【摘要】：寨卡病毒(ZIKV)屬黃病毒屬,是一種通過節(jié)肢動物傳播的病毒(蟲媒病毒)。目前,ZIKV可以分為兩個主要譜系,包括非洲譜系、亞洲譜系。1947年,ZIKV首次在非洲的恒河猴中被發(fā)現(xiàn),接下來的數(shù)十年間,ZIKV 一直屬于“睡眠狀態(tài)”,只引起散在傳播,而且癥狀較輕,具有自限性。直至2015年,ZIKV在亞洲、非洲以外的巴西首次大面積爆發(fā)流行,并迅速向全球其他地區(qū)傳播。此次爆發(fā)的特點包括患者人數(shù)激增、傳播范圍擴大、出現(xiàn)嚴重并發(fā)癥(如GBS、新生兒小頭畸形等),ZIKV感染嚴重威脅到人類健康。在2016年ZIKV疫情爆發(fā)成為了國際關注的突發(fā)公共衛(wèi)生事件。根據(jù)流行毒株的系統(tǒng)發(fā)育分析得知,引起近年爆發(fā)流行的毒株均屬亞洲譜系。本研究建立了基于E基因的非洲型寨卡病毒實時熒光定量PCR檢測方法。通過針對ZIKV非洲型標準株MR766(AY632535.2)的E基因編碼區(qū)設計出上下游引物及探針,開展了相關的特異性、重復性、敏感性的實驗,利用本實驗室保存的1-4型登革病毒株、HCV-1b RNA、亞洲型寨卡病毒Z16006株、乙腦病毒疫苗株、基孔肯雅病毒驗證了本方法所設計引物的特異性;本研究的靈敏度測試結果表明,2.47×101 copies/μl與2.47×l00copies/μl的檢測尚不夠穩(wěn)定,2.47×100 copies/μl檢測結果陽性為概率事件,故不能作為絕對定量的依據(jù)。因此,本方法可應用于臨床疑似標本的檢測,能實現(xiàn)非洲型ZIKV的早期快速檢測、鑒別診斷及標本中的病毒定量。ZIKV E蛋白通過與宿主細胞表面受體結合介導病毒進入宿主細胞,從而開始ZIKV的感染周期,是啟動ZIKV進入宿主細胞的關鍵因素,而且參與了病毒復制周期的全過程。通過對兩個譜系E蛋白氨基酸序列的位點進化方向進行分析,發(fā)現(xiàn)氨基酸位點的變化引起了非洲型ZIKV、亞洲型ZIKV E蛋白B細胞表位的改變,同時引起E蛋白結構改變。本研究從寨卡病毒E基因生物信息學分析入手,建立非洲型ZIKV的實時熒光定量PCR檢測技術;并針對了ZIKV兩個譜系的E蛋白進行了生物信息學分析,發(fā)現(xiàn)了非洲型ZIKV與亞洲型ZIKV在E蛋白氨基酸序列上的差異位點,并分析了這些統(tǒng)一差異位點與B細胞差異性表位、E蛋白結構之間的聯(lián)系。本研究有助于實現(xiàn)非洲型寨卡病毒的實驗室早期檢測,并為進一步開展ZIKV血清學相關檢測技術和疫苗的研究提供參考。
【圖文】：

圖１－２邋ＺＩＫＶ邋Ｅ蛋白的可溶性胞外域單體結構逡逑Ｆｉｇ邋１－２邋Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ａ邋ｍｏｎｏｍｅｒ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｓｏｌｕｂｌｅ邋ｅｃｔｏｄｏｍａｉｎ邋ｏｆ邋Ｅ邋ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ邋ｏｆ邋ＺＩＫＶ逡逑（Ｄ丨為紅色，Ｄ［Ｉ為黃色，Ｄｉｌｌ為藍色，Ｆｕｓｉｏｎ循環(huán)以綠色突出顯示）［［５ｎ逡逑１．２寨卡病毒病的傳染源及傳播途徑逡逑寨卡病毒本來存在于偏遠的非洲森林，但由于全球化及氣候變化，ＺＩＫＶ擴逡逑散到了新的地區(qū)。ＺＩＫＶ的宿主可能主要是靈長類動物（包括人），當ＺＩＫＶ疫逡逑情爆發(fā)時，人群對于該病毒普遍易感，人群中ＺＩＫＶ的隱性感染者也是重要的傳逡逑染源。ＺＩＫＶ在烏干達實現(xiàn)了宿主從猴子到人類的飛躍，，通過病毒血癥旅行者、逡逑２逡逑

逑ｑｉ邋｜邋５７２１６７４８邋６邋１邋ｇｂ邋｜邋ＫＦ２邋？，＿ｖ．．．．．．逡逑圖２－３圖為本研究所設計的上游引物逡逑Ｆｉｇ邋２－３邋Ｔｈｅ邋ｕｐｓｔｒｅａｍ邋ｐｒｉｍｅｒ邋ｏｆ邋ｔｈｉｓ邋ｓｔｕｄｙ逡逑１０逡逑
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R511;R440

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本文編號：2643393