【摘要】：目的制備輻射誘導大鼠腦損傷(RBI)模型,給予3-甲基腺嘌呤側腦室注射,進行水迷宮實驗,觀察小膠質細胞自噬及小膠質細胞活性的變化,并且觀察輻射后神經元凋亡變化。旨在探討輻射性腦損傷小膠質細胞自噬對認知功能障礙的影響。方法取36只體質量為180-200g的Sprague Dawle大鼠,進行4天的Morris水迷宮訓練。訓練完成后隨機分為Sham組、Model組及3-MA(3-Methyladenine,3-MA)組。其中,Model組及3-MA組經腹麻醉,固定大鼠,在20Gy的X線下性全腦照射,照射完成,Model組通過側腦室注射NaCl 5μL,3-MA組側腦室注射3-甲基腺嘌呤600nmol(0.9%NaCl稀釋至終體積5μL)。繼續(xù)飼養(yǎng)8周,Morris水迷宮進行學習、記憶能力測評。斷頭取腦,HE染色觀察大鼠同側海馬組織病理變化。免疫組化法分別檢測同側海馬區(qū)NeuN陽性神經元和Iba-1陽性小膠質細胞的形態(tài)和數量變化;免疫印跡法觀察NeuN和Iba-1蛋白以及凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax的變化情況。Iba-1及LC3雙重熒光染色評定小膠質細胞自噬的改變。TUNEL染色法檢測海馬區(qū)細胞凋亡情況。ELISA檢測TNF-α、IL-6水平評估海馬區(qū)炎癥反應。結果1 Morris水迷宮:與Sham組相比,Model組大鼠水迷宮定位航行實驗及空間探索實驗表現不佳,而3-MA組較Model組有所改善,差異有統計學意義(P0.05)。2 HE染色:與Sham組相比,Model組可見較明顯的核固縮,錐體束結構紊亂。而3-MA組較Model組變化較輕。3 IHC染色:(1)NeuN:Model組正常神經元數量明顯減少;3-MA組正常神經元較Model組增多,差異有統計學意義(P0.01)。(2)Iba-1:RBI后8周,Model組活化的小膠質細胞明顯增多;3-MA組活化的小膠質細胞較Model組減少,差異有統計學意義(P0.05)。4 Iba-1/LC3 IF染色:Sham組有一些LC3陽性細胞,表明正常腦組織小膠質細胞自噬活性。RBI后8周,Model組LC3表達明顯上調,3-MA組LC3表達較Model組下調。差異有統計學意義(P0.05)。5 Western blot:與Sham組相比,Model組Iba-1、Bax、Arg-1表達明顯上調,與Model組相比,3-MA組Iba-1、Bax、Arg-1表達有所下降,差異有統計學意義(P0.05)。相比Sham組,Model組NeuN、Bcl-2表達明顯下調,與Model組相比,3-MA組NeuN、Bcl-2表達有所上調,差異有統計學意義(P0.05)。與Model組相比3-MA組Arg-1表達明顯上調。6TUNEL染色:與Sham組相比,Model組細胞凋亡明顯上調,與Model組相比,3-MA組凋亡細胞明顯減少,差異有統計學意義(P0.05)。7 ELISA檢測:RBI后8周,各組大鼠炎癥變化雖有趨勢,但并無統計學差異。結論1 3-MA可明顯改善輻射后大鼠的神經損傷和認知障礙。2 3-MA可減少Iba-1的表達,抑制小膠質細胞自噬水平及小膠質細胞活性。3 3-MA可促進小膠質細胞向M2型轉化,促進神經損傷的修復。圖11幅;表11個;參46篇。
【圖文】：

注：與 Sham 組比較 △P＜0.05，△△P＜0.01；與 Model 組比較*P＜0. 05，**P＜0. 01結果顯示：各組大鼠數據分析，Model 組大鼠穿越平臺次數最少，Sham 組次數最多，Model 組與 Sham 組及 3-MA 組之間均有統計學差異（P<0.05）。結果表明：RBI 后，，Model 大鼠穿越平臺次數明顯減少，表現出一定的空間記憶障礙。相較于 Model 組，3-MA 組大鼠穿越次數明顯增多，空間記憶能力有一定程度的恢復。1.2.2 RBI 后大鼠海馬區(qū)組織 HE 染色結果RBI 后對大鼠腦組織進行 HE 染色，顯微鏡觀察海馬區(qū)病理結構變化（圖 2）Model 12 4.00 1.60△3-MA 12 5.25 1.06△△**

第 1 章 實驗研究結果顯示：與 Sham 組相比，Model 組可見較明顯的核固縮，錐體束結構紊亂。相較于 Model 組，3-MA 組變化較輕。結果表明：放射性損傷后，大鼠的海馬區(qū)受到較明顯的破壞，神經細胞出現核固縮，3-MA 能緩解這一損傷。1.2.3 同側海馬區(qū) TUNEL 染色通過對海馬組織 TUNEL 檢測觀察海馬區(qū)神經元凋亡情況（圖 3 表 3）。
【學位授予單位】：華北理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R730.55

【參考文獻】

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1 封敏;盧圣鋒;張承舜;余曙光;;國內大鼠Morris水迷宮實驗現狀與分析[J];遼寧中醫(yī)雜志;2011年11期

本文編號：2669703