【摘要】：背景:血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)基因作為高血壓、心腦血管疾病的候選基因,近年來受到了廣泛的關(guān)注。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)是腎素-血管緊張素系統(tǒng)的重要組成部分。研究顯示,ACE基因插入/缺失多態(tài)性與高血壓患者的用藥療效及心腦血管疾病的遺傳易感性有很大關(guān)系。因此,檢測(cè)ACE基因多態(tài)性可以對(duì)不同基因型的高血壓患者進(jìn)行指導(dǎo)用藥,同時(shí)還可以對(duì)心腦血管疾病進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)及預(yù)防。目的:基于金磁微粒層析系統(tǒng)建立多樣本類型ACE基因快速分型檢測(cè)方法,對(duì)該方法進(jìn)行系統(tǒng)性性能評(píng)估,結(jié)合測(cè)序及瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)方法評(píng)價(jià)該方法學(xué)的準(zhǔn)確性及適用性;以期利用該檢測(cè)方法檢測(cè)高血壓患者的ACE基因型并對(duì)其進(jìn)行指導(dǎo)用藥,同時(shí)利用該檢測(cè)方法開展冠心病和腦卒中臨床樣本與該基因位點(diǎn)的關(guān)聯(lián)分析研究,探討ACE基因插入/缺失多態(tài)性與兩者之間的關(guān)聯(lián)性。方法及主要研究結(jié)果:1、針對(duì)ACE基因插入、缺失片段分別設(shè)計(jì)特異引物,對(duì)其進(jìn)行篩選、標(biāo)記,建立ACE基因DNA分型檢測(cè)方法,對(duì)檢測(cè)體系進(jìn)行優(yōu)化,利用測(cè)序及瓊脂糖凝膠電泳分型的方法做對(duì)比進(jìn)行了臨床樣本驗(yàn)證,并完成了該方法學(xué)的性能評(píng)估。該檢測(cè)方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏,完成簡(jiǎn)單的PCR擴(kuò)增后層析2~5 min即可實(shí)現(xiàn)目視化判讀。2、在ACE基因DNA分型方法建立的基礎(chǔ)上,以全血為模板建立ACE基因全血直擴(kuò)檢測(cè)方法,對(duì)檢測(cè)體系進(jìn)行優(yōu)化,利用測(cè)序及瓊脂糖凝膠電泳分型的方法做對(duì)比進(jìn)行了臨床樣本的驗(yàn)證,并完成了該方法學(xué)的性能評(píng)估。ACE基因全血直擴(kuò)體系的建立,省去了提取核酸的繁瑣步驟,避免了核酸樣本提取過程中樣本交叉污染的風(fēng)險(xiǎn),整個(gè)檢測(cè)過程約1小時(shí)20分,具有很大的臨床應(yīng)用價(jià)值。3、以健康臨床樣本為對(duì)照組、冠心病(CAD)和缺血性腦卒中(IS)臨床樣本為病例組,用建立的ACE基因分型方法進(jìn)行基因型檢測(cè),對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。研究結(jié)果顯示,ACE等位基因和基因型頻率分布在對(duì)照組與CAD組和IS組都沒有顯著差異。分析原因可能是冠心病和腦卒中是一種復(fù)雜的多基因疾病,需要多個(gè)相關(guān)基因位點(diǎn)的聯(lián)合分析提供更詳細(xì)的信息,為研究ACE基因多態(tài)性與腦卒中及冠心病之間遺傳易感性提供臨床參考依據(jù)。
【圖文】：

西北大學(xué)碩士學(xué)位論文向流的作用下會(huì)沿著硝酸纖維素膜向上層析會(huì)依次經(jīng)過檢測(cè)線（T lineC line）；若有擴(kuò)增的目的產(chǎn)物存在時(shí)，PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物就會(huì)同時(shí)含有生這兩種標(biāo)記，地高辛?xí)扰c結(jié)合墊上金磁微粒偶聯(lián)的地高辛單抗進(jìn)行特接著標(biāo)記有生物素的一端再與 T 線處的鏈親和素進(jìn)行結(jié)合形成復(fù)合物使析試紙條 T 線處大量聚集，，形成可目視化的紅色條帶，即為陽(yáng)性結(jié)果。度與 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)生的目的產(chǎn)物的多少成正比，即 PCR 擴(kuò)增的目的產(chǎn)物越越多的金磁微粒偶聯(lián)的地高辛單抗，層析試紙條 T 線處的紅色條帶就有目的產(chǎn)物存在時(shí)，就不能在層析試紙條 T 線處形成紅色條帶，這時(shí)為析試紙條結(jié)合墊上金磁微粒偶聯(lián)的地高辛單抗一般都是過量的，所以無目的產(chǎn)物，當(dāng)層析到 C 線處時(shí)，未結(jié)合的地高辛單抗便會(huì)與 C 線處的IgG 進(jìn)行結(jié)合，在 C 線處顯示紅色條帶，所以 C 線能夠保證層析系統(tǒng)的

引物合成 Invitrogen Trading company全血基因組 DNA 提取試劑盒 西安金磁納米生物技術(shù)有限公司層析試紙條 西安金磁納米生物技術(shù)有限公司 實(shí)驗(yàn)方法.3.1 測(cè)序引物的設(shè)計(jì)從 NCBI db SNP 數(shù)據(jù)庫(kù)中查詢 ACE 基因 17 號(hào)染色體 16 號(hào)內(nèi)含子缺失位置及其近的側(cè)翼序列并下載下來，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[91]確定插入的具體片段和大小，以及缺失列的位置之后，用引物設(shè)計(jì)軟件 Primer Premier 5.0 設(shè)計(jì)外圍引物，并用 BLAST 對(duì)計(jì)的引物進(jìn)行序列比對(duì)，檢驗(yàn)引物特異性。然后把設(shè)計(jì)好的引物送由專門的公司進(jìn)合成。文獻(xiàn)中報(bào)道的具體插入序列如圖 2-2 所示，設(shè)計(jì)的外圍引物如表 2-1 所示。
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R440

【參考文獻(xiàn)】

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1 國(guó)雪;石曉明;趙曉云;周曉梅;邢邯英;宋光耀;;PAI-1啟動(dòng)子區(qū)4G/5G基因多態(tài)性、ACE插入/缺失多態(tài)性與腦卒中的相關(guān)性[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2011年11期

2 李娜;郭淑霞;;血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因多態(tài)性及其與心腦血管病的關(guān)系[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2007年12期

3 趙云,馬力宏;ACE基因多態(tài)性的遺傳學(xué)研究進(jìn)展及其在運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J];天津體育學(xué)院學(xué)報(bào);2000年02期

本文編號(hào)：2673057