【摘要】：目的:本文擬探討莊河地區(qū)幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)抗生素耐藥情況并分析可能的影響因素,檢測(cè)H.pylori主要耐藥相關(guān)基因的突變情況,進(jìn)一步篩選鑒定與耐藥有關(guān)的基因改變。本研究將揭示莊河地區(qū)H.pylori抗生素耐藥情況及相關(guān)基因突變特征,為探討H.pylori耐藥相關(guān)分子機(jī)制提供線索和理論依據(jù)。研究方法:1、收集1998-2017年間莊河地區(qū)受檢者胃鏡活檢胃粘膜標(biāo)本454例,體外原代培養(yǎng)H.pylori100株。2、采用E-test法檢測(cè)H.pylori對(duì)甲硝唑、克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林、四環(huán)素的敏感性。3、利用酚-氯仿法抽提H.pylori全基因組DNA,聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase chain reaction,PCR)對(duì)H.pylori毒力因子cagA、vacA(s1、s2、m1a、m1b、m2、i1、i2)、iceA1、iceA2、babA2、oipA、slyD、hrgA以及cagA-EPIYA基序進(jìn)行分型檢測(cè)。4、利用PCR擴(kuò)增及DNA測(cè)序分別檢測(cè)H.pylori耐藥相關(guān)基因23SrRNA V,gyrA,gyrB,rdxA,frxA的突變情況,利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)突變前后基因結(jié)構(gòu)的變化,篩選鑒定與耐藥有關(guān)的基因改變。5、統(tǒng)計(jì)分析軟件采用SPSS 18.0,二元logistic回歸分析年齡、性別、年代、疾病、毒力因子和H.pylori抗生素耐藥的關(guān)系。MIC值的比較采用Mann Whitney U或t檢驗(yàn),P0.05認(rèn)為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1、100株H.pylori,甲硝唑、左氧氟沙星、克拉霉素、阿莫西林、四環(huán)素的耐藥率分別是78.0%、56.0%、31.0%、9.0%、15.0%,雙重、三重、四重、五重耐藥率分別是23%、20%、6%、4%;2、H.pylori對(duì)甲硝唑、克拉霉素、四環(huán)素的耐藥率在1998-1999,2002-2004,2016-2017三個(gè)年代無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,趨于穩(wěn)定。左氧氟沙星、阿莫西林的耐藥率呈上升趨勢(shì)(OR:2.089,95%CI:1.142-3.821,P=0.017;OR:5.035,95%CI:1.327-19.105,P=0.018);男性受檢者對(duì)克拉霉素耐藥率和多重耐藥率顯著高于女性受檢者(44.4%(24/54)vs 15.2%(7/46),P=0.002;68.5%(37/54)vs 34.8%(16/46),P0.001);抗生素的耐藥率與宿主胃疾病狀態(tài)無(wú)關(guān);在抗生素耐藥與毒力因子攜帶之間的關(guān)系方面,甲硝唑的耐藥率在vacAs1m1/m2組低于vacAs1m1m2組(65%vs 85.7%,P=0.026);cagA~+對(duì)左氧氟沙星的耐藥率高于cagA~-組(60.9%vs 23.1%,P=0.020)。slyD~-對(duì)左氧氟沙星的耐藥率高于slyD~+組(68.5%vs 41.4%,P=0.006);對(duì)于克拉霉素,iceA~(++)的耐藥率低于iceA~(-+)(19.7%vs 52.4%,P=0.017);阿莫西林的耐藥率iceA~(++)組低于iceA~(--)(1.6%vs 27.8%,P=0.009);3、在克拉霉素耐藥株中,74.2%(n=23)23SrRNA V區(qū)發(fā)生A2143G位點(diǎn)突變,經(jīng)軟件分析位點(diǎn)C1883T、C2131T、T2179G突變前后基因結(jié)構(gòu)存在改變;在左氧氟沙星耐藥菌株中,28.6%(n=16)和12.5%(n=7)發(fā)生GyrA的87(N to K/I)和91(D to N/Y/G)位點(diǎn)突變,其中在91位點(diǎn)突變株中發(fā)現(xiàn)一株伴有D99N的突變,另外,在一株耐藥菌株中發(fā)現(xiàn)D143E突變,經(jīng)軟件分析這些位點(diǎn)突變前后結(jié)構(gòu)存在改變;甲硝唑耐藥相關(guān)RdxA突變類型包括蛋白翻譯截短(n=26,33.3%),移碼突變(n=8,10.3%),與黃素單核苷酸輔因子結(jié)合的位點(diǎn)突變(n=16,20.5%)及其它等(n=11,14.1%),預(yù)測(cè)分析發(fā)現(xiàn)前三類和最后一類的A118S突變前后存在結(jié)構(gòu)改變。結(jié)論:1、莊河地區(qū)H.pylori抗生素耐藥情況以甲硝唑、左氧氟沙星、克拉霉素耐藥為主,雙重及多重耐藥率較高;2、莊河地區(qū)H.pylori抗生素耐藥年代變化趨勢(shì):甲硝唑、克拉霉素、四環(huán)素在三個(gè)年代趨于平穩(wěn),而左氧氟沙星、阿莫西林呈上升趨勢(shì);抗生素耐藥影響因素主要包括性別和毒力因子cagA、vacA、slyD、iceA;3、H.pylori對(duì)克拉霉素的耐藥主要以23SrRNA的A2143G突變?yōu)橹?新發(fā)位點(diǎn)C1883T、C2131T、T2179G和耐藥有關(guān);H.pylori對(duì)左氧氟沙星耐藥主要以gyrA的87、91位點(diǎn)氨基酸改變?yōu)橹?新發(fā)位點(diǎn)D99N和D143E和耐藥有關(guān);H.pylori對(duì)甲硝唑耐藥與rdxA的蛋白截短、框移、FMN結(jié)合有關(guān),新發(fā)位點(diǎn)A118S和耐藥有關(guān)。
【圖文】：

我們采用 E-test 方法檢測(cè)了 100 株 H.pylori 對(duì)五種抗生素的耐藥情況（圖1）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，H.pylori 對(duì) MNZ、LVX、CAM、AMX、TCN 五種抗生素總的耐

LVX 9CAM 3AMX 0TCN 1雙重耐藥 23MNZ+LVX 17MNZ+CAM 5LVX+CAM 1三重耐藥 20MNZ+LVX+CAM 11MNZ+LVX+TCN 6MNZ+LVX+AMX 2MNZ+CAM+AMX 1四重耐藥 6MNZ+LVX+CAM+AMX 2MNZ+LVX+CAM+TCN 4全耐藥 4
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R446.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2656860