【摘要】：背景:膿毒癥(sepsis)是一個重要的公眾健康問題,起病兇險,病死率高,可引起全身重要器官功能障礙,而膿毒癥心肌損傷(SIMD)是膿毒癥常見的并發(fā)癥,發(fā)生率高達40%,心功能障礙又會加劇膿毒癥病情,影響膿毒癥的預(yù)后。參與膿毒癥心肌功能障礙有許多機制,包括氧化應(yīng)激、細(xì)菌毒素、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞因子、線粒體損傷等。姜黃素具有抗氧化、抗炎、抗凋亡、清除自由基等多方面的作用,這與對抗膿毒癥心肌損傷的發(fā)病機制存在諸多吻合之處。高遷移率族蛋白B1(HMGB1)是一種高度保守的DNA結(jié)合蛋白,HMGB1的功能取決于其分子定位,生理情況下HMGB1存在于細(xì)胞核內(nèi),具有穩(wěn)定核小體的結(jié)構(gòu)和促進基因重組、修復(fù)、轉(zhuǎn)錄等,有“DNA伴侶”之稱,膿毒癥時HMGB1釋放至細(xì)胞外,是一種重要的晚期炎癥因子。有研究表明姜黃素可下調(diào)HMGB1的受體,顯著減少HMGB1向細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移、釋放和表達。目的本課題通過動物實驗探索姜黃素治療膿毒癥心肌損傷作用及對HMGB1的影響研究,為治療膿毒癥心肌損傷提供新的策略。方法:30只雄性SD大鼠隨機分成假手術(shù)組(Sham)、膿毒癥組(CLP)、干預(yù)組(Cur),每組均為10只。Sham組僅翻動腸腔,不結(jié)盲腸;CLP組采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)建立膿毒癥大鼠模型;Cur組大鼠造模后按100mg/kg計量予以腹腔注射姜黃素處理,各組大鼠分別于建模后6h、24h麻醉后取血及心臟組織。檢測血清中CK、CK-MB水平,光鏡下觀察大鼠心肌組織病理改變,使用Elisa及PCR技術(shù)檢測不同部位HMGB1的表達。此次實驗的數(shù)據(jù)使用了SPSS18.0軟件包統(tǒng)計處理,計量數(shù)據(jù)采取均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)的表達方式。經(jīng)驗證符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù),選取獨立樣本T檢驗對兩樣本均數(shù)間進行比較,多組均數(shù)間比較,采用了方差齊性檢驗合并One-way ANOVA(單因素方差分析)的方法,若不符合正態(tài)分布及方差齊性檢驗,則采用秩和檢驗方法。p0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1、CLP組大鼠出現(xiàn)一般狀態(tài)改變,Cur組大鼠較CLP組癥狀減輕。2、各組大鼠心肌組織光鏡觀察:CLP組與Sham組比較,心肌纖維斷裂、間質(zhì)水腫,心肌細(xì)胞壞死,細(xì)胞間隙變大,毛細(xì)血管充血,大量炎癥細(xì)胞浸潤,24h組較6h組病變嚴(yán)重。Cur組大鼠心肌細(xì)胞上述改變較CLP組明顯減輕。與膿毒癥6h組相比,膿毒癥24h組心肌病理積分更大(p0.01),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;與假手術(shù)6h、24h組相比,膿毒癥6h、24h組心肌病理積分均更高,分別為(p0.01)、(p0.01),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義;與膿毒癥6h組相比,姜黃素組6h心肌病理積分減小(p0.01),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;與膿毒癥24h組相比,姜黃素24h組心肌病理積分減少(p=0.033),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3、各組CK-MB及CK的比較:與假手術(shù)6h組比較,膿毒癥6h組CK-MB水平均顯著升高(p0.01),差異有統(tǒng)計學(xué)意義,而姜黃素6h組CK-MB水平比膿毒癥6h組水平降低(p0.01),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;隨時間延長,24h各組血清CK-MB濃度均較6h組降低,與假手術(shù)24h組比較,膿毒癥24h組CK-MB水平均顯著升高(p=0.001),差異有統(tǒng)計學(xué)意義,而姜黃素24h組CK-MB水平比膿毒癥24h組水平降低(p=0.046),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。血清CK變化結(jié)果與CK-MB比較一致。結(jié)果顯示姜黃素對膿毒癥心肌損傷有明顯的保護作用。4、各組血漿HMGB1水平的比較:與假手術(shù)6h組比較,膿毒癥6h組血漿HMGB1水平明顯升高(p0.01),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;與膿毒癥6h組比較,姜黃素6h組血漿HMGB1水平下降(p=0.005),差異有統(tǒng)計學(xué)意義,而膿毒癥24h組的HMGB1水平升高(p=0.079),差異無統(tǒng)計學(xué)意義;與假手術(shù)24h比較,膿毒癥24h組HMGB1水平升高(p=0.078),差異無統(tǒng)計學(xué)意義;姜黃素24h組與膿毒癥24h組比,HMGB1水平明顯下降(p=0.033),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。5、各組心肌HMGB1基因水平的比較:與假手術(shù)6h組比較,膿毒癥6h組大鼠心肌組織中HMGB1 m RNA表達水平降低(p=0.037),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;與膿毒癥6h組比較,姜黃素6h組治療后表達水平有所升高(p=0.438),差異無統(tǒng)計學(xué)意義;與假手術(shù)24h組比較,膿毒癥24h組大鼠心肌組織HMGB1 m RNA表達水平升高(p=0.334),差異無統(tǒng)計學(xué)意義,與膿毒癥24h組比較,姜黃素24h治療后表達水平降低(p=0.208),差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與膿毒癥6h組比較,膿毒癥24h組HMGB1 m RNA表達水平升高(p=0.438),差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:姜黃素對CLP造模大鼠急性心肌損傷有保護作用,可作為一種治療膿毒癥及保護心肌組織的有效藥物;姜黃素可降低胞外HMGB1水平,但對基因水平無調(diào)節(jié)作用,可能通過影響HMGB1釋放及移位而發(fā)揮抗炎作用。
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2.2.2 制作大鼠 CLP 模型腹腔注射 10%水合氯醛溶液（3mg/kg）麻醉大鼠后仰臥剃毛器剔除腹部正中線皮毛，碘酊擦拭消毒 3 遍，范圍約中線切口 2cm，依次打開皮膚和腹膜，暴露腹腔臟器，用鑷盲腸末端至根部 1/3 位置處用 0-2 號線結(jié)扎盲腸，50mL 注一次，避免傷及腸系膜血管，將盲腸回納至腹腔，依次縫術(shù)后皮下注射 0.9%生理鹽水 3mL 抗休克。將各組大鼠放回食進水。觀察每組大鼠生存情況，每 6 小時記錄一次。

第 3 章 結(jié)果3.1 基本情況及生存率比較假手術(shù)組大鼠反應(yīng)靈敏，皮毛光滑，呼吸平穩(wěn)。膿毒癥組大鼠 6 小時至24 小時活力明顯下降，，出現(xiàn)精神萎靡、嗜睡、呼吸急促、豎毛，眼角出現(xiàn)膿性分泌物。姜黃素治療組大鼠精神反應(yīng)較膿毒癥組改善。3.2 光鏡觀察各組大鼠心肌組織形態(tài)
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R459.7

【參考文獻】

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1 尹海燕;邱敏珊;何丹;張銳;陶s

本文編號：2622461