發(fā)布時間：2020-06-12 01:39

【摘要】：第一部分miR-21、MMP-2和MMP-9在膿毒癥患者血漿中的表達(dá)水平及相關(guān)性分析目的:探討微小RNA-21(micro RNA-21,miR-21)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9在膿毒癥患者血漿中的表達(dá)水平及相關(guān)性分析,為探索膿毒癥診療新靶點(diǎn)提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:通過在GEO數(shù)據(jù)庫中檢索膿毒癥相關(guān)數(shù)據(jù)集,根據(jù)是否有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)及差異倍數(shù)(2),分析篩選差異表達(dá)mi RNA。選取膿毒癥患者(膿毒癥組)及健康志愿者(健康對照組)各40例作為研究對象,采用實(shí)時熒光定量PCR法和ELISA法檢測miR-21和MMP-2、MMP-9在膿毒癥組與健康對照組中的表達(dá)水平,并運(yùn)用Pearson分析膿毒癥患者血漿中miR-21和MMP-2、MMP-9的相關(guān)性。結(jié)果:最終入選的數(shù)據(jù)集為GSE94717,符合條件的差異表達(dá)mi RNA為miR-21(P0.05)。膿毒癥組患者血漿miR-21、MMP-2和MMP-9表達(dá)水平較健康對照組升高,且兩者呈正相關(guān)(r=0.464,P0.05;r=0.538,P0.05)。結(jié)論:膿毒癥患者血漿中miR-21與MMP-2、MMP-9蛋白高表達(dá),且呈正相關(guān),可能存在調(diào)控關(guān)系。第二部分miR-21對脂多糖誘導(dǎo)下RAW264.7細(xì)胞MMP-2和MMP-9表達(dá)的調(diào)控及機(jī)制目的:探討miR-21對脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激下RAW264.7細(xì)胞中MMP-2和MMP-9表達(dá)的調(diào)控及機(jī)制,進(jìn)一步研究miR-21在膿毒癥中的作用及機(jī)制。方法:對RAW264.7細(xì)胞給予10mg/ml LPS刺激,24h后采用實(shí)時熒光定量PCR法和ELISA法檢測miR-21和MMP-2、MMP-9在LPS組與對照組中的表達(dá)水平,并運(yùn)用Pearson分析miR-21和MMP-2、MMP-9的相關(guān)性。構(gòu)建外源性miR-21干擾的LPS刺激下RAW264.7細(xì)胞模型,采用Western blot檢測miR-21對MMP-2、MMP-9和TIMP-3蛋白表達(dá)影響。結(jié)果:LPS組miR-21、MMP-2和MMP-9表達(dá)水平較對照組上升,兩者呈正相關(guān)(P0.05)。通過miR-21模擬物(miR-21 mimic)外源性上調(diào)miR-21表達(dá),MMP-2、MMP-9表達(dá)升高,TIMP-3表達(dá)降低(P0.05);通過miR-21抑制劑(miR-21 inhibitor)抑制miR-21表達(dá),MMP-2、MMP-9表達(dá)降低,TIMP-3表達(dá)升高(P0.05)。結(jié)論:miR-21能促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞MMP-2和MMP-9表達(dá),其機(jī)制可能與靶向抑制TIMP-3有關(guān)。
【圖文】：

組別 miR-21（２－△△Ｃｔ）MMP-2 MMP-對照組 1.00±0.00 72.84±11.04 167.34±1毒癥組 1.83±0.31* 109.69±28.82* 384.60±61康對照組相比，* P＜0. 05 ，#P＜0. 01癥組患者血漿 MMP-2 和 MMP-9 蛋白表達(dá)升高組患者血漿，用 ELISA 方法檢測各組 MMP-2 和 MMP-9 的表達(dá)水平毒癥組患者血漿中 MMP-2 和 MMP-9 表達(dá)較健康對照組表達(dá)升高，差（P<0.05），見表 2.2。癥患者血漿 miR-21 與 MMP-2、MMP-9 水平的關(guān)系son 相關(guān)分析結(jié)果顯示膿毒癥組患者血漿中 miR-21 表達(dá)水平與 M平呈正相關(guān)（r=0.464，P<0.05; r=0.538，P<0.05）。

圖 2-2 膿毒癥組 miR-21 與 MMP-9 表達(dá)相關(guān)性分析Figure2-1 Correlation analysis between miR-21 and MMP-9 expression in sepsis gr癥是機(jī)體對感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合癥，其發(fā)病率高，病死率高病房的主要問題之一，，而通過早期診斷、有效干預(yù)治療能降低膿毒癥尋找能早期診療膿毒癥的標(biāo)志物和治療靶標(biāo)。本部分研究通過探討 MMP-2 和 MMP-9 的表達(dá)水平，并進(jìn)一步探索 miR-21 與 MMP-2系，尋找膿毒癥新的診斷標(biāo)志物和治療靶標(biāo)。癥組患者血漿 miR-21 表達(dá)升高反應(yīng)失衡是膿毒癥的中心環(huán)節(jié)。miRNA 是一類非編碼單鏈小分子 R 3’端結(jié)合抑制靶基因表達(dá)，在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)向調(diào)控基因表達(dá)，參與調(diào)
【學(xué)位授予單位】：右江民族醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R459.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 陶楊;肖玲;黃健;馬渝;;烏司他丁通過miR-21/p38MAPK通路對膿毒癥保護(hù)作用的研究[J];中華急診醫(yī)學(xué)雜志;2018年11期

本文編號：2708810