【摘要】：目的:1、檢測(cè)白念珠菌唑類藥物耐藥菌株和敏感菌株Sap2的活性,明確白念珠菌耐藥株和敏感株Sap2活性差異。2、建立人工菌血癥模型,探究白念珠菌唑類藥物耐藥菌株和敏感菌株的毒力及致病性差異。3、檢測(cè)白念珠菌唑類藥物耐藥菌株和敏感耐藥菌株SAP2、ERG11的mRNA表達(dá)水平,探究其與白念珠菌耐唑類藥物的關(guān)系。方法:1、采用微量肉湯稀釋法M27-A4進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn),獲得實(shí)驗(yàn)用白念珠菌菌株。分別選取對(duì)氟康唑、伊曲康唑及伏立康唑交叉耐藥,對(duì)氟康唑、伊曲康唑、和伏立康唑單一耐藥,對(duì)氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑均敏感的白念珠菌菌株各10株,用BSA培養(yǎng)基檢測(cè)這50株白念珠菌的Sap2活性,并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2、將清潔級(jí)昆明小鼠60只(約8周齡,雌雄各30只,體重[28±2]g),隨機(jī)分為6個(gè)組(氟康唑耐藥組、伊曲康唑耐藥組、伏立康唑耐藥組、交叉耐藥組、敏感組和空白對(duì)照組),將實(shí)驗(yàn)用白念珠菌菌懸液分別注入實(shí)驗(yàn)小鼠的尾靜脈,建立人工菌血癥模型。記錄小鼠死亡情況(30天),計(jì)算小鼠的死亡率和生存率,做統(tǒng)計(jì)分析。3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)方法檢測(cè)SAP2、ERG11的mRNA相對(duì)表達(dá)量,分析其表達(dá)水平與唑類藥物耐藥的關(guān)系。結(jié)果:1、Sap活性檢測(cè)結(jié)果:氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑交叉耐藥菌株(10株),氟康唑耐藥菌株(10株),伊曲康唑耐藥菌株(10株),伏立康唑耐藥菌株(10株),三者均敏感菌(10株),共50株白念珠菌均有透明環(huán)產(chǎn)生。氟康唑耐藥組,Pz值=0.631±0.010;伊曲康唑耐藥組,Pz值=0.701±0.028;伏立康唑耐藥組Pz值=0.623±0.011;交叉耐藥組,Pz值=0.590±0.023;敏感組,Pz值=0.795±0.016;交叉耐藥組與其他菌株組Sap活性差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;敏感菌株組Sap活性低于耐藥菌株組(F=18.693,P0.001)。2、小鼠人工菌血癥模型的毒力致病性結(jié)果:氟康唑耐藥組、伊曲康唑耐藥組伏立康唑耐藥組、交叉耐藥組、敏感組、空白組小鼠的中位生存時(shí)間分別為22天、18天、13.5天、12天、20天和30天。通過(guò)Log-rank檢驗(yàn),不同組之間的生存時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(~(?2)=25.62,P=0.00),即耐藥組菌株對(duì)小鼠的致病性及毒力明顯高于敏感組。3、SAP2、ERG11的mRNA表達(dá)量檢測(cè)結(jié)果:交叉耐藥組SAP2的mRNA相對(duì)表達(dá)量為(6.9127±1.57)顯著高于敏感菌株組(2.4418±0.91),P0.05,交叉耐藥組SAP2的mRNA相對(duì)表達(dá)量高于單藥耐藥菌株(伊曲康唑耐藥組(5.3164±0.56),氟康唑耐藥組(5.2164±0.74),伏立康唑耐藥組(5.5927±0.57))的表達(dá)量,P0.05。交叉耐藥組ERG11的mRNA相對(duì)表達(dá)量(6.923±0.81)顯著高于敏感菌株組(1.89±0.93),P0.05;交叉耐藥組ERG11的mRNA相對(duì)表達(dá)量(6.923±0.81)顯著高于單藥耐藥組的表達(dá)量(氟康唑耐藥組(5.263±0.43),伊曲康唑耐藥組(5.311±0.67),伏立康唑耐藥組(6.022±0.29)),與氟康唑耐藥組、伊曲康唑耐藥組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與伏立康唑耐藥間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0.05。結(jié)論:1、白念珠菌耐藥菌株中,Sap2活性增高,毒力致病性增強(qiáng)。2、SAP2、ERG11高表達(dá)與白念珠菌交叉耐藥、單一耐藥有一定的關(guān)系。3、白念珠菌SAP2和ERG11在唑類藥物耐藥中呈正相關(guān),兩基因間可能存在正性調(diào)節(jié)。
【圖文】：

山西醫(yī)科大學(xué)（博）碩士學(xué)位論文學(xué)方法PSS21.0軟件分析結(jié)果，Sap活性檢驗(yàn)結(jié)果用 x±s表示，多組數(shù)析。2 結(jié) 果檢測(cè)的白念珠菌（氟康唑耐藥組、伊曲康唑耐藥組、伏立康唑、敏感組）均有透明環(huán)產(chǎn)生（見圖 1、圖 2），證明其均可以產(chǎn)00%，每株菌 3 份重復(fù)實(shí)驗(yàn)其透明環(huán)直徑基本一致。通過(guò)方差分白念珠菌 Pz 值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.001（實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表 1）

山西醫(yī)科大學(xué)（博）碩士學(xué)位論文學(xué)方法PSS21.0軟件分析結(jié)果，Sap活性檢驗(yàn)結(jié)果用 x±s表示，多組數(shù)析。2 結(jié) 果檢測(cè)的白念珠菌（氟康唑耐藥組、伊曲康唑耐藥組、伏立康唑、敏感組）均有透明環(huán)產(chǎn)生（見圖 1、圖 2），，證明其均可以產(chǎn)00%，每株菌 3 份重復(fù)實(shí)驗(yàn)其透明環(huán)直徑基本一致。通過(guò)方差分白念珠菌 Pz 值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.001（實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表 1）
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R446.5

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本文編號(hào)：2660311