【摘要】：淋巴細(xì)胞活化基因-3(LAG-3)作為一種最新發(fā)現(xiàn)的腫瘤標(biāo)志物,優(yōu)先在多種腫瘤亞型與外周中表達(dá),對(duì)腫瘤早期診斷有重要價(jià)值。玉米赤霉烯酮(ZEA)通過真菌污染和水的傳播,可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,損傷DNA,從而對(duì)身體各個(gè)系統(tǒng)造成毒害。研發(fā)出一種具有高靈敏度和特異性的方法,不僅可以用于既可以檢測真菌毒素類的小分子物質(zhì),又可用于檢測蛋白質(zhì)類的大分子物質(zhì)至關(guān)重要。電化學(xué)免疫傳感器是將電化學(xué)技術(shù)與免疫技術(shù)相結(jié)合的一種新分析方法,該方法具有高靈敏性、反應(yīng)時(shí)間迅速、成本低、操作簡便等優(yōu)點(diǎn),且可用于現(xiàn)場快速檢查。重要的是可通過改變修飾物質(zhì),實(shí)現(xiàn)既可以檢測真菌毒素,又能檢測蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)。由此本文通過運(yùn)用不同免疫機(jī)制,構(gòu)建新型電化學(xué)免疫傳感器,實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤標(biāo)志物和真菌毒素的快速精準(zhǔn)檢測。課題的主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:一、基于中空納米骨架/AuPt合金的信號(hào)降低型電化學(xué)免疫傳感器用于靈敏檢測LAG-3蛋白首次將中空納米金屬有機(jī)骨架(HNM)復(fù)合材料用于信號(hào)降低型電化學(xué)免疫傳感器,超敏感定量檢測淋巴細(xì)胞活化基因-3(LAG-3)蛋白。利用SiO_2標(biāo)記的抗LAG-3抗體(SiO_2-Ab_2)和生物素-鏈霉素(SA)抗生物素蛋白系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)傳感器信號(hào)雙重放大。將負(fù)載二氧化錫的還原氧化石墨烯(rGO-SnO_2)與金鉑合金(AuPt)結(jié)合后,修飾到金屬有機(jī)框架(MOFs)表面,合成rGO-SnO_2/HNMs/AuPt作為基底。SiO_2-Ab_2作為信號(hào)減小的標(biāo)簽,具有大的空間位阻屬性�？贵w和抗原之間特異性識(shí)別后可用于提高電化學(xué)差值,從而提高傳感器的靈敏度。在這種信號(hào)遞減型傳感器中,可實(shí)現(xiàn)極低濃度的目標(biāo)物檢測。在最合適的實(shí)驗(yàn)條件下,構(gòu)建的電化學(xué)免疫傳感器待測物與電化學(xué)信號(hào)成反比關(guān)系,展現(xiàn)出靈敏度高(最低檢測限1.1 pg mL~(-1))、重現(xiàn)性與穩(wěn)定性好、特異性強(qiáng)以及檢測范圍寬(0.01 ng m~-11 to 1μg mL~(-1))等特點(diǎn)。同時(shí)可將構(gòu)架的超靈敏生物傳感器用于早期臨床腫瘤診斷中LAG-3蛋白的檢測。二、基于羧基化多壁碳納米管/殼聚糖電化學(xué)傳感器高靈敏檢測谷物和飼料中的玉米赤霉烯酮利用牛血清蛋白修飾的玉米赤霉烯酮(ZEA-BSA)共價(jià)結(jié)合殼聚糖修飾的羧基化的多壁碳納米管(cMWCNTs/Chit),然后將ZEA-BSA與待測濃度ZEA間接競爭過量的抗體ZEA。二抗是標(biāo)有堿性磷酸酶的兔抗人IgG,酶將底物1-萘基磷酸鹽分解產(chǎn)生1-萘酚,從而在工作電壓0.3 V時(shí)產(chǎn)生電化學(xué)信號(hào)。與傳統(tǒng)相比方法,構(gòu)建的免疫傳感器表現(xiàn)出較高水平敏感。在最佳的實(shí)驗(yàn)條件下,這種免疫測定可以定量10pg·mL~(-1)至1000 ng·mL~(-1)濃度的ZEA,最低檢測限為4.7 pg·mL~(-1)且檢測靈敏度高,電阻率為0.51μA·μM~(-1)·cm~(-2)。與現(xiàn)有的技術(shù)相比,本研究所構(gòu)建的信號(hào)競爭免疫傳感器特異度好、靈敏度高、成本較低、操作簡便,檢測周期短,并能適用于實(shí)際樣品的檢測,有望成為具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值的檢測ZEA的方法。
【圖文】：

圖 1.1 A: rGO-SnO2/HNMs/AuPt 制備過程 B: SiO2-Ab2制備過程C:電化學(xué)免疫傳感器檢測過程示意圖reparation of rGO-SnO2/HNMs/AuPt: B: Preparation of SiO2-Ab2: C: Sillustration of the stepwise assembly procedure of the sandwich

1.4A: SiO2的 SEM 圖像 B: UV-vis 光譜 Ab2(a), SiO2(b), and SiO2-Ab 1.4 (A) SEM of SiO2(B) UV-vis spectrums ofAb2(a), SiO2(b), and SiO2-修飾電極的電化學(xué)表征
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：TP212.2;R446.6

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本文編號(hào)：2696419