【摘要】：淋巴細胞活化基因-3(LAG-3)作為一種最新發(fā)現(xiàn)的腫瘤標志物,優(yōu)先在多種腫瘤亞型與外周中表達,對腫瘤早期診斷有重要價值。玉米赤霉烯酮(ZEA)通過真菌污染和水的傳播,可誘導細胞凋亡,損傷DNA,從而對身體各個系統(tǒng)造成毒害。研發(fā)出一種具有高靈敏度和特異性的方法,不僅可以用于既可以檢測真菌毒素類的小分子物質,又可用于檢測蛋白質類的大分子物質至關重要。電化學免疫傳感器是將電化學技術與免疫技術相結合的一種新分析方法,該方法具有高靈敏性、反應時間迅速、成本低、操作簡便等優(yōu)點,且可用于現(xiàn)場快速檢查。重要的是可通過改變修飾物質,實現(xiàn)既可以檢測真菌毒素,又能檢測蛋白質等大分子物質。由此本文通過運用不同免疫機制,構建新型電化學免疫傳感器,實現(xiàn)對腫瘤標志物和真菌毒素的快速精準檢測。課題的主要研究內容和結果如下:一、基于中空納米骨架/AuPt合金的信號降低型電化學免疫傳感器用于靈敏檢測LAG-3蛋白首次將中空納米金屬有機骨架(HNM)復合材料用于信號降低型電化學免疫傳感器,超敏感定量檢測淋巴細胞活化基因-3(LAG-3)蛋白。利用SiO_2標記的抗LAG-3抗體(SiO_2-Ab_2)和生物素-鏈霉素(SA)抗生物素蛋白系統(tǒng),實現(xiàn)傳感器信號雙重放大。將負載二氧化錫的還原氧化石墨烯(rGO-SnO_2)與金鉑合金(AuPt)結合后,修飾到金屬有機框架(MOFs)表面,合成rGO-SnO_2/HNMs/AuPt作為基底。SiO_2-Ab_2作為信號減小的標簽,具有大的空間位阻屬性�？贵w和抗原之間特異性識別后可用于提高電化學差值,從而提高傳感器的靈敏度。在這種信號遞減型傳感器中,可實現(xiàn)極低濃度的目標物檢測。在最合適的實驗條件下,構建的電化學免疫傳感器待測物與電化學信號成反比關系,展現(xiàn)出靈敏度高(最低檢測限1.1 pg mL~(-1))、重現(xiàn)性與穩(wěn)定性好、特異性強以及檢測范圍寬(0.01 ng m~-11 to 1μg mL~(-1))等特點。同時可將構架的超靈敏生物傳感器用于早期臨床腫瘤診斷中LAG-3蛋白的檢測。二、基于羧基化多壁碳納米管/殼聚糖電化學傳感器高靈敏檢測谷物和飼料中的玉米赤霉烯酮利用牛血清蛋白修飾的玉米赤霉烯酮(ZEA-BSA)共價結合殼聚糖修飾的羧基化的多壁碳納米管(cMWCNTs/Chit),然后將ZEA-BSA與待測濃度ZEA間接競爭過量的抗體ZEA。二抗是標有堿性磷酸酶的兔抗人IgG,酶將底物1-萘基磷酸鹽分解產生1-萘酚,從而在工作電壓0.3 V時產生電化學信號。與傳統(tǒng)相比方法,構建的免疫傳感器表現(xiàn)出較高水平敏感。在最佳的實驗條件下,這種免疫測定可以定量10pg·mL~(-1)至1000 ng·mL~(-1)濃度的ZEA,最低檢測限為4.7 pg·mL~(-1)且檢測靈敏度高,電阻率為0.51μA·μM~(-1)·cm~(-2)。與現(xiàn)有的技術相比,本研究所構建的信號競爭免疫傳感器特異度好、靈敏度高、成本較低、操作簡便,檢測周期短,并能適用于實際樣品的檢測,有望成為具有實際應用價值的檢測ZEA的方法。
【圖文】：

圖 1.1 A: rGO-SnO2/HNMs/AuPt 制備過程 B: SiO2-Ab2制備過程C:電化學免疫傳感器檢測過程示意圖reparation of rGO-SnO2/HNMs/AuPt: B: Preparation of SiO2-Ab2: C: Sillustration of the stepwise assembly procedure of the sandwich

1.4A: SiO2的 SEM 圖像 B: UV-vis 光譜 Ab2(a), SiO2(b), and SiO2-Ab 1.4 (A) SEM of SiO2(B) UV-vis spectrums ofAb2(a), SiO2(b), and SiO2-修飾電極的電化學表征
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：TP212.2;R446.6

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