【摘要】：背景與目的深靜脈血栓形成(deep vein thrombosis,DVT)是指血液在深靜脈內(nèi)非正常的凝結(jié),好發(fā)于下肢。血栓形成部位的栓子脫落以后隨血液循環(huán)入肺,可導(dǎo)致肺栓塞(pulmonary embolism,PE),嚴(yán)重威脅患者的生命。深靜脈血栓形成后綜合征(post-thrombotic syndrome,PTS)是DVT患者最常見的長期并發(fā)癥,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。靜脈造影是診斷下肢DVT的金標(biāo)準(zhǔn),準(zhǔn)確性高,但是屬于有創(chuàng)檢查,而且部分病人對造影劑過敏。D-二聚體(D-dimer)在臨床上廣泛用于DVT的排除診斷,敏感性高,但是特異性低。P-選擇素(P-selectin)在診斷下肢DVT時(shí),具有較高的特異性。但是不同實(shí)驗(yàn)室之間,P-選擇素尚無統(tǒng)一的檢測方法和臨界值。因此,仍需進(jìn)一步探索新的診斷DVT的分子標(biāo)志物。循環(huán)miRNA在多種疾病的進(jìn)展、診斷及預(yù)后等方面具有重要價(jià)值。研究證實(shí)miRNA-320b在靜脈血栓性疾病中存在差異表達(dá),但是在急性下肢DVT中的具體表達(dá)情況尚不清楚。因此,本課題分析miRNA-320b在急性下肢DVT、PTS和健康對照人群中的表達(dá),并結(jié)合D-二聚體和P-選擇素分析它們的診斷價(jià)值,以期為DVT的診斷提供更多的信息。方法1.研究對象:分別收集急性下肢DVT患者和PTS患者的血漿標(biāo)本,作為DVT組和PTS組。同時(shí)期內(nèi)收集與患者年齡、性別相匹配的體檢者血漿標(biāo)本,作為對照組。2.標(biāo)本的收集與保存:于入院后第二天早晨抽取DVT組、PTS組及對照組空腹外周血標(biāo)本。離心分離血漿后備用。3.血漿miRNA相對表達(dá)量檢測:采用qRT-PCR方法檢測各血漿標(biāo)本中miRNA-320b及內(nèi)參基因miRNA-16的相對表達(dá)量。4.D-二聚體水平的檢測:D-二聚體濃度采用膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測定。5.P-選擇素水平的檢測:P-選擇素的水平運(yùn)用ELISA方法測定。6.miRNA-320b靶基因預(yù)測:應(yīng)用靶基因預(yù)測軟件預(yù)測miRNA-320b可能調(diào)控的靶基因,并對預(yù)測的靶基因進(jìn)行GO分析和KEGG通路富集分析。7.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。正態(tài)定量指標(biāo)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,非正態(tài)定量指標(biāo)采用中位數(shù)和四分位數(shù)間距表示;定性指標(biāo)采用頻數(shù)或百分比表示。三組定量資料之間的比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA),定性資料采用卡方檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)。繪制受試者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲線并計(jì)算曲線下面積(area under the curve,AUC)、敏感性和特異性,用來評估指標(biāo)的診斷價(jià)值。所有分析均采用雙側(cè)檢驗(yàn),P0.05時(shí)認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.miRNA-320b在急性下肢DVT患者血漿中的相對表達(dá)量顯著高于對照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),變化倍數(shù)是1.79倍。miRNA-320b在PTS患者血漿中的相對表達(dá)量與對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.091)。2.與對照組相比,D-二聚體濃度在急性下肢DVT患者血漿中顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。而在PTS組中,D-二聚體濃度與對照組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.139)。3.與對照組相比,P-選擇素濃度在急性下肢DVT患者血漿中顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。而在PTS組中,P-選擇素濃度與對照組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.118)。4.在急性下肢DVT患者血漿中,miRNA-320b相對表達(dá)量與D-二聚體水平呈正相關(guān)(r=0.358,P=0.001);miRNA-320b相對表達(dá)量與P-選擇素水平之間的相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=-0.072,P=0.524)。5.ROC分析結(jié)果顯示,血漿miRNA-320b、D-二聚體和P-選擇素診斷急性下肢DVT的AUC分別為0.787(95%CI:0.710-0.864)、0.882(95%CI:0.821-0.943)和0.825(95%CI:0.754-0.895)。miRNA-320b與D-二聚體聯(lián)合診斷的AUC為0.886(95%CI:0.828-0.944);mi RNA-320b與P-選擇素聯(lián)合診斷的AUC為0.904(95%CI:0.853-0.954);P-選擇素與D-二聚體聯(lián)合診斷的AUC為0.935(95%CI:0.893-0.978);miRNA-320b、D-二聚體和P-選擇素聯(lián)合診斷的AUC為0.953(95%CI:0.920-0.986)。6.生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,miRNA-320b的預(yù)測靶基因的功能包括血管生成、血管發(fā)育和血管形態(tài)等生物學(xué)過程;富集通路包括PI3K-Akt信號通路、TGF-β信號通路以及細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用等。結(jié)論1.miRNA-320b在急性下肢DVT患者血漿中的相對表達(dá)量顯著升高,可能成為診斷急性下肢DVT潛在的生物標(biāo)志物。2.D-二聚體和P-選擇素水平在急性下肢DVT患者血漿中顯著升高,而且血漿miRNA-320b的相對表達(dá)量與D-二聚體水平呈正相關(guān)。3.miRNA-320b聯(lián)合D-二聚體、P-選擇素可提高急性下肢DVT診斷的準(zhǔn)確性,有助于DVT的早期診斷。
【圖文】：

0.211（0.156，0.368），顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。與對照組相比，miRNA-320b 在急性下肢 DVT 患者血漿中的變化倍數(shù)是 1.79 倍（2-ΔΔCp）。研究證實(shí) miRNA 倍數(shù)變化在 1.5 倍以上就可能對細(xì)胞的生物學(xué)產(chǎn)生重大的影響[22]。miRNA-320b 在 PTS 患者血漿中的相對表量為 0.151（0.088，0.272），與對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P = 0.091）（圖 1A）。由此說明，血漿 miRNA-320b 可能有助于急性下肢 DVT 的診斷，而對于 DVT 慢性并發(fā)癥PTS 的價(jià)值尚有待進(jìn)一步探索。2.2 血漿 miRNA-320b 對急性下肢 DVT 患者的診斷價(jià)值對 miRNA-320b 診斷急性下肢 DVT 進(jìn)行 ROC 分析、計(jì)算 AUC，并使用最大約登指數(shù)（Youden index）法確定臨界值（cutoff 值）。結(jié)果顯示，血漿miRNA-320b 診斷急性下肢 DVT 的 AUC 為 0.787（95%CI：0.710-0.864）；當(dāng)miRNA-320b 的相對表達(dá)量 cutoff 值取 0.172 時(shí)，血漿 miRNA-320b 診斷急性下肢 DVT 的敏感性和特異性分別為 70.0%和 78.0%（圖 1B），表明 miRNA-320b在一定程度上可以區(qū)分開急性下肢 DVT 患者和健康人群。

3 D-二聚體在急性下肢 DVT 和 PTS 患者血漿中的表達(dá)情況D-二聚體在對照組血漿中的濃度為 0.349（0.112，，0.752）mg/L。D-二聚體在急性下肢 DVT 患者血漿中的濃度為 1.846（0.911，3.417）mg/L，顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。D-二聚體在 PTS 患者血漿中的濃度為0.547（0.172，1.014）mg/L，與對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P = 0.139）（圖2A）。進(jìn)一步分析血漿 D-二聚體對于急性下肢 DVT 患者的診斷價(jià)值，ROC 結(jié)果顯示 AUC 為 0.882（95%CI：0.821-0.943）；當(dāng) D-二聚體的水平 cutoff 值取 0.508mg/L 時(shí)，D-二聚體診斷急性下肢 DVT 的敏感性和特異性分別為 95.0%和 66.0%（圖 2B）。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R543.6;R440

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃健瑩;梁健健;王敏健;鄧穗德;;燈盞花素對急性冠脈綜合征患者選擇素家族的影響[J];廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào);2008年03期

2 陳瑩;夏軼姿;龔裕強(qiáng);陳剛;;社區(qū)獲得性肺炎患者可溶性E選擇素水平變化情況及其意義[J];中華全科醫(yī)學(xué);2017年11期

3 胡美茹;選擇素家族的分布及生物學(xué)功能研究進(jìn)展[J];免疫學(xué)雜志;2001年S1期

4 趙冰清,陳宇清;選擇素與急性呼吸窘迫綜合征[J];國外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊;1997年03期

5 干瑤;陳艷琳;程海飛;王紅Z

本文編號：2624064