【摘要】：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是生命科學(xué)研究的重要工具,其自身的質(zhì)量,特別是微生物質(zhì)量非常重要,因而需要對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測(cè)。目前,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物排查病毒多采用血清學(xué)方法對(duì)動(dòng)物的既往感染情況進(jìn)行回顧性排查,然而對(duì)于動(dòng)物當(dāng)期病毒感染情況以及周圍環(huán)境的病毒存在狀態(tài)需要進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)�；诤怂釘U(kuò)增的病原檢測(cè)技術(shù)具備高敏感性和特異性,可應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病原檢測(cè)。但在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物樣品前處理環(huán)節(jié),樣品儲(chǔ)運(yùn)條件對(duì)核酸檢測(cè)的影響未見報(bào)道。目前國內(nèi)在實(shí)驗(yàn)小鼠病毒檢測(cè)中核酸檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用較少,該方法在實(shí)驗(yàn)小鼠健康監(jiān)測(cè)的適用性有待探討。因此,本論文研究了小鼠樣品儲(chǔ)運(yùn)條件對(duì)三種病毒核酸檢測(cè)的影響,并應(yīng)用核酸檢測(cè)方法對(duì)我檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的送檢樣品開展了病毒核酸檢測(cè)方法的適用性研究。首先,本論文研究了樣品儲(chǔ)存溫度和不同類型保存劑對(duì)于三種病毒核酸檢出的影響。在室溫(25℃)和低溫(4℃)條件下,分別以生理鹽水和BufferAVL作保存劑保存樣品,用熒光定量PCR對(duì)樣品的小鼠肝炎病毒(MHV)、呼腸孤病毒Ⅲ型(Reo-3)及小鼠諾如病毒(MNV)核酸檢出量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示BufferAVL組樣品病毒核酸降解幅度最小,4℃保存的樣品病毒核酸檢出量下降幅度低于室溫組;以Buffer AVL為保存劑,4℃保存的樣品在3天時(shí)的病毒核酸檢出量的下降幅度在50%以下。因此以Buffer AVL作保存劑進(jìn)行低溫運(yùn)輸可有效保護(hù)病毒核酸。然后,本論文對(duì)小鼠樣品的核酸檢測(cè)與血清學(xué)檢測(cè)進(jìn)行了比較。在隨機(jī)選取的272份小鼠盲腸內(nèi)容物樣品和對(duì)應(yīng)的小鼠血清樣品中,MHV、Reo-3和MNV三種腸道病毒檢出率分別為17.3%、18.8%、16.9%;而血清學(xué)抗體陽性率分別為1.2%、1.2%、14.8%。MHV、Reo-3、MNV三種病毒的核酸檢測(cè)結(jié)果與血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果不完全一致。在實(shí)驗(yàn)小鼠病原監(jiān)測(cè)中核酸檢測(cè)方法作為病原學(xué)檢測(cè)方法可與血清學(xué)方法互補(bǔ)。本論文還對(duì)新技術(shù)NASBA-ELISA進(jìn)行了探索。以SV、Reo-3、MHV三種病毒RNA為模板進(jìn)行NASBA擴(kuò)增,NASBA擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳分析,條帶單一清晰;但未能通過ELISA方法實(shí)現(xiàn)產(chǎn)物信號(hào)放大。該方法在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用中需要進(jìn)一步優(yōu)化。
【圖文】：

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【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R446.1;R440

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2614004