【摘要】：背景:腎臟具有較強的代償能力,損傷早期并沒有明顯的臨床癥狀,經(jīng)常被人們所忽略,當(dāng)出現(xiàn)明顯癥狀時往往已處于中晚期,這對腎功能損傷患者的及時治療及有效預(yù)后帶來很大影響~([1,2])。由此,腎功能損傷的早期篩查診斷就顯得尤為重要。尿白蛋白和胱抑素C是腎功能損傷早期篩查及輔助診斷的重要指標(biāo),且研究表明二者聯(lián)合檢測可提高腎損傷檢測靈敏度~([3,4])。目前,臨床上針對胱抑素C和白蛋白檢測主要以免疫比濁法為主,此方法主要適于擁有相對完善檢驗設(shè)備的大中型醫(yī)院,不適于基層或社區(qū)醫(yī)院的床旁快速檢測,限制了其臨床應(yīng)用。熒光免疫層析技術(shù)不僅滿足床旁快速檢測的需求,且具有靈敏度高、操作簡便等優(yōu)點;此技術(shù)可彌補國內(nèi)胱抑素C、白蛋白檢測方法的缺憾,對患者早期腎損傷的發(fā)現(xiàn)具有重要臨床價值。目的:通過對熒光免疫層析工藝進行優(yōu)化,建立一種快速、定量檢測腎損傷標(biāo)志物胱抑素C、白蛋白的新型方法,為熒光免疫層析法應(yīng)用于該類疾病的臨床檢測奠定基礎(chǔ)。方法:1.參考品制備:使用樣品稀釋液分別稀釋胱抑素C、白蛋白抗原,制備胱抑素C、白蛋白室內(nèi)參考品。2.尿液胱抑素C熒光免疫層析試紙條的研制:使用熒光微球標(biāo)記胱抑素C抗體;羊抗鼠IgG作為質(zhì)控線C線,配對胱抑素C抗體作為檢測線T線,包被在同一NC膜上;利用雙抗體夾心原理和熒光免疫層析原理制備試紙條。3.尿液白蛋白熒光免疫層析試紙條的研制:使用熒光微球標(biāo)記白蛋白抗體;羊抗鼠IgG作為質(zhì)控線C線,配對白蛋白抗體作為檢測線T線,包被在同一NC膜上;利用雙抗體夾心原理和熒光免疫層析原理制備試紙條。4.試紙條工藝研究及性能評價:分別對試紙條制備過程中主要原材料及工藝進行篩選優(yōu)化,并對其性能進行評價。結(jié)果:1.制備了一套胱抑素C室內(nèi)參考品和一套白蛋白室內(nèi)參考品。2.建立了定量檢測尿液胱抑素C的熒光免疫層析快速檢測方法。胱抑素C檢測線性范圍為0.05-5 mg/L;最低檢出限為0.03 mg/L;試紙條的批內(nèi)變異系數(shù)(CV)均小于10%,批間變異系數(shù)均小于15%。試紙條的回收率在85%-115%之間。采用本研究制備的試紙條檢測免疫比濁法檢測過的50份樣本,結(jié)果顯示兩種方法具有較好的相關(guān)性(R~2為0.9674)。3.建立了定量檢測尿液白蛋白的熒光免疫層析快速檢測方法。白蛋白檢測線性范圍為5-200 mg/L;最低檢出限為2.5 mg/L;試紙條的批內(nèi)變異系數(shù)均小于10%,批間均小于15%。試紙條的回收率在85%-115%之間。采用本研究制備的試紙條檢測免疫比濁法檢測過的50份樣本,結(jié)果顯示兩種方法具有較好的相關(guān)性(R~2為0.9796)。結(jié)論:建立了一種快速、定量檢測人尿液中胱抑素C和白蛋白含量的熒光免疫層析方法,為熒光免疫層析法應(yīng)用于腎功能損傷早期的臨床檢測奠定基礎(chǔ)。
【圖文】：

斬切機將結(jié)合墊裁剪為寬 8 mm、長 20 mm；以 50 μL/cm 進行噴涂處理，，放置于 37℃恒溫干燥箱的熒光微球-抗體復(fù)合物均勻噴涂在處理后的結(jié)合置于 37℃恒溫干燥箱中 2h，干燥后密封在鋁箔袋備用。品墊的制備切機將樣品墊裁剪為寬 19 mm、長 20 mm；墊處理液（含 1%BSA、0.5%吐溫-20 的 PBS 緩沖液），放置于 37℃恒溫干燥箱中 2h 后，將制備好的樣品。紙條的組裝條組裝示意圖 3.1。依次將樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖 PVC 底板上[78]，組裝完成后使用裁條機將其切割成卡殼，將其密封在含有干燥劑的鋁箔袋中，放置 4℃

圖 3.2 試紙條的判斷標(biāo)準(zhǔn)示意圖1.失效或取樣失敗 2.陰性 3.陽性免疫層析試紙條實驗材料研究的選擇墊原料為玻璃纖維膜，其承載著的玻璃纖維膜質(zhì)地及孔徑對熒光墊吸附能力過強，可能會影響樣球復(fù)合物的大量聚集，最終影響B(tài)RC-875、HBRC-855、HBRC-8紙條制備工藝進行胱抑素 C 熒光樣三組試紙條，反應(yīng) 10 min 后，膜。膜的選擇
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R446.6;R692

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本文編號：2608447