【摘要】：目的:膿毒血癥(Sepsis)是感染引起的宿主反應失調(diào),且危及生命的器官功能障礙的一種臨床綜合征,通常繼發(fā)于嚴重感染、缺血再灌注損傷、創(chuàng)傷、休克等。細菌性膿毒血癥的主要致病因素是內(nèi)毒素,由各種病原菌主要是革蘭氏陰性菌侵入機體后裂解釋放。內(nèi)毒素的主要成分是脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),它可促進炎性細胞釋放大量的炎性因子,導致全身炎癥反應瀑布式爆發(fā),進而引起多器官功能障礙。膿毒血癥病情進展迅速,病死率達到20%。膿毒血癥合并心臟功能障礙稱為膿毒血性心肌病(sepsis-induced cardiomyopathy;SIC),SIC病情兇險,死亡率達70%。關于SIC的研究雖不斷深入,但其發(fā)病機制仍未明確。血管內(nèi)皮細胞(Endothelial Cell,EC)遍布于全身血管內(nèi)面,維持血液正常流動,同時也是血管壁重要的天然屏障。當機體受到各種傷害刺激時,如感染、缺血再灌注、創(chuàng)傷、休克等,EC是最先受到侵犯的細胞,致病因素突破血管內(nèi)膜后對全身各組織器官產(chǎn)生影響。EC在受到刺激后會釋放攜帶蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸等生物活性物質(zhì)的細胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs),EVs介導細胞之間的信息交流,其中外泌體(exosomes)受到廣泛關注。外泌體作為EVs的一個亞型,直徑約40-100nm,可攜帶微小RNA(microRNAs,miRNAs)。人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)miRNAs對心肌細胞的功能存在調(diào)控作用,并對其作用機制有一定的研究。本實驗旨在探索膿毒血癥時內(nèi)皮源性外泌體所攜帶的miRNAs與心臟功能障礙的關系及機制。方法:我們采用酶消化法培養(yǎng)Sprague-Dawley大鼠胸主動脈EC,以LPS刺激EC,對照組用PBS代替LPS。6小時后,收集兩組EC,采用miRNA測序篩選出差異性表達的miRNAs(FC1.5,P0.05)。檢測發(fā)現(xiàn)LPS刺激后EC的miR-155-5p表達顯著增高。通過低溫差速離心法聯(lián)合聚乙二醇沉淀法獲取內(nèi)皮源性外泌體,檢測發(fā)現(xiàn)LPS刺激后EC源性外泌體中miR-155-5p表達也顯著增高。原代培養(yǎng)乳鼠心肌細胞(cardiomyocytes,CMC),通過脂質(zhì)體轉染法將miRNA-155-5p轉染至CMC,檢測CMC中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和BAX/BCL-2蛋白相對表達量,CCK-8檢測細胞活性,評估CMC氧化應激水平和細胞損傷程度。結果:1、通過膠原酶消化法分離及培養(yǎng)出的血管EC成熟度、活性及純度均滿足實驗要求。通過胰蛋白酶聯(lián)合II型膠原酶消化法,得到穩(wěn)定可靠的、純度高、活力強的CMC。2、低溫差速離心法聯(lián)合聚乙二醇沉淀法所提取的外泌體,純度高、活性好,經(jīng)電鏡鑒定具有典型的外泌體特征。3、EC在LPS刺激下高表達多種microRNAs,其中miR-155-5p可通過外泌體釋放到細胞外。4、在體外實驗中,miR-155-5p介導乳鼠CMC的氧化應激且促進凋亡。結論:血管EC在受到LPS刺激時可產(chǎn)生富含miR-155-5p的外泌體,外泌體通過旁分泌作用或外周循環(huán)到達并作用于CMC,介導膿毒血癥時CMC氧化應激并促進凋亡,這可能是膿毒性心肌病的重要原因。
【圖文】：

圖 2.SD 大鼠胸主動脈內(nèi)皮細胞免疫熒光染色結果（標尺：20μm）Figure.2. Immunofluorescence of SD rat thoracic aortic endothelial cells(bar:20μm)1.2 乳鼠心肌細胞（1）心肌細胞形態(tài)學觀察在倒置顯微鏡下可見，剛分離出來的心肌細胞大多數(shù)為懸浮的不貼壁的圓球形，可見極少數(shù)的不規(guī)則形細胞；培養(yǎng) 24 小時后心肌細胞逐漸貼壁生長，呈梭形或多邊形，折光度較強；培養(yǎng) 48h 后已貼壁的心肌細胞伸出偽足相互連接呈細胞簇（圖 3）。

圖 3.乳鼠心肌細胞（標尺：10μm）Figure.3. Neonatal rat cardiomyocytes (bar:10μm)（2）心肌細胞的鑒定熒光顯微鏡下可見心肌細胞內(nèi)的綠色骨架和藍色熒光的細胞核，，肌橫紋呈不規(guī)形，熒光分布一致，即分離培養(yǎng)的細胞為
【學位授予單位】：西南醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R459.7

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉國信;張小社;;謹防奶牛產(chǎn)后敗血癥和膿毒血癥[J];汕頭科技;2007年04期

2 肖煥舜;陳思;張溫瀾;鐘旋;黃珊;余丹峰;羅毅平;;血漿游離血紅蛋白與孕產(chǎn)婦膿毒血癥預后的研究[J];世界最新醫(yī)學信息文摘;2019年55期

3 葉萃英;趙昕峰;洪書遲;陳東;吳亦棟;;血清淀粉樣蛋白A、超敏C-反應蛋白、降鈣素原在小兒膿毒血癥中的診斷價值[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2019年14期

4 王彩虹;秦君玫;;68例膿毒血癥患者的監(jiān)護體會[J];當代護士(上旬刊);2018年01期

5 楊慶良;張會清;;25例輸尿管軟鏡碎石術并發(fā)尿源性膿毒血癥的相關危險因素分析[J];世界最新醫(yī)學信息文摘;2018年15期

6 李鋒;左其明;張佼;張玉玲;熊濤;;輸尿管軟鏡碎石術后尿膿毒血癥的臨床調(diào)查[J];中國臨床研究;2018年06期

7 趙群;鄒圣強;章晉輝;周田田;王保榮;;老年膿毒血癥患者淋巴細胞水平的變化[J];中國老年學雜志;2018年15期

8 孫玉新;;早期護理對小兒膿毒血癥的影響研究[J];中國醫(yī)藥指南;2018年26期

9 周彎;李睿博;薛宏斌;;血清PCT水平的變化對燒傷合并膿毒血癥患者的診療意義[J];世界最新醫(yī)學信息文摘;2018年86期

10 徐鳳霞;黃瑞怡;歐陽伶;;集束化護理對幼兒膿毒血癥并發(fā)癥的影響[J];臨床醫(yī)學工程;2016年11期

相關會議論文 前10條

1 崔曙;楊文;魯棟梁;;經(jīng)皮腎鏡碎石取石術后尿源性膿毒血癥的防治及療效觀察[A];中國中西醫(yī)結合學會泌尿外科專業(yè)委員會第十四次全國學術會議暨2016年廣東省中西醫(yī)結合學會泌尿外科專業(yè)委員會學術年會論文集[C];2016年

2 郭媛;;尿源性膿毒血癥的護理[A];中國中西醫(yī)結合學會泌尿外科專業(yè)委員會第十四次全國學術會議暨2016年廣東省中西醫(yī)結合學會泌尿外科專業(yè)委員會學術年會論文集[C];2016年

3 譚獻琴;;尿源性膿毒血癥的護理[A];中國中西醫(yī)結合學會泌尿外科專業(yè)委員會第十四次全國學術會議暨2016年廣東省中西醫(yī)結合學會泌尿外科專業(yè)委員會學術年會論文集[C];2016年

4 車憲平;徐磊;陳化磊;古軍;胡鑫明;張國慶;何書明;陳寧;張善斌;符仕寶;李德勝;肖勁逐;;尿源性膿毒血癥的診斷、治療和預防(附30例報告)[A];中國中西醫(yī)結合學會泌尿外科專業(yè)委員會第十四次全國學術會議暨2016年廣東省中西醫(yī)結合學會泌尿外科專業(yè)委員會學術年會論文集[C];2016年

5 崔曙;楊文;魯棟梁;;經(jīng)皮腎鏡碎石取石術后尿源性膿毒血癥的防治及療效觀察[A];第十一次全國中西醫(yī)結合男科學術大會暨重慶市中西醫(yī)結合學會2016年男科學術大會論文集[C];2016年

6 趙雪頻;;小兒膿毒血癥332例臨床分析[A];第十三屆江浙滬兒科學術會議暨2016年浙江省醫(yī)學會兒科學學術年會論文匯編[C];2016年

7 余敏;;重癥腦卒中合并膿毒血癥[A];中華醫(yī)學會第十八次全國神經(jīng)病學學術會議論文匯編（下）[C];2015年

8 劉娜;王淑華;王敏;;病毒性膿毒血癥的診斷在手足口病診治中的意義[A];中國中藥雜志2015/專集：基層醫(yī)療機構從業(yè)人員科技論文寫作培訓會議論文集[C];2016年

9 崔微艷;陸潔;鄒靜蓉;何玉峰;;63例重癥膿毒血癥的臨床分析[A];第六屆全國中西醫(yī)結合災害醫(yī)學學術會議學術論文集[C];2010年

10 俞洪元;;尿膿毒血癥[A];2012浙江省醫(yī)學會男科學、泌尿外科學術年會論文匯編[C];2012年

相關重要報紙文章 前10條

1 本報記者 東辰;禮來膿毒血癥新藥獲準歐洲上市[N];中國高新技術產(chǎn)業(yè)導報;2002年

2 李楠;早期復蘇可降低膿毒血癥死亡率[N];健康報;2006年

3 胡棟才;防治燒傷感染性膿毒血癥的探討[N];健康報;2015年

4 山西省陽城縣畜牧局 劉國信;奶牛產(chǎn)后須防敗血癥和膿毒血癥[N];河北科技報;2015年

5 ;謹防奶牛產(chǎn)后敗血癥和膿毒血癥[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2006年

6 紫箕;禮來遭遇“Xigris門”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

7 力信 小濤;生物工程點石成金 人體蛋白也成良藥[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

8 通訊員 湯江峰邋卜平元;燒傷患者要到正規(guī)醫(yī)院治療[N];家庭醫(yī)生報;2008年

9 本報記者 孫晨 中國金藥網(wǎng)聯(lián)合報道;“第一”——禮來追求的競爭高標[N];中國高新技術產(chǎn)業(yè)導報;2002年

10 鄧曉洪;集成式創(chuàng)新：突破傳統(tǒng)治療模式[N];成都日報;2011年

相關博士學位論文 前9條

1 胡明;輸尿管結石進展為尿膿毒血癥的列線圖預測模型的建立、優(yōu)化與驗證[D];南方醫(yī)科大學;2019年

2 楊毅;漢族人群線粒體基因單倍型類群與重度膿毒血癥發(fā)病和預后的相關性研究[D];浙江大學;2008年

3 王傳清;載脂蛋白E及其模擬肽對細菌感染性疾病診斷和治療作用及機制研究[D];復旦大學;2012年

4 李衛(wèi)濱;重組人FcγRI核酸適配子的體外篩選及其在膿毒血癥實驗診斷中的應用研究[D];第二軍醫(yī)大學;2016年

5 張澤英;C5aR介導LPS誘導的腎膿毒血癥以及腎I/R損傷機制的研究[D];湖北大學;2016年

6 羅汝斌;烏司他丁對膿毒血癥腎損傷腎小球血管內(nèi)皮糖萼的保護作用及分子機制研究[D];浙江大學;2015年

7 謝俊然;羥乙基淀粉130/0.4對膿毒血癥大鼠全身抗炎作用及相關機制研究[D];浙江大學;2010年

8 唐e

本文編號：2674876