【摘要】：背景:血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)基因作為高血壓、心腦血管疾病的候選基因,近年來受到了廣泛的關注。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)是腎素-血管緊張素系統(tǒng)的重要組成部分。研究顯示,ACE基因插入/缺失多態(tài)性與高血壓患者的用藥療效及心腦血管疾病的遺傳易感性有很大關系。因此,檢測ACE基因多態(tài)性可以對不同基因型的高血壓患者進行指導用藥,同時還可以對心腦血管疾病進行風險預測及預防。目的:基于金磁微粒層析系統(tǒng)建立多樣本類型ACE基因快速分型檢測方法,對該方法進行系統(tǒng)性性能評估,結(jié)合測序及瓊脂糖凝膠電泳檢測方法評價該方法學的準確性及適用性;以期利用該檢測方法檢測高血壓患者的ACE基因型并對其進行指導用藥,同時利用該檢測方法開展冠心病和腦卒中臨床樣本與該基因位點的關聯(lián)分析研究,探討ACE基因插入/缺失多態(tài)性與兩者之間的關聯(lián)性。方法及主要研究結(jié)果:1、針對ACE基因插入、缺失片段分別設計特異引物,對其進行篩選、標記,建立ACE基因DNA分型檢測方法,對檢測體系進行優(yōu)化,利用測序及瓊脂糖凝膠電泳分型的方法做對比進行了臨床樣本驗證,并完成了該方法學的性能評估。該檢測方法簡便、快速、靈敏,完成簡單的PCR擴增后層析2~5 min即可實現(xiàn)目視化判讀。2、在ACE基因DNA分型方法建立的基礎上,以全血為模板建立ACE基因全血直擴檢測方法,對檢測體系進行優(yōu)化,利用測序及瓊脂糖凝膠電泳分型的方法做對比進行了臨床樣本的驗證,并完成了該方法學的性能評估。ACE基因全血直擴體系的建立,省去了提取核酸的繁瑣步驟,避免了核酸樣本提取過程中樣本交叉污染的風險,整個檢測過程約1小時20分,具有很大的臨床應用價值。3、以健康臨床樣本為對照組、冠心病(CAD)和缺血性腦卒中(IS)臨床樣本為病例組,用建立的ACE基因分型方法進行基因型檢測,對結(jié)果進行統(tǒng)計分析。研究結(jié)果顯示,ACE等位基因和基因型頻率分布在對照組與CAD組和IS組都沒有顯著差異。分析原因可能是冠心病和腦卒中是一種復雜的多基因疾病,需要多個相關基因位點的聯(lián)合分析提供更詳細的信息,為研究ACE基因多態(tài)性與腦卒中及冠心病之間遺傳易感性提供臨床參考依據(jù)。
【圖文】：

西北大學碩士學位論文向流的作用下會沿著硝酸纖維素膜向上層析會依次經(jīng)過檢測線（T lineC line）；若有擴增的目的產(chǎn)物存在時，PCR 擴增產(chǎn)物就會同時含有生這兩種標記，地高辛會先與結(jié)合墊上金磁微粒偶聯(lián)的地高辛單抗進行特接著標記有生物素的一端再與 T 線處的鏈親和素進行結(jié)合形成復合物使析試紙條 T 線處大量聚集，，形成可目視化的紅色條帶，即為陽性結(jié)果。度與 PCR 擴增產(chǎn)生的目的產(chǎn)物的多少成正比，即 PCR 擴增的目的產(chǎn)物越越多的金磁微粒偶聯(lián)的地高辛單抗，層析試紙條 T 線處的紅色條帶就有目的產(chǎn)物存在時，就不能在層析試紙條 T 線處形成紅色條帶，這時為析試紙條結(jié)合墊上金磁微粒偶聯(lián)的地高辛單抗一般都是過量的，所以無目的產(chǎn)物，當層析到 C 線處時，未結(jié)合的地高辛單抗便會與 C 線處的IgG 進行結(jié)合，在 C 線處顯示紅色條帶，所以 C 線能夠保證層析系統(tǒng)的

引物合成 Invitrogen Trading company全血基因組 DNA 提取試劑盒 西安金磁納米生物技術(shù)有限公司層析試紙條 西安金磁納米生物技術(shù)有限公司 實驗方法.3.1 測序引物的設計從 NCBI db SNP 數(shù)據(jù)庫中查詢 ACE 基因 17 號染色體 16 號內(nèi)含子缺失位置及其近的側(cè)翼序列并下載下來，根據(jù)文獻報道[91]確定插入的具體片段和大小，以及缺失列的位置之后，用引物設計軟件 Primer Premier 5.0 設計外圍引物，并用 BLAST 對計的引物進行序列比對，檢驗引物特異性。然后把設計好的引物送由專門的公司進合成。文獻中報道的具體插入序列如圖 2-2 所示，設計的外圍引物如表 2-1 所示。
【學位授予單位】：西北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R440

【參考文獻】

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1 國雪;石曉明;趙曉云;周曉梅;邢邯英;宋光耀;;PAI-1啟動子區(qū)4G/5G基因多態(tài)性、ACE插入/缺失多態(tài)性與腦卒中的相關性[J];基礎醫(yī)學與臨床;2011年11期

2 李娜;郭淑霞;;血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因多態(tài)性及其與心腦血管病的關系[J];中國組織工程研究與臨床康復;2007年12期

3 趙云,馬力宏;ACE基因多態(tài)性的遺傳學研究進展及其在運動醫(yī)學中的應用[J];天津體育學院學報;2000年02期

本文編號：2673057