【摘要】：目的:探究不同時長急性睡眠剝奪過程中小鼠海馬組織內腦源性神經營養(yǎng)因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)、白細胞介素4(Interleukin-4,IL-4)的動態(tài)變化情況,進一步探討二者之間有無相關性并對二者之間的可能作用機制進行初步研究,從而為睡眠剝奪對海馬學習記憶功能造成影響提供可能的理論依據(jù)。方法:1.6~8周C57BL/6J雄性小鼠隨機分為正常對照組(Cage control,CC)、REM睡眠剝奪1d組(REM sleep deprivation 1 day,SD1d)、REM睡眠剝奪2d組(SD2d)、REM睡眠剝奪3d組(SD3d)及AS1517499處理后的REM睡眠剝奪1d組(AS1517499+SD1d),每組12只小鼠。CC組同籠飼養(yǎng)1周后于9:00AM灌注處死,SD1d組經睡眠剝奪1天后于9:00AM灌注處死,SD2d組經睡眠剝奪2天后于9:00AM灌注處死,SD3d組經睡眠剝奪3天后于9:00AM灌注處死,AS1517499+SD1d組每天腹腔注射AS1517499,連續(xù)7天,再經睡眠剝奪1天后于9:00AM灌注處死。2.采用RT-PCR方法觀察各組小鼠海馬組織中BDNF、IL-4、STAT6的基因表達水平,采用ELISA方法觀察各組小鼠海馬組織中BDNF、IL-4、STAT6的蛋白表達水平。結果:1、RT-PCR顯示SD1d組小鼠海馬中BDNF、IL-4、STAT6 mRNA相對表達量較CC組表達水平升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P值分別為0.045、0.19、0.041);SD2d組BDNF、IL-4、STAT6 mRNA相對表達量較CC組表達無明顯差異(P值分別為0.297、0.837、0.5);SD3d組BDNF、IL-4、STAT6mRNA相對表達量較CC組表達水平明顯降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P值分別為0.001、0.008、0.001)。2、ELISA顯示SD1d組小鼠海馬中BDNF、IL-4、STAT6較CC組表達水平升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P值分別為0.029、0.001、0.017);SD2d組BDNF、IL-4、STAT6較CC組表達無明顯差異(P值分別為0.5、0.13、0.073);SD3d組BDNF、IL-4、STAT6較CC組表達水平明顯降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P值均為0.001)。3、Pearson相關性分析顯示睡眠剝奪過程中小鼠海馬中IL-4、BDNF蛋白表達變化呈正相關性,P0.001,相關系數(shù)r=0.863。4、RT-PCR顯示AS1517499+SD1d組小鼠海馬中BDNF、IL-4、STAT6 mRNA相對表達量較SD1d組明顯降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P值均為0.001);ELISA顯示AS1517499+SD1d組小鼠海馬中BDNF、IL-4、STAT6蛋白表達量較SD1d組明顯降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P值均為0.001)。結論:1.短時間(24h)睡眠剝奪可能增加小鼠海馬中BDNF、IL-4的含量,提示短時間的睡眠剝奪對機體是一種刺激,可能通過某種機制激活神經保護因子BDNF、抗炎因子IL-4表達增加,二者的升高有可能是睡眠剝奪后機體的一種自我保護反應。2.隨著睡眠剝奪時間的延長,睡眠剝奪48h時小鼠海馬中BDNF、IL-4表達量降至對照組基線水平;當再度延長睡眠剝奪時間至72h后,小鼠海馬中BDNF、IL-4表達量降至基線水平以下,反映了機體對抗不利刺激的防御機制可能隨著睡眠剝奪時間的延長而減弱,有可能是睡眠剝奪造成神經損傷的可能機制之一。3.在睡眠剝奪過程中小鼠海馬中IL-4與BDNF的表達具有強的正相關性。4.睡眠剝奪過程中與IL-4特異性結合的轉錄信號因子STAT6與IL-4、BDNF表達趨勢一致,在抑制STAT6后,再睡眠剝奪24h時BDNF的表達隨之降低,表明在睡眠剝奪過程中IL-4可能通過JAK/STAT6通路促進BDNF的生成,這可能是IL-4對腦神經細胞起到保護作用的機制之一。
【圖文】：

表 4 不同時長睡眠剝奪小鼠海馬組織 RT-PCR 結果A 表達 CC SD1d SD2d SD3d F 值 PF 1.024±0.012 1.442±0.254 0.855±0.185 0.513±0.064 34.689 T61.014±0.0081.067±0.0621.396±0.1881.384±0.2140.876±0.3111.037±0.2660.566±0.1670.517±0.10717.76923.434表 4 副表 不同時長睡眠剝奪小鼠海馬組織 RT-PCR 結果方差分析方差分析 BDNF IL-4 STAT6CC vs.SD1d 0.045* 0.019* 0.041*CC vs.SD2d 0.297 0.837 >0.5CC vs.SD3d <0.001** 0.008* <0.001**SD1d vs.SD2d 0.007* 0.039* 0.021*SD1d vs.SD3d 0.001** <0.001** <0.001**

不同時長睡眠剝奪小鼠海馬組織IL-4mRNA相對表達量
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R740

【參考文獻】

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本文編號：2627423