【摘要】：背景阿爾茨海默病(AD)是癡呆最常見的原因,病因和發(fā)病機(jī)制尚不確切,臨床上缺少有效的治療方法。AD發(fā)病可能是環(huán)境和遺傳因素共同作用的結(jié)果,其中遺傳因素在AD中很關(guān)鍵。因此,基因檢測在AD病因研究中具有重要地位。了解AD發(fā)病相關(guān)的潛在基因,對于進(jìn)一步促進(jìn)臨床分子診斷有很大幫助。載脂蛋白E(ApoE)基因是目前世界范圍內(nèi)公認(rèn)與AD發(fā)病相關(guān)的基因。除此之外,也有認(rèn)為機(jī)體對酒精的代謝可能與AD發(fā)病有關(guān),而乙醇脫氫酶系(ADH)和乙醛脫氫酶系(ALDH)是酒精代謝過程中的關(guān)鍵酶。ADH及ALDH基因的多態(tài)性,已被證明與多種神經(jīng)退行性疾病的易感性有關(guān),但在不同地區(qū)、種族中得到的結(jié)論并不一致。內(nèi)蒙古自治區(qū)位于中國北部,是蒙古族和漢族居住較多的地方,內(nèi)蒙古地區(qū)的漢族與其他民族相比有不同的遺傳背景,可能在AD病因以及分子病理學(xué)方面與存在差異。內(nèi)蒙古地區(qū)氣候寒冷,漢族有不同的生活及飲食習(xí)慣,對酒精的攝入較多。因此,研究不同種族及人群AD的ADH和ALDH基因多態(tài)性有其臨床價(jià)值。目的1.通過檢測內(nèi)蒙古地區(qū)漢族人群中ApoE基因表達(dá),驗(yàn)證該人群中ApoE基因多態(tài)性與散發(fā)性阿爾茨海默病(sAD)發(fā)病的相關(guān)性。2.通過檢測內(nèi)蒙古地區(qū)漢族人群中ADH1B rs1229984基因多態(tài)性,了解該人群中ADH1B rs1229984與sAD的相關(guān)性,探討ADH1B rs1229984基因位點(diǎn)合并AD陽性家族史、酒精攝入與sAD發(fā)病的相關(guān)性。3.通過檢測內(nèi)蒙古地區(qū)漢族人群中ALDH2rs671基因多態(tài)性,了解該人群中ALDH2 rs671與sAD的相關(guān)性,探討ALDH2 rs671基因位點(diǎn)合并AD陽性家族史、酒精攝入與sAD發(fā)病的相關(guān)性。方法1.2015年3月到2017年10月期間,就診于內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院門診和住院的漢族sAD患者,以及與醫(yī)院協(xié)作的部分社區(qū)診斷漢族sAD患者作為病例組;募集社區(qū)健康人群作為對照組。登記人口學(xué)、既往病史、個(gè)人史和家族史以及酒精攝入量。2.收集全血標(biāo)本;提取ApoE、ADH1B和ALDH2的基因組DNA;測定DNA濃度和純度;對于ADH1B和ALDH2,進(jìn)行候選單核苷酸多態(tài)性(SNP)搜索;檢測基因型;基因擴(kuò)增、電泳;對基因頻率分布進(jìn)行Hardy-weinberg平衡檢測。3.為比較病例組和對照組之間的差異,t檢驗(yàn)人口統(tǒng)計(jì)學(xué)和臨床變量,χ2檢驗(yàn)分析各基因多態(tài)性位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率,比值比(OR)及其95%置信區(qū)間(CI)分析關(guān)聯(lián)強(qiáng)度;通過Logistic回歸模型分析各不同基因多態(tài)位點(diǎn)的基因型內(nèi)蒙古地區(qū)漢族sAD風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性,Spearman相關(guān)系數(shù)分析ADH1B rs1229984、ALDH2 rs671與AD陽性家族史、酒精攝入對AD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加的相關(guān)性。結(jié)果1.共募集到漢族人群sAD患者503例,對照組384例。病例組文化程度更低(P= 0.045);AD陽性家族史和酒精攝入的比例更高(P0.05);兩組在性別構(gòu)成、平均年齡、吸煙、高血壓、糖尿病和腦卒中比例上無差異(P0.05)。2.在病例組和對照組,ApoE rs429358 和 rs7421、ADH1B rs1229984 和 ALDH2 rs671基因多態(tài)位點(diǎn)的基因頻率分布符合Hardy-weinberg平衡定律,說明其SNP群體代表性良好。3.在病例組和對照組,ApoE ε2、ε3和ε4這3種等位基因的分布頻率有差異(χ2= 66.290,P = 0.000),ε3 的頻率最高(χ2 = 73.355,P = 0.000);等位基因形成的6種基因型分布有差異(χ2=73.355,P = 0.000)。病例組ApoE ε4(+)頻率高于對照組(χ2 = 67.283,P = 0.000),ApoE ε4增加sAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR 4.20,95%CI 2.93～6.00)。4.內(nèi)蒙古漢族 sAD 中,ADH1Brs 1229984 基因型(χ2 =7.136,P = 0.028)和等位基因(χ2 = 4.308,= 0.038)的分布頻率有差異;等位基因A增加sAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR1.24,95%CI1.01～1.53)。ApoEε4分層后,ε4(+)亞組中,該位點(diǎn)基因型在病例組和對照組之間的分布有差異(χ2= 8.484,P=0.014),等位基因分布無差異。5.內(nèi)蒙古漢族sAD中,ALDH2rs671基因型(χ2= 14.662,P=0.001)和等位基因(χ2= 12.092,P = 0.001)的分布頻率有差異;等位基因A增加sAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR1.43,95%CI1.17～1.75)。ApoEε4 分層后,ApoEε4(+)亞組中,該位點(diǎn)基因型(χ2 = 6.185,P = 0.045)和等位基因(χ2= 5.430,P = 0.02)在病例組和對照組之間的分布有差異;ApoEε4(-)亞組中,基因型(χ2 =10.789,P=0.005)和等位基因(χ2= 7.909,P=0.005)的頻率也有差異。6.ADH1B rs1229984(OR 2.54,95%CI 1.19～5.41)和 ALDH rs671(OR 4.57,95%CI1.60～14.01)的GG、GA、AA三種基因型中,病例組AA分布顯著高于對照組。在ADH1B和ALDH,其GG/GA+AA即顯性的OR值分別為1.78 和 1.79,95%CI 分別為 1.09～2.93 和 1.08～2.97;GG+GA/AA 即隱性的OR值分別為2.33和4.17,95%CI分別為1.18-4.47和1.49～12.67——提示兩種模型都與增加內(nèi)蒙古漢族sAD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。7.Spearman 相關(guān)系數(shù)分析顯示,ADH1B rs1229984、ALDH rs671 合并 AD 陽性家族史、酒精攝入者,均增加sAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(P0.05)。結(jié)論1.在內(nèi)蒙古地區(qū)的漢族人群,ApoE基因與sAD發(fā)病相關(guān),ApoEε4可能增加sAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。2.在內(nèi)蒙古地區(qū)的漢族人群,ADH1B rs1229984基因位點(diǎn)與sAD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān);ApoE基因可能增加ADH1B基因?qū)AD的作用;ADH1B rs1229984基因位點(diǎn)AA基因型可能增加sAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),其顯性和隱性兩種模型都與增加sAD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān);ADH1B rs1229984合并AD陽性家族史和酒精攝入者的sAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加。3.在內(nèi)蒙古地區(qū)的漢族人群,ALDH2rs671基因位點(diǎn)與sAD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān);ApoE基因可能增加ALDH2基因?qū)?nèi)蒙古漢族sAD的作用。ALDH2 rs671基因位點(diǎn)AA基因型可能增加sAD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),其顯性和隱性兩種模型都與增加sAD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān);ALDH2 rs671合并AD陽性家族史、酒精攝入者的sAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加。
【圖文】：

結(jié)果逡逑１基因組ＤＮＡ提取逡逑血液基因組ＤＮＡ提取，經(jīng)電泳檢測結(jié)果如圖２－１所示。從電泳圖中可以看逡逑出所提取的基因組ＤＮＡ條帶完整，沒有降解，提取成功，可以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。逡逑Ｍｓｔｅ邐ＰsE邋ｍｉ邐ＰａｔｍｓＳ邐ＰｓｉｉｅｒｉＳ逡逑＾邋，逡逑ｌ：邐漏逡逑４＜＿邐ｒ邐懰＾３邋ＡＤＨ１Ｂｒｓｌ２２９９８４逡逑２0＜％邐；ｇＨ逡逑圖２－１邋ＡＤＨ１Ｂ基因ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)酶切后瓊脂糖凝膠電泳圖逡逑２邋ＡＤＨ１Ｂ基因多態(tài)性頻率分布逡逑內(nèi)蒙古漢族ｓＡＤ樣本中，ＡＤＨ１Ｂ邋ｒｓ邋１２２９９８４基因型和等位基因分布頻率，，逡逑在病例組和對照組之間存在差異（表２－１）。逡逑２７逡逑

結(jié)果逡逑１基因組ＤＮＡ提取逡逑血液基因組ＤＮＡ提取，經(jīng)電泳檢測結(jié)果如圖３－１所示。從電泳圖中可以看逡逑出所提取的基因組ＤＮＡ條帶完整，沒有降解，提取成功，可以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。逡逑Ｍａｒｋｅｒ邋１邐２邐３邐４邐５邐６逡逑Ｊ邋Ｉ逡逑２0，邋＾邋■逡逑圖３－１邋ＡＬＤＨ２基因ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)酵切后瓊脂糖凝膠電泳圖逡逑２邋ＡＤＨ１Ｂ基因多態(tài)性頻率分布逡逑內(nèi)蒙古漢族ｓＡＤ樣本中，ＡＬＤＨ２ｒｓ６７１基因型和等位基因分布頻率，在病逡逑例組和對照組之間有差異（表３－１）。逡逑４０逡逑
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R749.16;R440

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本文編號(hào)：2681592