【摘要】：目的:探究不同時(shí)長(zhǎng)急性睡眠剝奪過(guò)程中小鼠海馬組織內(nèi)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)、白細(xì)胞介素4(Interleukin-4,IL-4)的動(dòng)態(tài)變化情況,進(jìn)一步探討二者之間有無(wú)相關(guān)性并對(duì)二者之間的可能作用機(jī)制進(jìn)行初步研究,從而為睡眠剝奪對(duì)海馬學(xué)習(xí)記憶功能造成影響提供可能的理論依據(jù)。方法:1.6~8周C57BL/6J雄性小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(Cage control,CC)、REM睡眠剝奪1d組(REM sleep deprivation 1 day,SD1d)、REM睡眠剝奪2d組(SD2d)、REM睡眠剝奪3d組(SD3d)及AS1517499處理后的REM睡眠剝奪1d組(AS1517499+SD1d),每組12只小鼠。CC組同籠飼養(yǎng)1周后于9:00AM灌注處死,SD1d組經(jīng)睡眠剝奪1天后于9:00AM灌注處死,SD2d組經(jīng)睡眠剝奪2天后于9:00AM灌注處死,SD3d組經(jīng)睡眠剝奪3天后于9:00AM灌注處死,AS1517499+SD1d組每天腹腔注射AS1517499,連續(xù)7天,再經(jīng)睡眠剝奪1天后于9:00AM灌注處死。2.采用RT-PCR方法觀察各組小鼠海馬組織中BDNF、IL-4、STAT6的基因表達(dá)水平,采用ELISA方法觀察各組小鼠海馬組織中BDNF、IL-4、STAT6的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1、RT-PCR顯示SD1d組小鼠海馬中BDNF、IL-4、STAT6 mRNA相對(duì)表達(dá)量較CC組表達(dá)水平升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.045、0.19、0.041);SD2d組BDNF、IL-4、STAT6 mRNA相對(duì)表達(dá)量較CC組表達(dá)無(wú)明顯差異(P值分別為0.297、0.837、0.5);SD3d組BDNF、IL-4、STAT6mRNA相對(duì)表達(dá)量較CC組表達(dá)水平明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.001、0.008、0.001)。2、ELISA顯示SD1d組小鼠海馬中BDNF、IL-4、STAT6較CC組表達(dá)水平升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.029、0.001、0.017);SD2d組BDNF、IL-4、STAT6較CC組表達(dá)無(wú)明顯差異(P值分別為0.5、0.13、0.073);SD3d組BDNF、IL-4、STAT6較CC組表達(dá)水平明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均為0.001)。3、Pearson相關(guān)性分析顯示睡眠剝奪過(guò)程中小鼠海馬中IL-4、BDNF蛋白表達(dá)變化呈正相關(guān)性,P0.001,相關(guān)系數(shù)r=0.863。4、RT-PCR顯示AS1517499+SD1d組小鼠海馬中BDNF、IL-4、STAT6 mRNA相對(duì)表達(dá)量較SD1d組明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均為0.001);ELISA顯示AS1517499+SD1d組小鼠海馬中BDNF、IL-4、STAT6蛋白表達(dá)量較SD1d組明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均為0.001)。結(jié)論:1.短時(shí)間(24h)睡眠剝奪可能增加小鼠海馬中BDNF、IL-4的含量,提示短時(shí)間的睡眠剝奪對(duì)機(jī)體是一種刺激,可能通過(guò)某種機(jī)制激活神經(jīng)保護(hù)因子BDNF、抗炎因子IL-4表達(dá)增加,二者的升高有可能是睡眠剝奪后機(jī)體的一種自我保護(hù)反應(yīng)。2.隨著睡眠剝奪時(shí)間的延長(zhǎng),睡眠剝奪48h時(shí)小鼠海馬中BDNF、IL-4表達(dá)量降至對(duì)照組基線水平;當(dāng)再度延長(zhǎng)睡眠剝奪時(shí)間至72h后,小鼠海馬中BDNF、IL-4表達(dá)量降至基線水平以下,反映了機(jī)體對(duì)抗不利刺激的防御機(jī)制可能隨著睡眠剝奪時(shí)間的延長(zhǎng)而減弱,有可能是睡眠剝奪造成神經(jīng)損傷的可能機(jī)制之一。3.在睡眠剝奪過(guò)程中小鼠海馬中IL-4與BDNF的表達(dá)具有強(qiáng)的正相關(guān)性。4.睡眠剝奪過(guò)程中與IL-4特異性結(jié)合的轉(zhuǎn)錄信號(hào)因子STAT6與IL-4、BDNF表達(dá)趨勢(shì)一致,在抑制STAT6后,再睡眠剝奪24h時(shí)BDNF的表達(dá)隨之降低,表明在睡眠剝奪過(guò)程中IL-4可能通過(guò)JAK/STAT6通路促進(jìn)BDNF的生成,這可能是IL-4對(duì)腦神經(jīng)細(xì)胞起到保護(hù)作用的機(jī)制之一。
【圖文】：

表 4 不同時(shí)長(zhǎng)睡眠剝奪小鼠海馬組織 RT-PCR 結(jié)果A 表達(dá) CC SD1d SD2d SD3d F 值 PF 1.024±0.012 1.442±0.254 0.855±0.185 0.513±0.064 34.689 T61.014±0.0081.067±0.0621.396±0.1881.384±0.2140.876±0.3111.037±0.2660.566±0.1670.517±0.10717.76923.434表 4 副表 不同時(shí)長(zhǎng)睡眠剝奪小鼠海馬組織 RT-PCR 結(jié)果方差分析方差分析 BDNF IL-4 STAT6CC vs.SD1d 0.045* 0.019* 0.041*CC vs.SD2d 0.297 0.837 >0.5CC vs.SD3d <0.001** 0.008* <0.001**SD1d vs.SD2d 0.007* 0.039* 0.021*SD1d vs.SD3d 0.001** <0.001** <0.001**

不同時(shí)長(zhǎng)睡眠剝奪小鼠海馬組織IL-4mRNA相對(duì)表達(dá)量
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R740

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2627423