【摘要】：目的分析神經(jīng)危重癥監(jiān)護病房(Neurological intensive care unit,NICU)患者感染及環(huán)境定植肺炎克雷伯桿菌(Klebsiella pneumoniae,KP)菌株間的同源性關(guān)系,分析KP菌株染色體與質(zhì)粒攜帶主要耐藥基因特征及其與臨床抗菌藥物敏感性的聯(lián)系,從而明確NICU中KP的主要病房環(huán)境傳播特征及耐藥性遺傳趨向,為擬定NICU的病房環(huán)境消毒方案和KP感染的防控措施提供依據(jù)。方法1監(jiān)測某三級甲等醫(yī)院2015年1月-2016年12月NICU入住患者感染狀況及其病原菌的構(gòu)成類型,對各類送檢標(biāo)本中檢測到的KP菌株予以分離保存。2監(jiān)測NICU常規(guī)空氣環(huán)境及所有入住感染患者的周圍空氣和床單位環(huán)境中的微生物分布狀態(tài),對監(jiān)測標(biāo)本中檢測到的KP菌株予以分離保存。3使用限制性內(nèi)切酶Xba I對所有包埋入膠塊的KP菌株染色體DNA進行酶切后,通過脈沖場凝膠電泳(PFGE)分析各菌株間的同源性,菌株間若相似度達100%則提示為同一克隆株,若相似度達80%以上則提示為同一流行克隆系。4使用煮沸法及質(zhì)粒小提中量試劑盒分別提取所有KP分離菌株的染色體及質(zhì)粒DNA,并以此分別作為模板在聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)的支持下確證其染色體及質(zhì)粒DNA上攜帶的β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類與喹諾酮類耐藥基因類型。5所有KP菌株采用K-B法進行臨床常用抗菌藥物耐藥表型檢測,同時確證超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)表型。結(jié)果1研究期間共收治患者574例,并發(fā)感染患者395例,有362例送檢了病原學(xué)檢查,共檢出非重復(fù)病原菌208株,其中患者感染非重復(fù)KP 54株,檢出率占25.96%居首位,其次為檢出率占21.15%的銅綠假單胞菌和檢出率占10.10%的金黃色葡萄球菌,標(biāo)本類型均以痰標(biāo)本為主;2 2015年1月-2016年12月期間,NICU常規(guī)病房環(huán)境及患者感染環(huán)境監(jiān)測結(jié)果顯示,微生物類型以革蘭陽性球菌、革蘭陽性桿菌檢出率居多,其次為真菌和少量的革蘭陰性桿菌。其中共檢出KP菌株9株,1株由小房間常規(guī)空氣環(huán)境監(jiān)測標(biāo)本中獲得,4株KP來自不同感染患者的周圍空氣環(huán)境監(jiān)測標(biāo)本,其余4株來自于不同感染患者的床單位環(huán)境。3在本次研究檢出的63株KP中,成功分型61株,分為49個型別,其中菌株數(shù)量多于1株且相似度達100%的同一克隆型共10組,而菌株數(shù)量多于1株且相似度≥80%的同一流行克隆系則有18組。多達73%為能夠在互相間找到同源關(guān)系且相似度在80%以上的同一流行克隆系的KP株,而高達35%為相似度100%的相同克隆株。4所有KP菌株染色體及質(zhì)粒DNA上耐藥基因的檢出率均以SHV為主,其次為qnr類及CTX-M類基因,攜帶基因類型無明顯差別,但質(zhì)粒DNA耐藥基因攜帶數(shù)量明顯多于染色體DNA。染色體DNA中攜帶的耐藥基因以SHV、CTX-M-2、qnr B、qnr S為主,質(zhì)粒DNA中攜帶的耐藥基因以SHV、CTX-M-2、qnr B、qnr S、acc(6')-Ib-cr為主。5 63株非重復(fù)KP菌株中共有48株患者感染的病原菌株和8株環(huán)境監(jiān)測標(biāo)本菌株為ESBLs(-),其中100%表現(xiàn)為氨芐西林耐藥性、91.07%表現(xiàn)為哌拉西林(51/56)耐藥性,而對其他受試抗菌藥物呈敏感狀態(tài)。余下的7株ESBL(+)KP菌株均為多藥耐藥菌株,部分菌株可同時對5-21種受試抗菌藥物呈現(xiàn)耐藥性。結(jié)論KP是引發(fā)神經(jīng)危重癥患者感染的主要病原菌,能夠長期在NICU病房空氣環(huán)境和患者的枕頭、被子、床頭柜等病床單位環(huán)境中定植成為隱匿感染源引發(fā)醫(yī)院感染的傳播,其染色體DNA中攜帶的β-內(nèi)酰胺類SHV基因可能是其對氨芐西林和哌拉西林高度耐藥的主要遺傳學(xué)基礎(chǔ),其染色體所攜帶的β-內(nèi)酰胺類KPC、CTX-M-9、TEM基因和氨基糖苷類rmt B基因以及喹諾酮類qnr A、acc(6')-Ib-cr多種基因均與產(chǎn)ESBLs的遺傳克隆傳播有關(guān),而β-內(nèi)酰胺類的SHV、CTX-M-2、KPC、TEM、IMP、CTX-M-9和氨基糖苷類rmt D、npm A以及喹諾酮類qnr B、qnr S、acc(6')-Ib-cr等基因還均與可接合質(zhì)粒的水平傳播有關(guān),耐藥基因的染色體垂直克隆及質(zhì)粒水平轉(zhuǎn)移傳播是引發(fā)多藥甚至泛藥耐藥性KP感染的重要途徑,因此制定病房環(huán)境KP的有效消毒方案是防控其臨床耐藥性產(chǎn)生和傳播的重要舉措。
【圖文】：

M 8 16 13 17 18 19 A1 A2 T1 M 20 21Y 21T 22 23 24 25M 26 B1 27 28 A3 MM 29 Z1 30 31 M圖 1 部分 KP 菌株 PFGE 圖譜 圖 2 部分 KP 菌株 PFGE 圖譜Fig.1 The PFGE map of Partial KP Fig.2 The PFGE map of Partial KP圖 3 部分 KP 菌株 PFGE 圖譜 圖 4 部分 KP 菌株 PFGE 圖譜Fig.3 The PFGE map of Partial KP Fig.4 The PFGE map of Partial KPKbKb

M 8 16 13 17 18 19 A1 A2 T1 M 20 21Y 21T 22 23 24 25M 26 B1 27 28 A3 MM 29 Z1 30 31 M圖 1 部分 KP 菌株 PFGE 圖譜 圖 2 部分 KP 菌株 PFGE 圖譜Fig.1 The PFGE map of Partial KP Fig.2 The PFGE map of Partial KP圖 3 部分 KP 菌株 PFGE 圖譜 圖 4 部分 KP 菌株 PFGE 圖譜Fig.3 The PFGE map of Partial KP Fig.4 The PFGE map of Partial KPKbKb
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R446.5

【參考文獻】

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1 許亞茹;關(guān)毅;鄭秀芬;元小冬;于W，

本文編號：2641618