【摘要】：背景:利奈唑胺是一種新型惡唑烷酮類抗生素,常用來治療多重耐藥的革蘭陽性菌感染。美國(guó)和中國(guó)分別在2000年和2007年引入使用,它被認(rèn)為是治療VRE、MRSA和青霉素耐藥的肺炎鏈球菌引起感染的有效藥劑。近年來,利奈唑胺耐藥的葡萄球菌和腸球菌在多個(gè)國(guó)家出現(xiàn),給臨床治療帶來了挑戰(zhàn)。方法:對(duì)北京協(xié)和醫(yī)院2015-2017年間75份病歷(包括15例LNSE患者病例和60例LSE的患者病例)及2012-2017年分離出16株LNSE(14株糞腸球菌、1株屎腸球菌和1株鉛黃腸球菌)和56株LSE進(jìn)行分析。對(duì)前者運(yùn)用卡方檢驗(yàn)及T檢驗(yàn)分析臨床資料的差異性。后者在準(zhǔn)確鑒定菌株的基礎(chǔ)上,檢測(cè)15種抗菌藥物的最小抑菌濃度。對(duì)納入菌株進(jìn)行分子分型,進(jìn)而進(jìn)行聚類及同源性分析。在耐藥機(jī)制方面對(duì)耐藥相關(guān)基因及毒力基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增測(cè)序。對(duì)4株臨床分離糞腸球菌進(jìn)行利奈唑胺誘導(dǎo)耐藥實(shí)驗(yàn)并檢測(cè)23S rRNA編碼基因位點(diǎn)突變情況。對(duì)14株臨床分離的LREfs進(jìn)行接合實(shí)驗(yàn),分析耐藥基因在菌株間的傳遞情況。結(jié)果:在LNSE和LSE兩組中年齡、住院天數(shù)、侵入性操作、患者基礎(chǔ)情況、利奈唑胺的使用等因素?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。分離的16株LNSE多來自婦科(25%,4/16)和外科(25%,4/16)。標(biāo)本類型主要為尿液(4/16)、引流液(4/16)和血液(2/16)。大部分菌株利奈唑胺MIC為8μg/ml,氯霉素非敏感率為100%,此外耐藥率較高的有四環(huán)素、氯霉素、左氧氟沙星和紅霉素,分別為100%、94.8%、62.5%和62.5%。萬古霉素、替考拉寧、氨芐西林、替加環(huán)素、呋喃妥因、達(dá)托霉素都有較高的敏感性,分別為93.8%、93.8%、87.5%、100%、93.8%和 100%。optrA、fexA、erm 基因僅在耐藥菌中為陽性,陽性率分別為100%、100%和35.7%。PFGE對(duì)菌株同源性分析具有更高的分辨率,以80%相似度為標(biāo)準(zhǔn)時(shí)與MLST有較好的一致性。臨床分離的LRE中只有兩株檢測(cè)出G2237A位突變,其他突變未見。cfr陰性,核糖體蛋白L3和L4氨基酸水平也沒有改變,optrA基因均為陽性,其蛋白具有5種不同型別,分別為OptrAE349、KD、RDK、EDM和D。誘導(dǎo)耐藥試驗(yàn)說明optrA基因陰性的菌株在長(zhǎng)時(shí)間藥物誘導(dǎo)后主要出現(xiàn)G2576T突變,也存在C2610T突變,optrA基因陽性的菌株則未見G2576T突變,出現(xiàn)的突變?yōu)镚2237A和G2504A。optrA基因定位在細(xì)菌的質(zhì)粒上,接合成功率為 50%(7/14)。結(jié)論:本研究中利奈唑胺使用史不是耐藥產(chǎn)生的危險(xiǎn)因素,利奈唑胺非敏感腸球菌的耐藥機(jī)制有點(diǎn)突變和optrA,optrA為主要耐藥機(jī)制且可在不同菌株之間傳播。
【圖文】：

膠塊置于ＥＢ染液（４００ｍｌ水＋４0ｎｌ邋ＥＢ儲(chǔ)存液）中，染色３０ｍｉｎ，蒸餾水清洗３０ｍｉｎ。逡逑電泳圖像用ＢＩＯ－ＲＡＤ的ＧＥＬ邋ＤＯＣ２０００成像系統(tǒng)及Ｑｕａｎｔｉｔｙ邋Ｏｎｅ軟件獲取。逡逑２）菌株進(jìn)化樹的繪制逡逑經(jīng)限制性內(nèi)切酶Ｓｍａ邋Ｉ酶切的ＰＦＧＥ圖譜用ＢｉｏＮｕｍｅｒｉｃｓ數(shù)據(jù)庫軟件進(jìn)行處逡逑理，用Ｌａｍｂｄａ邋ＰＦＧ邋Ｌａｄｄｅｒ進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化校準(zhǔn)，聚類圖使用非加權(quán)配對(duì)算數(shù)平均法逡逑（ＵＰＧＭＡ）構(gòu)建，差異容許度為１．５。逡逑３．結(jié)果逡逑３．１科室及標(biāo)本類型分布逡逑分離的實(shí)驗(yàn)菌株中２５％來自婦科（４／１６），２５％來自外科（４／１６），其他分逡逑別來自內(nèi)科、急診科、皮膚科、神經(jīng)科、兒科、重癥監(jiān)護(hù)室等，標(biāo)本類型主要逡逑為尿液（２５％，邋４／１６）、引流液（２５％，４／１６）和血液（１２．５％，２／１６）。逡逑

邐０．４９４逡逑３．４邋ＭＬＳＴ邋及邋ＰＦＧＥ邋分析逡逑最小生成樹ＭＳＴ（Ｍｉｎｉｍｕｍｓｐａｎｎｉｎｇｔｒｅｅ）（圖４）顯示了邋１４株利奈挫胺耐藥逡逑的糞腸球菌和５６株利奈挫胺敏感的腸球菌之間的克隆關(guān)系，每一個(gè)圓圈代表一逡逑個(gè)ＳＴ型，圓圈大小代表該種ＳＴ型的菌株數(shù)量，連線表示之間相差的等位基因逡逑個(gè)數(shù)，粗實(shí)線、細(xì)實(shí)線、虛線和點(diǎn)線分別代表了兩種ＳＴ型之間有６個(gè)以上、５逡逑個(gè)、４個(gè)和小于４個(gè)等位基因相同。連線的長(zhǎng)度代表了兩個(gè)ＳＴ型之間的親緣關(guān)逡逑系遠(yuǎn)近。圖５中的耐藥株ＭＬＳＴ樹圖更好地顯示了等位基因的差異，不同ＳＴ型逡逑相差４個(gè)以上等位基因。１４株利奈唑胺耐藥腸球菌中５株ＳＴ１６，，３株ＳＴ４８０，逡逑２邋株邋ＳＴ５８５，其他分別為邋ＳＴ８６０，ＳＴ３６３，ＳＴ２４９，邋ＳＴ７７２。圖邋６邋的邋ＰＦＧＥ邋聚類分逡逑析中以８０％相似度為標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，，分為６個(gè)克隆群，與ＭＬＳＴ有較好的一致性，命逡逑名為克隆群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R446.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2636469