【摘要】：肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae,拉丁語(yǔ)簡(jiǎn)稱M.pneumoniae)是引起上呼吸道感染的主要病原菌之一,也是導(dǎo)致社區(qū)獲得性肺炎的常見原因。隨著近年來環(huán)境中空氣質(zhì)量下降,患有呼吸道感染疾病的人越來越多,呼吸道感染疾病診斷逐漸成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。由肺炎支原體引起的呼吸道感染與普通感冒癥狀并無差異,但如未及時(shí)診斷治療可能會(huì)造成患者全身多處臟器損傷和器質(zhì)性病變,嚴(yán)重者危及生命。因此,發(fā)展一種準(zhǔn)確、快速的肺炎支原體檢測(cè)方法是十分有意義的。本研究以肺炎支原體為研究對(duì)象,利用變性泡介導(dǎo)的鏈交換擴(kuò)增(Denaturation bubble-meditated strand exchange amplification,SEA)方法對(duì)肺炎支原體進(jìn)行核酸快速檢測(cè)方法的研究,主要的研究?jī)?nèi)容與結(jié)論如下:1.痰液樣品中肺炎支原體核酸提取方法比較研究:以肺炎支原體感染患者痰液為樣本,將肺炎支原體感染患者痰液消化處理后通過苯酚-氯仿核酸提取法、磁珠核酸提取方法、離心柱核酸提取方法分別對(duì)等體積的痰液進(jìn)行核酸提取并將提取液進(jìn)行濃度、吸光度比值以及其他幾個(gè)方面的評(píng)估,選取一種最優(yōu)的肺炎支原體感染痰液核酸提取方法。結(jié)果表明:離心柱核酸提取方法提取核酸濃度范圍為255.6-440.3ng/μL,磁珠核酸提取方法核酸濃度范圍為110-186.9 ng/μL,苯酚-氯仿法提取核酸濃度范圍為11.6-27.5 ng/μL。從OD260/280與OD260/230比值來比較三種核酸提取方法的核酸提取純度,離心柱、磁珠與苯酚-氯仿三種核酸提取方法OD260/280比值范圍分別為2.51-3.15、1.53-1.93、1.32-1.85。離心柱、磁珠與苯酚-氯仿三種核酸提取方法OD260/230比值范圍分別為2.77-3.22、0.52-1.98、0.32-1.75。結(jié)論:通過三種方法對(duì)痰液中肺炎支原體核酸提取的濃度、吸光度比值、提取時(shí)間、擴(kuò)增效率分析比較,離心柱核酸提取方法為三種提取方法中最優(yōu)的核酸提取方法。2.基于鏈交換擴(kuò)增新方法對(duì)肺炎支原體核酸快速檢測(cè)方法的建立:以肺炎支原體為靶標(biāo),將SEA方法應(yīng)用于肺炎支原體的檢測(cè),從該方法的引物設(shè)計(jì)、可行性、溫度優(yōu)化、靈敏性、特異性、結(jié)果可視化等方面進(jìn)行研究,建立一種新型的肺炎支原體檢測(cè)方法。結(jié)果表明,SEA方法檢測(cè)肺炎支原體反應(yīng)最適溫度是61℃,最低檢測(cè)限為1×10~4 copy/mL。引物具有良好特異性,可以與11種上呼吸道感染致病菌進(jìn)行區(qū)分。通過向反應(yīng)管中加入本實(shí)驗(yàn)室研制比色染料實(shí)現(xiàn)了該方法反應(yīng)結(jié)果肉眼可視化。結(jié)論:SEA等溫?cái)U(kuò)增新方法可以應(yīng)用于肺炎支原體檢測(cè),檢測(cè)限達(dá)到臨床肺炎支原體感染最低檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn),并且反應(yīng)結(jié)果借助比色染料實(shí)現(xiàn)了可視化,不需要依賴大型的熒光PCR儀來觀察結(jié)果。3.SEA方法檢測(cè)實(shí)際樣品與對(duì)比研究:利用SEA肺炎支原體檢測(cè)方法與環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)(Loop-mediated isothermal amplification method,LAMP)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase chain reaction,PCR)方法分別對(duì)224例上呼吸道感染患者進(jìn)行檢測(cè),比較三種方法對(duì)實(shí)際樣品檢測(cè)的準(zhǔn)確性。SEA、LAMP、PCR檢測(cè)方法針對(duì)224例上呼吸道感染痰液樣品分別檢測(cè)出38、41、42例肺炎支原體感染陽(yáng)性樣本,但LAMP方法在對(duì)實(shí)際樣品檢測(cè)中檢出2例假陽(yáng)性結(jié)果,三種方法準(zhǔn)確率分別為90.50%、97.6%、100%。同時(shí)分析了三種方法在反應(yīng)起峰時(shí)間、引物數(shù)量、檢測(cè)限和反應(yīng)溫度等方面的不同點(diǎn)。結(jié)論:SEA檢測(cè)肺炎支原體方法對(duì)上呼吸道感染實(shí)際樣品檢出率略低于PCR與LAMP方法,但該方法在引物數(shù)量,反應(yīng)時(shí)間,反應(yīng)條件等方面均具有自身優(yōu)勢(shì)。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R440

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王敏;;肺炎支原體感染患兒凝血及免疫功能的變化及臨床意義[J];血栓與止血學(xué);2019年06期

2 麥澤英;李柏;;肺炎支原體感染與小兒反復(fù)呼吸道感染關(guān)系的臨床分析[J];基層醫(yī)學(xué)論壇;2019年04期

3 陳詠芳;陳麗芳;賴馨;;2016年10月-2017年9月深圳龍崗區(qū)肺炎支原體感染血清檢測(cè)分析[J];江西醫(yī)藥;2019年01期

4 王霖;趙明波;殷崢;吳玉芹;張泉;賓松濤;;探究不同年齡段兒童肺炎支原體感染的臨床特點(diǎn)[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2019年27期

5 蔣星華;周良芳;鄧劍;李W，

本文編號(hào)：2652769