【摘要】：目的:乳腺癌是全球常見的惡性腫瘤之一,在我國已成為女性癌癥死亡率的首位。目前臨床上針對乳腺癌的治療有手術切除、放射治療(即輻照)、化學藥物治療以及內分泌治療。其中,放射治療由于能損傷腫瘤細胞的DNA成分,因而成為非常重要的治療手段之一。但是放射治療也會產生一些不利于治療的副作用。它在直接損傷DNA的同時也會產生活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)和活性氮自由基(reactive nitrogen species,RNS),穩(wěn)定HIF-1a,起到促進內皮細胞增殖的作用。此外,輻照還可以激活p-AKT,p-ERK和p-VEGFR2的表達,促進內皮細胞的生存,遷移及侵襲,最終促進腫瘤組織的血管新生。腫瘤組織血管新生是其治療的一大難題,因為新生的血管可以為腫瘤組織的生長和代謝提供必需的營養(yǎng)物質從而促進癌癥的發(fā)生發(fā)展。在血管新生的過程中會釋放一系列的血管生成因子,在這當中起到十分重要作用的就是內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)。VEGF 家族包括 VEGF-A,VEGF-B,VEGF-C,VEGF-D 和胎盤生長因子(placenta growth factor,PIGF)。這些因子通過與細胞上相應的受體結合產生多種效應,它可以促進內皮細胞的增殖、促進內皮細胞的遷移以及侵襲能力,最終形成新的血管。在這些亞型中表達最廣泛而又在腫瘤血管新生中起到最重要作用的就是VEGF-A,與它相結合的受體是VEGFR-2。褪黑素是由松果體產生的一種胺類激素,它具有天然的抗癌作用。褪黑素通過多方面機制產生抗癌效應,包括褪黑素加速腫瘤細胞的凋亡、抑制腫瘤細胞的增殖、抑制腫瘤組織血管新生以及免疫刺激等。基于褪黑素可以抑制血管新生的特點,我們來探究它是否可以抑制放射治療所誘導的血管新生以及其中涉及的機制。方法:(1)用ELISA,qPCR,Western Blot實驗研究褪黑素及輻照對乳腺癌細胞VEGF的表達及分泌情況的影響。(2)收集不同組乳腺癌細胞的條件培養(yǎng)基(conditioned medium,CM),應用 MTT、細胞劃痕、transwell 及 tube formation實驗研究CM對人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖能力、遷移能力、侵襲能力以及成管能力的影響,Western Blot實驗探究其中可能涉及的機制。(3)選取合適的ba]b/c雌性裸鼠,原位接種T47D細胞建立裸鼠成瘤模型,定期稱量體重,測量腫瘤組織大小,觀察褪黑素及輻照對腫瘤生長的影響。(4)動物實驗結束后,處死裸鼠并立即取出裸鼠腫瘤組織,應用ELISA實驗測定組織中VEGF的含量,HE染色觀察腫瘤組織形態(tài),應用免疫組織化學(Immunohistochemical,IHC)技術觀察 PCNA,VEGF 和 CD31 在組織中表達。結果:(1)通過ELISA,qPCR,Western Blot實驗可知,輻照能促進乳腺癌細胞VEGF的分泌和表達,褪黑素能對輻照的這一作用產生抑制效果。(2)MTT、細胞劃痕、transwell及tube formation實驗證實輻照組CM促進HUVECs的增殖、遷移、侵襲及成管能力,褪黑素能抑制上述效應。通過Western Blot實驗發(fā)現,褪黑素作用機制是通過調節(jié)血管新生信號通路p-ERK,p-FAK,p-Src以及p-VEGFR-2表達。(3)裸鼠成瘤實驗表明,輻照及褪黑素都能抑制腫瘤生長,輻照的抑制作用更強。(4)HE染色下,腫瘤細胞的形態(tài)沒有顯著變化,但是IHC實驗發(fā)現輻照組腫瘤組織PCNA,VEGF表達明顯增強,由于腫瘤組織較小,CD31表達變化并不明顯。給予褪黑素處理后,輻照組裸鼠的腫瘤組織PCNA和VEGF的表達受到明顯抑制。結論:本課題證明輻照雖然能產生抑制腫瘤生長的效應,但同時也促進了腫瘤細胞表達和分泌VEGF,促進內皮細胞的增殖、遷移、侵襲及成管能力,激活血管新生信號通路,這些因素致使腫瘤組織血管新生,而這恰恰不利于腫瘤的治療。已有研究證明褪黑素能抑制乳腺癌,本課題證實了褪黑素還能抑制輻照所誘導的血管新生效應,因此褪黑素與放射治療聯(lián)合應用,不僅有助于更好的治療乳腺癌還能減少放射治療帶來的副作用。
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9;R730.55

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