【摘要】：白色念珠菌是一種條件致病真菌,通常寄生于人的呼吸道、腸道及陰道等粘膜系統(tǒng)中,在免疫力低下的人群中,如癌癥患者、艾滋病患者、長期服用廣譜抗生素病人、器官移植病人等,可引發(fā)不同程度的白色念珠菌感染,甚至引發(fā)系統(tǒng)性白色念珠菌感染。白色念珠菌感染無顯著臨床病征,且極易產(chǎn)生抗藥性,使其早期診斷和治療變得困難,死亡率居高不下,是癌癥患者等免疫力低下病人死亡的重要原因之一。臨床數(shù)據(jù)顯示,白色念珠菌感染已經(jīng)成為醫(yī)院血液感染死亡的第二常見死因。降低白色念珠菌感染死亡率的一個有效途徑是提前預(yù)防、早診斷、早治療,但目前尚缺乏有效的預(yù)防和早期診斷試劑,臨床應(yīng)用的血培養(yǎng)檢測方法靈敏度低,耗時長,往往延誤病人的最佳治療時期,因此,開發(fā)一種白色念珠菌感染的疫苗和早期診斷試劑具有重要的臨床意義。噬菌體展示技術(shù)是通過改造噬菌體基因組,將外源多肽融合表達于噬菌體顆粒表面的一項技術(shù)。該技術(shù)在研制檢測試劑、新疫苗開發(fā)和藥物制備等方面具有廣泛的應(yīng)用,為現(xiàn)代醫(yī)學的發(fā)展提供了新的手段和方法。絲狀噬菌體是一種良好的疫苗和診斷試劑的載體,具有很多優(yōu)點:首先,絲狀噬菌體對人和動物等真核生物無毒性,且作為天然的大分子,可誘導機體產(chǎn)生強烈的免疫應(yīng)答,使接種疫苗時可省略副作用較大的佐劑。其次,抗原表位被充分地以多拷貝的形式展示在噬菌體表面,且保持天然構(gòu)象,更容易被接觸到,產(chǎn)生強烈的抗原-抗體反應(yīng)。最后,絲狀噬菌體制備簡單,易于改造,理化性質(zhì)穩(wěn)定,適合大批量生產(chǎn),且生產(chǎn)成本和耗時都大大低于傳統(tǒng)疫苗和診斷試劑的制備。鑒于此,本論文以噬菌體展示技術(shù)為基礎(chǔ),針對白色念珠菌感染的預(yù)防和早期診斷進行了如下兩方面的研究:1.展示Fba1表位的單展示噬菌體應(yīng)用于白色念珠菌感染預(yù)防的研究本部分研究利用絲狀噬菌體展示技術(shù)將白色念珠菌的免疫優(yōu)勢抗原Fba1的一個有效表位分別展示在絲狀噬菌體fd的pIII和pVIII外殼蛋白表面,構(gòu)建成兩種單展示噬菌體,并用Western Blot技術(shù)對他們的免疫原性進行驗證,以及通過免疫小鼠,構(gòu)建白色念珠菌感染小鼠模型的方法探索他們對白色念珠菌感染的保護能力。實驗結(jié)果表明,兩種展示Fba1表位的單展示噬菌體均可被Fba1多克隆抗體識別,具有免疫原性,且均能刺激小鼠產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答和細胞免疫應(yīng)答,降低小鼠腎臟真菌定殖量,減輕腎臟損傷,增加小鼠存活率。2.癌癥患者血清中白色念珠菌相關(guān)抗體的檢測在本部分研究中,我們構(gòu)建了同時展示Fba1表位和Hsp90表位的雙展示噬菌體,并以展示Fba1表位的兩種單展示噬菌體、展示Hsp90表位的單展示噬菌體,以及Fba1和Hsp90重組蛋白為對照,對癌癥患者(白色念珠菌易感人群)血清和健康人血清進行間接ELISA檢測。實驗結(jié)果表明,展示抗原表位的單展示噬菌體和重組蛋白之間的檢測效果無顯著差異,但是同時展示Fba1和Hsp90兩種抗原表位的雙展示噬菌體可以顯著的提高檢測的靈敏性。此外,我們還結(jié)合膠體金側(cè)向?qū)游黾夹g(shù),以Fba1重組蛋白為捕獲抗原,建立了一種白色念珠菌感染的快速診斷方法,通過對白色念珠菌易感人群癌癥患者血清和健康人血清進行檢測,發(fā)現(xiàn)了該方法靈敏性和特異性與間接ELISA法相似,但是極大的縮短了檢出時間。綜上所述,本研究利用噬菌體展示技術(shù),構(gòu)建了展示白色念珠菌Fba1有效表位的噬菌體,發(fā)現(xiàn)了其在白色念珠菌感染的預(yù)防和早期診斷中具有一定的應(yīng)用價值,為真菌感染新型疫苗和診斷試劑的研發(fā)開辟了新思路。
【圖文】：

前 言1. 白色念珠菌的危害1.1 白色念珠菌簡介白色念珠菌（Candida albicans）又叫白假絲酵母菌，是一種酵母型真菌，為念珠菌屬。白色念珠菌具有多種形態(tài)，以酵母體和菌絲體形態(tài)為主，假菌絲形態(tài)出現(xiàn)較少。酵母體細胞形態(tài)與釀酒酵母細胞相似，呈圓形或卵圓形，直徑約 3～6 μm，革蘭氏染色為陽性，但著色不均勻。菌絲體形態(tài)是細胞生長出管狀菌絲菌絲兩邊完全平行伸長。假菌絲形態(tài)是細胞以出芽方式繁殖，芽生孢子伸長形成芽管，芽管不與母體分離，進而形成的假菌絲。假菌絲細胞之間有明顯的縊縮易形成分支（圖 I）[1, 2]。白色念珠菌酵母體形態(tài)一般沒有致病能力，細胞體積較小，易于在血液中傳播，而菌絲體形態(tài)具有較強的致病能力，，可侵入粘膜或深層組織，引發(fā)白色念珠菌感染[3, 4]。

物中占比高達 75%[20]，其中以白色念珠菌為主[21, 22]，鵝白色念珠菌引起的口腔念珠菌感染。此外，調(diào)查顯示，大至少有一次陰道念珠菌感染，其中部分女性會經(jīng)歷復發(fā)性珠菌感染具有較高的發(fā)病率和死亡率，臨床統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示感染是由白色念珠菌引起的[27-29]，即使接受治療，其死亡值得注意的是，隨著廣譜抗生素[32-41]和免疫抑制劑的廣泛癌癥患者、器官移植患者、免疫功能低下患者等易感人群性白色念珠菌感染發(fā)病率仍在逐年增加[42-45]。菌感染的預(yù)防機制及其疫苗研究現(xiàn)狀菌感染預(yù)防機制動侵染機體主要包括黏附[46-48]、形態(tài)轉(zhuǎn)變[49, 50]、分泌毒細胞等過程（圖 II）[54, 55]，期間，白色念珠菌還通過影響抑制INF-γ、IL-2和IL-17的表達來增強自身的侵染能力
【學位授予單位】：東北師范大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R519.3;R446.5

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 高媛媛;楊思達;鐘微;鄭可魯;陳文雄;;中樞神經(jīng)系統(tǒng)白色念珠菌感染3例臨床特征、影像學分析和文獻回顧[J];中國臨床神經(jīng)科學;2016年03期

2 劉建濤;;中西醫(yī)結(jié)合治療治療COPD合并白色念珠菌感染可行性分析[J];中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志;2016年13期

3 馬賢德;雷萍;關(guān)洪全;;用腎指數(shù)評價藥物對系統(tǒng)性白色念珠菌感染模型療效實驗研究[J];遼寧中醫(yī)藥大學學報;2014年02期

4 何集茂;趙彬;戴連英;;老年煤工塵肺患者合并白色念珠菌感染67例臨床分析[J];臨床醫(yī)學工程;2014年03期

5 祝紹磊;韓曉華;曲志強;史瑤;姚維成;;顱內(nèi)白色念珠菌感染一例報告及文獻復習[J];中外醫(yī)療;2012年14期

6 呂凌;李文革;傳鋒彬;李復紅;;氟康唑治療慢性阻塞性肺疾病并發(fā)白色念珠菌感染64例療效觀察[J];實用醫(yī)技雜志;2008年21期

7 董先惠;游山;;肺結(jié)核合并白色念珠菌感染56例分析[J];中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用;2008年15期

8 楊瓊,宋祥福,王桂云;系統(tǒng)性白色念珠菌感染小鼠動物模型的研究[J];東北師大學報(自然科學版);2005年02期

9 李芳芹;白色念珠菌感染的臨床分析[J];中國藥物與臨床;2004年04期

10 姜鳳梅;老年白色念珠菌感染70例臨床分析[J];實用老年醫(yī)學;2003年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張文萍;陳瑞揚;侯榮芳;;口腔扁平苔蘚白色念珠菌感染情況觀察[A];中華口腔醫(yī)學會第六屆全國口腔黏膜病學術(shù)會議論文集[C];2004年

2 周強;于艷杰;劉宏;趙洪雯;;2例DCD供腎腎移植術(shù)后早期移植腎白色念珠菌感染的防治體會[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學會腎臟疾病專業(yè)委員會2018年學術(shù)年會論文摘要匯編[C];2018年

3 劉玲麗;蔡建飄;郭勇暉;潘玉先;郝衛(wèi);車小燕;王艷芳;;白色念珠菌感染特異性Csa2蛋白雙抗原夾心ELISA方法的建立和評價[A];第六屆海南省生命科學聯(lián)合學術(shù)會議論文匯編[C];2014年

4 曾文;張淑華;歐真蓉;劉萍;;KZ粉,舒爾陰液對大鼠白色念珠菌感染陰道炎的體內(nèi)治療作用評價[A];中國藥理學會第九屆制藥工業(yè)藥理學術(shù)會議論文摘要匯編[C];2000年

5 黃磊;趙令璽;張衛(wèi)星;羅華;陳映群;張聲;;重癥監(jiān)護病房非白色念珠菌和白色念珠菌感染危險因素的比較[A];中華醫(yī)學會第五次全國重癥醫(yī)學大會論文匯編[C];2011年

6 方雪玲;蘇群;方強;;伊曲康唑針劑對危重病人真菌感染的臨床研究[A];2004年浙江省危重病學學術(shù)年會論文匯編[C];2004年

7 戴霞;李世榮;;聚丙烯酰胺水凝膠注射隆乳術(shù)后雙側(cè)乳房遲發(fā)性白色念珠菌感染1例[A];中國美容與整形醫(yī)師大會論文匯編[C];2005年

8 施云;楊國芳;;清精湯治療精道感染57例療效觀察[A];中國性學會第五屆年會學術(shù)論文集[C];2003年

9 韓曉偉;馬賢德;譚健;孫宏偉;關(guān)洪全;;腸道白色念珠菌感染對脾虛小鼠小腸組織中穿孔素和顆粒酶表達水平的影響[A];第十一屆全國免疫學學術(shù)大會摘要匯編[C];2016年

10 楊華;由蕾;陳洪曉;;銀屑病甲合并白色念珠菌感染2例[A];2010全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)會議論文匯編[C];2010年

相關(guān)重要報紙文章 前9條

1 樂亭縣畜牧獸醫(yī)局 劉連軍;一例白色念珠菌感染的診治[N];河北科技報;2017年

2 衣曉峰 靳萬慶;白色念珠菌感染早期診斷有指征[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

3 雨來;簡便方法療鵝口瘡[N];民族醫(yī)藥報;2003年

4 副主任醫(yī)師 闊莉;兒患鵝口瘡 母親要查因[N];大眾衛(wèi)生報;2000年

5 梓元;病在“皮毛”根在腸道[N];大眾衛(wèi)生報;2005年

6 林麗;鵝口瘡[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2009年

7 熊玉英;白帶異常原因不少[N];大眾衛(wèi)生報;2008年

8 北京大學第一醫(yī)院皮膚科 副主任醫(yī)師 楊淑霞 北京中醫(yī)藥大學附屬東方醫(yī)院 副主任醫(yī)師 胡立明;身上癢 健康在報警[N];大眾衛(wèi)生報;2014年

9 ;殺霉菌 防治并重[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2000年

相關(guān)博士學位論文 前2條

1 施洪喜;展示Fba1表位的雜合噬菌體應(yīng)用于白色念珠菌感染預(yù)防和檢測的研究[D];東北師范大學;2019年

2 董帥;基于噬菌體單鏈抗體的白色念珠菌感染的靶向治療研究[D];東北師范大學;2017年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 陳曦;以Fba1和Hsp90為靶點的血清學檢測及其對白色念珠菌病的診斷價值評估[D];東北師范大學;2018年

2 孫美艷;展示白色念珠菌熱休克蛋白90特異表位的雜合噬菌體抗系統(tǒng)性白色念珠菌感染的免疫保護作用研究[D];東北師范大學;2007年

3 張昕彤;噬菌體單鏈抗體應(yīng)用于系統(tǒng)性白色念珠菌感染治療的研究[D];東北師范大學;2017年

4 何恒正;生長抑素治療腸道白色念珠菌感染小鼠的實驗性研究[D];中南大學;2014年

5 遲少華;感染誘發(fā)的ARDS預(yù)后危險因素分析[D];寧夏醫(yī)科大學;2014年

6 張重新;生長抑素聯(lián)合清胰湯對白色念珠菌感染后腸道粘膜屏障功能的保護[D];南華大學;2017年

7 楊豐帥;生長抑素聯(lián)合清胰湯對腸道白色念珠菌感染小鼠的實驗性研究[D];南華大學;2014年

8 龔雙喜;腸道白色念珠菌感染小鼠模型及清胰湯對其影響的研究[D];南華大學;2011年

9 槐艷艷;展示Sap2表位的雜合噬菌體對白色念珠菌感染小鼠的免疫保護作用[D];東北師范大學;2011年

10 劉立霞;白色念珠菌熱休克蛋白90單克隆抗體的制備及鑒定[D];東北師范大學;2010年

本文編號：2621330