【摘要】：目的:探討嗜鉻粒蛋白A衍生多肽CGA47-66(即CHR,Chromofungin)對(duì)LPS所誘導(dǎo)的永生化人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞高通透性的影響及其相關(guān)分子機(jī)制。方法:(1)分別用不同濃度的LPS(0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、50μg/ml)刺激HBMEC細(xì)胞,用CCK8法檢測(cè)細(xì)胞活力變化并篩選出LPS最佳處理濃度;(2)分別用LPS、CHR、CGA4-16作用于人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞,Western blot法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)緊密連接蛋白的表達(dá)情況,篩選出最佳作用的時(shí)間點(diǎn);(3)分別用LPS、CHR、CGA4-16作用于人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞,Transwell小室法及EVOM法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞相對(duì)通透性;Western blot及RT-PCR法檢測(cè)緊密連接蛋白(ZO-1和Claudin-5)的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)與空白組相比,隨著LPS濃度增加HBMEC細(xì)胞的活性受到顯著抑制(均P0.05);當(dāng)LPS濃度為5μg/ml時(shí),細(xì)胞抑制率約為50%。(2)隨著LPS作用時(shí)間延長,其細(xì)胞內(nèi)緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Claudin-5的表達(dá)逐漸下調(diào),6h后蛋白表達(dá)量降到最低(均P0.05),12h和24h后其蛋白表達(dá)與6h相比無明顯差異。(3)LPS作用下HBMEC單層細(xì)胞電阻值明顯降低(t=-18.214,P0.001),細(xì)胞通透性顯著升高(t=6.083,P=0.004),ZO-1、Claudin-5的蛋白和mRNA表達(dá)明顯下調(diào)(均P0.05),而CHR可顯著改善上述變化(均P0.05)。結(jié)論:嗜鉻粒蛋白A衍生多肽CHR能夠改善LPS所致的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞高通透性,其機(jī)制可能與其緊密連接相關(guān)蛋白的表達(dá)上調(diào)有關(guān)。
【圖文】：

圖１邋ＣＣＫ８法檢測(cè)細(xì)胞活性逡逑

１腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)逡逑腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞在顯微鏡下呈梭形或橢圓形，細(xì)胞胞膜透亮，邊界清晰，逡逑胞核清晰可見（圖１）。逡逑圖１邋ＨＢＭＥＣ細(xì)胞形態(tài)（ｌ0ｘｌ0倍）逡逑Ｆｉｇ．邋１邋Ｔｈｅ邋ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ邋ｏｆ邋ＨＢＭＥＣ邋ｃｅｌｌ邋（１０ｘ１０）逡逑２邋ＬＰＳ對(duì)ＨＢＭＥＣ細(xì)胞活性的影響逡逑ＬＰＳ對(duì)于ＨＢＭＥＣ細(xì)胞的活性具有一定的濃度依賴性。隨著ＬＰＳ濃度（０．０１、逡逑０．０５、０．１、０．５、１、５、１０、５0ｎｇ／ｍｌ）的增加，細(xì)胞抑制率逐漸上升（０．２１６±０．０５０，逡逑０．２４７±０．０３１，０．２６７±０．０６３，邋０．３０２±０．０５７，邋０．３９８士０．０３２，邋０．５０８±０．０４４，邋０．５９２±０．０４３，逡逑０．７７２±０．０５０）。當(dāng)ＬＰＳ為５ｎｇ／ｍｌ時(shí)，細(xì)胞的生長抑制率約為５０％；當(dāng)ＬＰＳ濃度為逡逑Ｏ．Ｏｌｊｘｇ／ｍｌ時(shí)，細(xì)胞抑制率最低，約為２１．６％；當(dāng)ＬＰＳ為５０ｐｇ／ｍｌ時(shí)，細(xì)胞的生長逡逑抑制率達(dá)最高，約為７７．２％邋（見圖２）。逡逑１７逡逑
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R459.7

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本文編號(hào)：2607510