規(guī)律,來闡明海帶多糖干預(yù)對放射誘導(dǎo)下頜下腺氧化損傷保護作用可能的分子機制。方法:采用免疫熒光染色,免疫組化染色,實時熒光定量PCR和蛋白免疫印跡等實驗方法來共同檢測驗證LJP干預(yù)對Nrf2/HO-1,NQO1,MnSOD以及線粒體蛋白Sirt3在下頜下腺組織中表達位置以及表達變化規(guī)律的影響。結(jié)果:1.免疫熒光染色顯示:對照組和LJP組Nrf2均表達在腺泡細胞的胞漿中,而IR組和IR+LJP組頜下腺中Nrf2表達由胞漿轉(zhuǎn)位到細胞核;與對照組相比,LJP組小鼠頜下腺中MnSOD表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而IR組和LJP+IR組MnSOD表達在放射后7d開始明顯升高(P0.01);與IR組相比,給予LJP處理的放射小鼠頜下腺中MnSOD表達進一步明顯升高(P0.01);2.免疫組化染色顯示:與對照組比較,LJP組HO-1和NQO1表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而IR組和IR+LJP組HO-1和NQO1表達在放射后7d開始明顯增加(P0.05),IR組中Sirt3的表達明顯降低(P0.05);給予海帶多糖干預(yù)的IR+LJP組小鼠頜下腺中HO-1、NQO1和Sirt3表達在放射后7d開始明顯高于IR組(P0.05);3.熒光定量PCR顯示:與對照組相比,LJP組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而IR組SMG中Nrf2,HO-1,NQO1和MnSOD的mRNA水平在放射后明顯增加(P0.05),Sirt3的mRNA水平明顯減少(P0.05);給予LJP處理的放射小鼠SMG中Keap1和Nrf2,HO-1,NQO1,MnSOD和Sirt3的mRNA水平明顯高于IR組(P0.05);4.蛋白免疫印跡顯示:與對照組相比,LJP組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),IR組和LJP+IR組頜下腺中Nrf2,HO-1和NQO1的蛋白水平明顯增加(P0.05);與IR組比較,給予LJP處理的放射小鼠Nrf2,HO-1和NQO1蛋白水平進一步增加(P0.05)。結(jié)論:1.海帶多糖可能通過激活Nrf2信號通路改善放射誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷和炎癥反應(yīng)2.海帶多糖可能通過上調(diào)線粒體蛋白Sirt3表達來改善氧化應(yīng)激損傷和炎癥反應(yīng)
【圖文】：

于照射前 3d 給予 LJP 組和 IR+LJP 組小鼠腹腔注射 0.1%Lg/d，持續(xù)到照射后 4d；同時對照組和 IR 組小鼠腹腔注射等同l。物模型的建立 3d 后，將 IR 組和 IR+LJP 組小鼠麻醉，固定于自制的“放定頭部身體不能移動，一次性給予 60Coγ射線照射劑量為 15G表的距離為 80 cm，，劑量吸收率為 1250cGy/min，使小鼠頸部分暴露于透過鉛板孔的射線下，照射頸部區(qū)域，其它部位受射線照射，如圖 1-1 所示。對照組和 LJP 組小鼠麻醉后放置相予照射劑量為 0Gy。照射完成后觀察并記錄明顯移動或死亡，上述情況視作造模失敗，將其剔除。

收集及處理完唾液的小鼠進行眼球采血；小鼠；要取血一側(cè)小鼠的胡須毛發(fā)；眼球根部，將其快速摘出；血液：收集量約為 1.2mL-1.8ml/只；血清：將血液于室溫靜置 4h 后離心，4000r/m，10清于滅菌的離心管中，-80℃冰箱保存。圖 1-2 唾液流速測量Figure 1-2 Saliva flow rate measurement
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R730.55;R78

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2 李

本文編號：2710222