【摘要】：目的:基于同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(ID-LC-MS/MS)建立準確可靠的血漿/血清醛固酮檢測方法,優(yōu)化方法學性能,使其達到候選參考方法標準。方法:以 ACQUITY UPLCI-CLASS System 色譜儀與 Xevo TQ-S 質(zhì)譜儀(Waters,美國)組建ID-LC-MS/MS系統(tǒng),以醛固酮(Sigma Aldrich)標準溶液作為定量標準,以醛固酮同位素標準溶液為內(nèi)標,以包括法進行定量。對樣本前處理方法與液質(zhì)系統(tǒng)條件進行選擇與優(yōu)化,根據(jù)相關(guān)EP文件要求,對方法定量限(LOQ)、不精密度、基質(zhì)效應(yīng)、正確度等性能指標進行評價。以Westgard網(wǎng)站上導(dǎo)出的血清醛固酮生物學變異標準評價方法性能。結(jié)果:以醛固酮-D8為內(nèi)標,以陰離子交換固相萃取(Oasis Max96孔板)為樣本前處理方法,以純水與純甲醇為流動相,以電噴霧離子源(ESI)負離子多反應(yīng)檢測模式(MRM)進行檢測,以359.16/189.14為定量離子對,以359.16/331.23為定性離子對。方法單次分析時間為6min,生物樣本中干擾可達到基線分離,無攜帶污染。方法定量限20pg/mL;低、中、高濃度樣本的重復(fù)性(N=5)與實驗室內(nèi)不精密度(N=25)分別為2.06%～2.44%與2.54%～3.66%,小于1/2生物學變異最佳不精密度要求(≤3.675%);低、中、高濃度平均加標相對回收率(N=6)為98.76%～99.11%,回收率偏差小于1/2生物學變異最佳偏倚要求(≤3.1%)。結(jié)論:本研究建立了一種靈敏特異的醛固酮同位素質(zhì)譜檢測方法,可作為血漿/清醛固酮檢測候選參考方法,為醛固酮測定標準化提供參考。目的:制備醛固酮候選基質(zhì)參考物質(zhì)(SRMs),為各廠家、實驗室提供參考溯源標準,改進醛固酮檢測結(jié)果質(zhì)量,推進臨床醛固酮檢測結(jié)果標準化。方法:根據(jù)ISO導(dǎo)則35與EP30-A,從北京醫(yī)院內(nèi)分泌實驗室收集剩余新鮮人血清用于制備不同濃度的SRMs。以醛固酮候選參考方法為SRMs進行定值。根據(jù)ISO導(dǎo)則35,對醛固酮SRMs的穩(wěn)定性、均勻性、凍融效應(yīng)與其在不同系統(tǒng)間的互通性進行考察。結(jié)果:根據(jù)醛固酮檢測臨床意義值范圍,制備低、中、高三種濃度水平醛固酮SRMs,其靶值(N=4)分別為 54.61±1.99(pg/g)、139.26±3.47(pg/g)、226.58±7.39(pg/g);三種濃度水平醛固酮SRMs均具有良好均勻性,在-80℃條件下半年穩(wěn)定性良好,無明顯凍溶效應(yīng);局限于當前醛固酮常規(guī)檢測方法的特異性與溯源性差異以及樣本收集量不足等問題,只在國內(nèi)兩種常見醛固酮常規(guī)方法(索靈、安圖)與一種質(zhì)譜方法(沃特世液質(zhì)系統(tǒng))間進行互通性評價,三種濃度醛固酮SRMs在索靈與沃特世液質(zhì)系統(tǒng)方法間具有互通性。以三種SRMs為樣本開展2019年醛固酮能力驗證調(diào)查項目,發(fā)現(xiàn)醛固酮測定方法間存在明顯校準差異,測定結(jié)果間可比性不足。以高、低濃度SRMs對實驗室的中濃度SRMs測定結(jié)果校準后,其測定值可比性明顯改善。結(jié)論:本研究中研制了低、中、高三種濃度水平的醛固酮SRMs,可為各廠家、實驗室間醛固酮檢測免疫法與質(zhì)譜法提供溯源與量值傳遞標準,開展正確度驗證計劃,有利于推進當前醛固酮檢測標準化。目的:比較國內(nèi)兩種主流化學發(fā)光免疫分析法(索靈、安圖)及一種同位素稀釋質(zhì)譜法臨床醛固酮測定結(jié)果的相關(guān)性與一致性;考察醛固酮候選參考物質(zhì)、廠家質(zhì)控品與室間質(zhì)評樣本的互通性;結(jié)合醛固酮室間質(zhì)評數(shù)據(jù),評價我國醛固酮檢測一致化/標準化現(xiàn)狀。方法:根據(jù)EP9-A3與EP14-A3指南文件,收集濃度初測值在檢測方法共同檢測范圍內(nèi)的45例剩余新鮮單人血漿樣本。根據(jù)EP15-A3指南文件對待評價方法精密度進行驗證。以Deming回歸分析對3種醛固酮常規(guī)檢測方法進行兩兩比對,以決定系數(shù)R2評價方法間相關(guān)性,以一致性相關(guān)系數(shù)(Concordance Correlation Coefficient,CCC)評價方法間一致性,以Bland-Ataman圖分析方法間絕對與相對偏差。根據(jù)EP14-A3指南文件對物質(zhì)互通性進行評價,以95%的可預(yù)測區(qū)間(Prediction Intervals,PI)為評價標準。結(jié)果:3種醛固酮常規(guī)檢測方法的精密度均達到聲稱水平且滿足方法學比對要求。索靈與常規(guī)同位素稀釋質(zhì)譜法檢測結(jié)果間具有較好相關(guān)性(R2=0.985)與一致性(CCC=0.967);安圖與索靈/常規(guī)同位素稀釋質(zhì)譜法檢測結(jié)果間相關(guān)性與一致性較差。三種醛固酮常規(guī)檢測方法間平均相對偏差均超過生物學變異最低偏倚要求(18.6%)。3種常規(guī)醛固酮檢測方法中,索靈與同位素稀釋質(zhì)譜法的相關(guān)性與特異性滿足互通性評價對方法的要求,低、中、高三種濃度水平的醛固酮候選基質(zhì)參考物質(zhì)在該兩種系統(tǒng)上具有互通性,而索靈、安圖廠家質(zhì)控品在該兩種系統(tǒng)上均不具備互通性,室間質(zhì)量評價樣本的互通性難以定論。室間質(zhì)量評價結(jié)果顯示,按試劑分組后,組間均值變異大,且各組內(nèi)醛固酮測定結(jié)果變異大,提示當前醛固酮測定一致化不理想。結(jié)論:醛固酮常規(guī)檢測方法測定醛固酮結(jié)果存在一定差異,方法特異性不足與溯源不統(tǒng)一仍然是當前醛固酮檢測領(lǐng)域亟待解決的難題。醛固酮參考測量方法、具有互通性的醛固酮基質(zhì)參考物質(zhì)與醛固酮標準化計劃如:室間質(zhì)量評價計劃的開展,是推進醛固酮檢測結(jié)果標準化、結(jié)果互認、原發(fā)性醛固酮增多癥篩查與確診標準一致化的關(guān)鍵之一。
【圖文】：

lp如濃度醛固酮D一內(nèi)標標準溶液色譜圖

昌PE處理后僅達到基本分離的血漿樣本色譜圖
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R446.1

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本文編號：2608818