【摘要】：抗繆勒氏管激素(anti-Mullerian hormone,AMH)作為評(píng)價(jià)卵巢儲(chǔ)備功能的最有效標(biāo)志物之一,不僅在女性生殖領(lǐng)域受到臨床醫(yī)師的重視,在新生兒和兒童內(nèi)分泌疾病方面也引起越來(lái)越廣泛的關(guān)注。因此,人體血清AMH濃度的檢測(cè)逐漸成為醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室必須普及的項(xiàng)目,但AMH的檢測(cè)方法和參考區(qū)間并無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。迄今為止,國(guó)外已有多種AMH檢測(cè)技術(shù),而國(guó)內(nèi)目前對(duì)AMH診斷試劑的研究尚處于發(fā)展階段,本研究建立的抗繆勒氏管激素磁微�；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)方法,可快速、高敏感、高特異地對(duì)AMH進(jìn)行檢測(cè)。第一部分抗繆勒氏管激素磁微粒化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法學(xué)建立為了對(duì)AMH體外診斷檢測(cè)方法予以創(chuàng)新并在臨床應(yīng)用上提供參考依據(jù),本研究通過(guò)試劑的篩選、反應(yīng)體系及檢測(cè)流程的優(yōu)化、分析性能評(píng)價(jià)、參考值確立和穩(wěn)定性研究等方面,來(lái)進(jìn)行AMH磁微粒化學(xué)發(fā)光方法學(xué)的建立。結(jié)果顯示:1試劑的選擇方面,我們最終確定北京澤誠(chéng)生物技術(shù)有限公司的AMH抗原2和AMH偶聯(lián)物 Anti-AMH-AP(1.Oμg/mL)、Anti-AMH-FITC(0.5μg/mL)作為本方法建立的主要試劑。2反應(yīng)體系及檢測(cè)流程的優(yōu)化方面,我們選擇在AMH抗試劑的Tris緩沖液中添加0.5%BSA,并使用蛋白緩沖液 BUF3(Tris-HCl 緩沖液,150mmol/L,PH7.5,含 0.5%BSA、0.05%proclin300)配制校準(zhǔn)品,以保證試劑及反應(yīng)系統(tǒng)的穩(wěn)定性。將加樣模式定為30μL樣本+30μL抗試劑A+30μL抗試劑B 15min+30μL磁微粒試劑5min+300μL清洗液清洗3次+200μL底物后在發(fā)光檢測(cè)儀上進(jìn)行測(cè)試。3分析性能評(píng)估方面,通過(guò)精密度、準(zhǔn)確度、特異性、空白檢出限、線性范圍、方法學(xué)比對(duì)及鉤狀效應(yīng)等對(duì)本方法予以評(píng)價(jià)。質(zhì)控品1和質(zhì)控品2的批內(nèi)CV分別為2.31%和1.89%,批間CV分別為3.79%和6.64%;準(zhǔn)確度在±4%之內(nèi),添加回收率96%;空白檢出限達(dá)0.05ng/mL;在零含量AMH樣本中分別加入100ng/mL抑制素A、100ng/mL激活素A、500mIU/mL 的黃體生成素(luteinizinghormone,LH),測(cè)得結(jié)果均不高于 0.07ng/mL,特異性較好,符合特異性檢測(cè)要求;線性范圍在0.07ng/mL-20ng/mL內(nèi),相關(guān)系數(shù)r=0.999;待測(cè)標(biāo)本的AMH水平高達(dá)800ng/mL時(shí)仍未觀察到鉤狀效應(yīng);本法和羅氏電化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)結(jié)果具有高度一致性,直線回歸方程Y=0.996X+0.029,r=0.997,相關(guān)性良好。4通過(guò)對(duì)560份正常人樣本的AMH檢測(cè)值進(jìn)行分析,采用百分位數(shù)法確定AMH的參考值范圍。健康男性:1.43ng/mL-1 1.6ng/mL:健康女性:20-24 歲(1.66ng/mL-9.49ng/mL):25-29 歲(1.18ng/mL-9.16ng/mL);30-34 歲(0.672ng/mL-7.55ng/mL);35-39 歲(0.777ng/mL-5.24ng/mL);40-44 歲(0.097ng/mL-2.96ng/mL);45-50 歲(0.046ng/mL-2.06ng/mL)。5通過(guò)對(duì)試劑加速穩(wěn)定性和開(kāi)瓶穩(wěn)定性分析,發(fā)現(xiàn)抗試劑在37℃條件下加速破壞9天后效價(jià)下降30%左右,校準(zhǔn)品開(kāi)瓶8h后穩(wěn)定性良好,未見(jiàn)明顯降解。本研究結(jié)果表明,抗繆勒氏管激素磁微粒化學(xué)發(fā)光定量方法的主要性能指標(biāo)均滿足了臨床檢測(cè)要求,靈敏度高,特異性強(qiáng),適于臨床推廣使用。第二部分中樞性性早熟女童血清抗繆勒氏管激素的水平變化及意義為評(píng)價(jià)青春期前后女童的卵巢儲(chǔ)備功能以及AMH對(duì)中樞性性早熟(centralprecocious puberty,CPP)的輔助診斷價(jià)值,我們應(yīng)用新建立的方法對(duì)5-8歲CPP女童及正常發(fā)育女童進(jìn)行血清AMH水平測(cè)定,比較了兩組女童的卵巢功能是否具有顯著性差異,并通過(guò)受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve,ROC曲線)判斷AMH對(duì)女童CPP疾病的診斷效能。結(jié)果顯示AMH水平在CPP女童中較正常女童有所上升(2.80ng/mL vs.2.10ng/mL),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且身高及體重均明顯增加。曲線下面積(areaundercurve,AUC)為0.681,當(dāng)約登指數(shù)達(dá)到最大時(shí),截取的AMH最佳診斷水平為2.0ing/mL。其中,靈敏度達(dá)到了 75%,特異度為63.33%。上述結(jié)果表明血清AMH水平對(duì)CPP女童的診斷具有一定的參考價(jià)值,為臨床上評(píng)價(jià)CPP女童的卵巢儲(chǔ)備及診療方案提供了一種新的思路。
【圖文】：

圖１邋ＡＭＨ在正常卵巢卵泡發(fā)育中的表達(dá)問(wèn)逡逑ＡＭＨ首次在人類卵巢濾泡液中被發(fā)現(xiàn)后，，其作為診斷性生物標(biāo)志物的臨床應(yīng)用已經(jīng)逡逑得到擴(kuò)展［９］。ＡＭＨ被應(yīng)用于新生兒和兒科學(xué)中，作為胎兒性別分化的標(biāo)記，用于診斷不明逡逑生殖器、隱睪和青春期延遲。在生殖內(nèi)分泌學(xué)中，ＡＭＨ被用來(lái)判斷生殖衰老、指導(dǎo)生育保逡逑

圖２磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)原理逡逑２．２．２檢測(cè)流程確定逡逑２．２．２．１樣本要求逡逑本方法適用的樣本為血清樣本，檢測(cè)前應(yīng)恢復(fù)至室溫狀態(tài)。為保證試驗(yàn)需求，樣本
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R725.8;R446.6

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本文編號(hào)：2622158