【摘要】：氨基酸在生命體中是不可或缺的一類物質,一些非必需氨基酸及其代謝物與人類某些疾病有一定的關聯性。酪氨酸與甘氨酸是人體中重要的非必需氨基酸,這兩種非必需氨基酸的代謝異常與某些疾病有一定的聯系。研究發(fā)現肝腎疾病、惡性腫瘤等疾病發(fā)生時,酪氨酸、甘氨酸的代謝會出現異常。因此,研究建立簡便、靈敏、快速的分析方法并運用到人體體液中酪氨酸、甘氨酸的代謝物分離與分析檢測,對某些疾病的輔助診斷、治療與監(jiān)測有著重要的現實意義。本文研究制備了相關的分子印跡聚合物,并用于人體體液中酪氨酸、甘氨酸的代謝物的分離富集,結合超高效液相色譜分析技術,構建了人體體液中酪氨酸、甘氨酸的代謝物分析新方法,并用于實際尿樣檢測,取得了滿意的效果。其主要研究成果如下:1.以對羥苯基乙酸為模板分子,1-乙烯基咪唑為功能單體,三甲基丙烷三丙烯酸酯為交聯劑,N-N偶氮二異丁腈為引發(fā)劑,乙腈為溶劑,采用沉淀聚合的方法,制備了對羥苯基乙酸分子印跡聚合物(PHPAA-MIP)。根據吸附動力學實驗探究了PHPAA-MIP吸附機理,評估了PHPAA-MIP的識別性能及其選擇性能。結果表明,PHPAA-MIP對尿樣中的對羥苯基乳酸、對羥苯基乙酸以及對羥苯基丙酸有較高的選擇吸附性能。2.建立了基于分子印跡聚合物分離富集-超高效液相色譜法測定人體尿液中的對羥苯基乳酸、對羥苯基乙酸和對羥苯基丙酸的分析新方法。尿樣稀釋一倍,經ENVI-C18柱除無機鹽,用PHPAA-MIP萃取目標分析物,最終的解吸液用UHPLC-FLD檢測。在優(yōu)化的萃取/解吸條件下,采用ZORBAX SB-C18快速分離柱,以50 mmol/L乙酸-乙酸銨(pH=5.3):乙腈=95:5(V/V)為流動相,流速為0.2 mL/min下分離,熒光檢測波長為λex=277 nm、λem=316 nm。三種分析物的檢測限和定量限分別為8.5×10~(-3)-2.8×10~(-2) mg/L與2.8×10~(-2)-9.3×10~(-2) mg/L,加標回收率為75.7%-110.3%,相對標準偏差小于15%。該方選擇性好,可用于尿液中三種酪氨酸的代謝產物的同時測定。3.以N-苯基甘氨酸為模板分子,丙烯酰胺為功能單體,三甲基丙烷三丙烯酸酯為交聯劑,N-N偶氮二異丁腈為引發(fā)劑,乙腈為溶劑,采用沉淀聚合法制備了分子印跡聚合物(NPG-MIP)。采用各種分析技術對所制備的聚合物進行了表征,并研究了該分子印跡聚合物的吸附特性。結果表明,NPG-MIP對目標分析物的吸附比NIP具有更好的親和性,對目標分析物的結構類似物選擇性差,印跡因子IF=4.7。該材料為從復雜樣品中(尿樣)分離NPG奠定了基礎。4.建立了基于分子印跡聚合物分離富集-超高效液相色譜法測定人體尿樣中N-苯基甘氨酸的分析新方法。尿樣稀釋20倍后,采用NPG-MIP印跡聚合物對尿樣進行前處理,UHPLC-DAD檢測其解吸液。在優(yōu)化萃取/解吸條件下,采用ZORBAX SB-C18快速分離柱,以20 mmol/L磷酸二氫鈉(pH=5.6):甲醇=90:10(V/V)為流動相,流速為0.2 mL/min下分離,紫外檢測波長為λ=239 nm。NPG的線性范圍在0.5-100 mg/L,檢測限與定量限分別為1.6×10~(-2) mg/L和5.5×10~(-2)mg/L,該方法的加標回收率高于84.7%,相對標準偏差小于11%。該方法對目標分析物具有較高的選擇性,為進一步探究甘氨酸的代謝與癌癥之間的關聯性提供了方法學基礎。
【圖文】：

是酪氨酸的重要代謝產物；N-苯基甘氨酸（N-phenylglycine, NPG）、N-巴豆酰基甘氨酸(N-Tigloylglycine, NTG)等是甘氨酸的代謝產物。它們的分子結構見圖 1.1。圖1.1 酪氨酸、甘氨酸及其代謝產物的分子結構式Fig.1.1 Molecular structure of glycine, tyrosine and its metabolites1.1.2 樣品前處理技術酪氨酸、甘氨酸及其代謝產物多存在血液、腦脊液、尿液等相關體液中。由于體液中的成分比較復雜，內源性物質多，，對目標物的分離及準確測量干擾大。又由于人體組織中酪氨酸、甘氨酸及其代謝產物的濃度本身較低，這就更加增大了目標分析物的檢測難度，同時，基質效應可能會造成某些物質無法檢測。因此，樣品前處理是非常重要的環(huán)節(jié)。目前，生物樣本分析的樣品前處理技術主要包括稀釋法、沉淀法、液-液萃取法、固相萃取法等。1. 直接稀釋法稀釋法是指使用合適稀釋劑將樣本稀釋一定程度，從而起到降低基質效應的作用。王小燕[23]等使用稀釋法測定人體體液中多種重金屬元素，測量結果重現性好，其加標回收率在 90％-120％之間。此分析方法雖簡便、回收率高、成本低

第二章 對羥苯基乙酸分子印跡聚合物的制備及其吸附性能研究劑，對羥苯基乙酸（0.3198g, 2.1mmol）為模板分子，1-乙烯基咪唑（760 μL,8.4mmol）為功能單體并置于 250 mL 圓底燒瓶中，攪拌 2 min。然后加入三甲基丙烷三丙烯酸酯（1275 μL, 4 mmol），超聲 5min。再加入引發(fā)劑 N-N 偶氮二異丁腈（0.0341 g, 0.2 mmol），通入氮氣 15 min后密封燒瓶，置于 60°C 水浴中反應12 h。聚合完成后，混合溶液以 5000 rpm 離心 15 min，丟棄上清液，將固體產物置于索氏提取儀中用甲醇：乙酸=9:1（v/v）溶液進行洗滌，3-4 天替換一次洗脫溶劑，直至檢測液中無對羥苯基乙酸為止。最后將溶劑換為甲醇洗去聚合物上殘余乙酸。所制備的 PHPAA-MIP 在 60℃環(huán)境中干燥 24 h，保存?zhèn)溆�。其制備流程如圖 2.1 所示。同時制備空白聚合物 NIP 作為對照，其制備方法同上，但不加模板分子。
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：O631.3;O657.72;R446.1

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本文編號：2696513