【摘要】：目的:建立動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ陀^察放射性海馬損傷的中晚期表現(xiàn)及發(fā)生機(jī)制,以及慢性間歇性低壓低氧(chronic intermittent hypobaric hypoxia,CIH H)對(duì)其影響和作用機(jī)制。方法:成年雄性C57/BL小鼠48只,隨機(jī)分為四組(n=12),分別為空白對(duì)照組(A組)、單純慢性低壓低氧組(B組)、單純照射組(C組)和慢性間歇性低壓低氧+照射組(D組)。1照射處理:直線加速器下給予小鼠全腦6MV-X線照射,射野1.5*1.0cm,深度1cm,照射劑量為單次10Gy,劑量率1.8Gy/min,照射時(shí)間為5.35 min。2 CIHH處理:B組和D組動(dòng)物在接受照射前置于低壓氧倉(cāng),模擬海拔5000米高原(PB=404mmHg,PO2=84mmHg,6小時(shí)/天,28天)低壓低氧預(yù)處理。3記憶認(rèn)知功能測(cè)定:照射結(jié)束30天后應(yīng)用水迷宮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行記憶認(rèn)知功能測(cè)定,實(shí)時(shí)記錄并分析小鼠的逃避潛伏期、1分鐘內(nèi)目標(biāo)象限停留時(shí)間及穿越平臺(tái)位置次數(shù)。4形態(tài)學(xué)觀察:水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死小鼠,進(jìn)行尼氏染色,觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)學(xué)改變。5生物化學(xué)檢測(cè):應(yīng)用Western blot法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白mTOR、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相蛋白GRP78、CHOP的表達(dá)情況,應(yīng)用免疫熒光法檢測(cè)神經(jīng)元前體細(xì)胞的微管相關(guān)蛋白(Doublecortin,DCX)在海馬齒狀回(dentate gyrus,DG)顆粒下區(qū)(subgranular zone,SGZ)的表達(dá)來(lái)評(píng)價(jià)神經(jīng)發(fā)生情況。研究慢性間歇性低壓低氧是否能減輕小鼠放射性海馬損傷,并探索損傷機(jī)制。結(jié)果:1.行為認(rèn)知功能測(cè)定:照射結(jié)束30天后在室溫下(25℃)進(jìn)行Mirros水迷宮實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示A組和C組相比,放射線引起小鼠逃避潛伏期延長(zhǎng)。C組和D組相比,照射前給予CIHH預(yù)處理可縮短其逃避潛伏期。除去平臺(tái)后,C組較A組1分鐘內(nèi)在目標(biāo)象限探索時(shí)間明顯減少(P0.001),照射后小鼠1分鐘內(nèi)穿越平臺(tái)次數(shù)減少(P0.001)。C組和D組相比,CIHH預(yù)處理后小鼠探索時(shí)間和穿越平臺(tái)次數(shù)均增加(P均0.05)。2.形態(tài)學(xué)結(jié)果:石蠟切片尼氏染色顯示照射組小鼠在照射后37天海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞出現(xiàn)腫脹,胞核偏位、結(jié)構(gòu)不清,甚至出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞固縮、壞死。但是在CIHH預(yù)處理后神經(jīng)元細(xì)胞腫脹減輕、結(jié)構(gòu)清晰、壞死減少。3.Western blot和免疫熒光結(jié)果:Western blot顯示C組與A組比較,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、CHOP表達(dá)水平明顯升高(P0.001),自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ表達(dá)水平明顯升高(P0.01),mTOR蛋白表達(dá)水平明顯降低(P0.001);D組和C組比較,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、CHOP蛋白表達(dá)水平明顯降低(P0.01),自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ表達(dá)水平明顯升高(P0.05),mTOR蛋白表達(dá)水平明顯降低(P0.01)。應(yīng)用免疫熒光檢測(cè)海馬CA1區(qū)DCX表達(dá),C組較A組海馬CA1區(qū)DCX表達(dá)量明顯減少,CIHH預(yù)處理后再照射DCX表達(dá)量有所增高。結(jié)論:1.放射線照射可引起海馬組織病理學(xué)損傷,海馬的椎體神經(jīng)元出現(xiàn)損傷和壞死,行為學(xué)上表現(xiàn)為小鼠記憶力、認(rèn)知功能發(fā)生障礙。2.放射線引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激增加和神經(jīng)發(fā)生減少可能是引起小鼠放射性海馬損傷的機(jī)制之一。3.放射線照射小鼠海馬后可誘導(dǎo)自噬的產(chǎn)生,自噬在一定程度上減輕了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激造成的損傷從而發(fā)揮保護(hù)機(jī)制。4.CIHH預(yù)處理在一定程度上能改善放射線引起的記憶力、認(rèn)知障礙,可能通過(guò)增加小鼠海馬區(qū)細(xì)胞的自噬,抑制海馬區(qū)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,減少神經(jīng)元損傷和增加海馬CA1區(qū)神經(jīng)發(fā)生從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
【圖文】：

圖 1 一分鐘內(nèi)小鼠逃避潛伏期 Effects of radiation in mice after 30 days on the escape lateors water maze. for each group.*P<0.05 for Radiation group vs Cation group on the fouth day；**P<0.01 for Radiation group vs Cation group on the fifth day；***P<0.001 for Radiation group vs Cp on the third day；***P<0.001 for Radiation group vs Control grouth day；***P<0.001 for Radiation group vs Control group on th

圖 2 一分鐘內(nèi)小鼠穿越平臺(tái)次數(shù)he number of mice crossing the platform within 1 minute platform from the Mirrors water maze. *P<0.05 for Radia Radiation group；***P<0.001 for Radiation group vs Co
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R730.55

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 黃婧;吳陽(yáng);姚元虎;章龍珍;;屏蔽海馬改善全腦放療對(duì)認(rèn)知功能影響的研究進(jìn)展[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2016年05期

2 黃國(guó)森;胡學(xué)鋒;;容積調(diào)強(qiáng)放療在鼻咽癌中的應(yīng)用[J];腫瘤學(xué)雜志;2013年07期

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本文編號(hào)：2614336