【摘要】：研究背景與目的據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道,每年大約有300萬5歲以下兒童因?yàn)榛加屑毙院粑栏腥净蛘吒篂a病而死亡。其中急性呼吸道感染是世界范圍內(nèi)引起人類發(fā)病甚至死亡的最常見的一種急性傳染病,近年來頻頻爆發(fā)新型急性呼吸道傳染病。另一方面,腹瀉病是全球范圍內(nèi)五歲以下兒童的第二大死因�？焖�、準(zhǔn)確檢測呼吸道和感染性腹瀉病原體是疾病診治與預(yù)控的關(guān)鍵。本研究利用液相芯片技術(shù)對兒童的急性呼吸道感染以及感染性腹瀉病原體進(jìn)行檢測,為重大傳染病原體核酸快速應(yīng)急檢測平臺的建立提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法(1)采集廣東省第二人民醫(yī)院的兒童呼吸道咽拭子臨床樣品74份,腸道腹瀉糞便臨床樣品96份,對樣品進(jìn)行預(yù)處理后,采用核酸提取試劑盒提取樣品的核酸;(2)采用Luminex液相芯片試劑盒對提取的74份咽拭子標(biāo)本核酸、96份糞便標(biāo)本核酸分別進(jìn)行檢測;(3)引用熒光定量qPCR法分別74份咽拭子標(biāo)本核酸、96份糞便標(biāo)本核酸進(jìn)行檢測;(4)對檢測結(jié)果不一致標(biāo)本的多重PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆并測序、BLAST分析。結(jié)果(1)74例兒童咽拭子標(biāo)本經(jīng)液相芯片和qPCR方法檢測,陽性檢出率分別為77.0%與68.9%,混合感染的陽性檢出率分別為33.8%、25.6%。共檢出8種病毒包括腸道病毒、鼻病毒、人博卡病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、冠狀病毒以及H1N1病毒。其中人博卡病毒檢出率最高,其次是腸道病毒與鼻病毒;分別對兩種方法對每一種病毒的檢出進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較,液相芯片對人博卡病毒、腸道病毒、鼻病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、H1N1病毒檢出率與qPCR方法比較的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩種方法的一致率為79.72%�？傮w而言,液相芯片對兒童咽拭子標(biāo)本的陽性檢出率、混合感染的陽性檢出率、每一種病毒檢出率高于qPCR。(2)96例兒童糞便標(biāo)本經(jīng)過Luminex液相芯片和qPCR方法檢測后,陽性檢出率分別為65.63%和64.58%,混合感染的陽性檢出率分別為26.04%、24.0%。主要檢出7種病原微生物,分別為:腸道腺病毒、諾如病毒、輪狀病毒A、空腸彎曲桿菌、大腸桿菌、產(chǎn)腸毒素型大腸桿菌和沙門氏菌。其中沙門氏菌的檢出率最高,其次是空腸彎曲桿菌、A組輪狀病毒、諾如病毒。分別對兩種方法檢出的每一種腸道病原體進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較,液相芯片對沙門氏菌、空腸彎曲桿菌、A組輪狀病毒以及諾如病毒檢出率與qPCR方法比較的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩種方法的一致率為91.67%。總體而言,液相芯片對兒童糞便標(biāo)本的陽性檢出率、混合感染的陽性檢出率與qPCR方法相當(dāng)。但液相芯片對于每一種糞便病原體檢出率更高。(3)對兩種方法檢測不一致的15例兒童咽拭子臨床標(biāo)本和13例兒童糞便臨床標(biāo)本的多重PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆并測序鑒定,測序結(jié)果與qPCR的檢測結(jié)果基本一致。結(jié)論(1)液相芯片技術(shù)可以較準(zhǔn)確地檢測呼吸道和腸道糞便的病原體,與qPCR相比具有所需高通量、檢出率高、所需樣品量少以及實(shí)驗(yàn)操作相對簡單等優(yōu)勢,可用于呼吸道和腸道病原體的快速應(yīng)急檢測。(2)液相芯片技術(shù)一次實(shí)驗(yàn)可平行檢測十余種病原體,尤其適合混合感染病原體的檢測。
【圖文】：

的結(jié)果與熒光定量ｑＰＣＲ的檢測結(jié)果進(jìn)行配對計(jì)數(shù)資料的ｘ２檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。逡逑以熒光定量ｑＰＣＲ的檢測結(jié)果為參考，計(jì)算兩種方法的敏感度、特異性、陽性預(yù)逡逑測值和陰性預(yù)測值，以Ｐ＜0．0５為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。逡逑２．３結(jié)果逡逑２．邋３．１邋Ｌｕｍｉｎｅｘ液相芯片檢測呼吸道病毒檢出情況逡逑利用ｘＴＡＧ？ＲＶＰＦＡＳＴｖ２試劑盒的液相芯片方法對７４例兒童咽拭子臨床樣逡逑本進(jìn)行呼吸道病原體的核酸檢測，結(jié)果顯示５７份樣本病毒陽性，陽性檢出率為逡逑７７．０％。人博卡病毒檢出率最高為６４．９％邋（４８／７４），，其次是腸道病毒與鼻病毒均逡逑為２９．７％邋（２２／７４），腺病毒為８．１％邋（６／７４），呼吸道合胞病毒與Ｈ１Ｎ１均為６．８％逡逑（５／７４），副流感病毒與冠狀病毒均為１．４％邋（１／７４），沒有檢出乙型流感病毒和逡逑人偏肺病毒（見圖２－１）。其中只感染一種呼吸道病毒的陽性率為４３．２％（３２／７４），逡逑混合感染的陽性率為３３．８％邋（２５／７４），混合感染是指患兒受到２種或２種以上逡逑的病毒共同感染，混合感染檢測結(jié)果見表２－１１。逡逑

邐第三章利用液相芯片技術(shù)檢n,兒童感染性腹瀉病原體邐逡逑其中只感染一種腸道病毒或細(xì)菌的陽性率為３９．５８％邋（３８／９６），混合感染的陽性逡逑率為２６．０４°／。（２５／９６），混合感染是指患兒受到２種或２種以上的腸道病毒或（和）逡逑細(xì)菌共同感染，混合感染檢測結(jié)果見表３－１２。逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R725.6;R440

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本文編號：2607724