【摘要】：囊性纖維化(cystic fibrosis,CF)疾病是一種重要的遺傳疾病,目前仍然沒(méi)有找到很好的治療方法,基因治療作為一種最根本的治療手段顯得非常重要,但是目前針對(duì)CFTR基因的編輯效率非常低下,大大限制了基因治療的發(fā)展。本研究建立了 RNP結(jié)合單鏈Oligo的高效基因編輯系統(tǒng),借助該系統(tǒng)對(duì)人的iPS細(xì)胞的CFTR基因的主要位點(diǎn)(dF508位點(diǎn)、G542X位點(diǎn)與G551D位點(diǎn))進(jìn)行編輯,并對(duì)方法進(jìn)行了優(yōu)化,在不使用慢病毒與篩選標(biāo)記的情況下,使得基因編輯效率大幅度提高,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他文獻(xiàn)報(bào)道(從以前的不到1%提高到20%),這項(xiàng)工作一方面可為CF疾病研究提供更多細(xì)胞模型,另一方面為其他研究者提供了一套針對(duì)CFTR基因主要位點(diǎn)的高效編輯方法,使得針對(duì)該疾病的基因治療發(fā)展變得更為迅速,再者該項(xiàng)研究可以為其他單位點(diǎn)突變引起的遺傳疾病的治療提供一個(gè)更為高效的方法。
【圖文】：

染效率檢測(cè)逡逑率的高低直接決定著基因編輯的效率，我們對(duì)Ｃｅｌｅｔ果進(jìn)行了檢測(cè)，我們首先將５ｕｇ帶有綠色熒光蛋白基Ｃｅｌｅｔｒｉｘ公司的電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)染進(jìn)入２９３細(xì)胞，轉(zhuǎn)染的電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果顯示２９３細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可針對(duì)蛋白是否具有較高的轉(zhuǎn)染效率，，我們?cè)谌耍椋校蛹?xì)０ｍｓ的條件下將１０ｕｇ紅色熒光蛋白嘗試了電轉(zhuǎn)，培養(yǎng)微鏡下觀察，結(jié)果顯示基本上所有的ｉＰＳ細(xì)胞都能顯微鏡進(jìn)行觀察，結(jié)果顯示所有的細(xì)胞內(nèi)具有紅色１００％。綜上所述Ｃｅｌｅｔｒｉｘ公司的電轉(zhuǎn)儀具有很好具有很高的轉(zhuǎn)染效率。逡逑Ａ逡逑

圖２．邋ｓｇＲＮＡ設(shè)計(jì)逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．邋Ｔｈｅ邋ｄｅｓｉｇｎ邋ｏｆ邋ｓｇＲＮＡ逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士后
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R596.1;R450

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本文編號(hào)：2600511