【摘要】：背景膿毒癥是機體對感染的反應失調(diào)而導致危及生命的器官功能障礙。膿毒癥的本質(zhì)是由病原微生物引起的,伴有其他有害刺激因素參與的對機體造成嚴重損害的過度炎癥反應。膿毒癥是因宿主對感染的反應失調(diào)導致的,這種反應失調(diào)不僅反應在促炎和抗炎反應失調(diào),免疫失衡,還表現(xiàn)為凝血功能紊亂。在膿毒癥發(fā)病過程中凝血、纖溶、炎癥相互影響,導致抗凝物質(zhì)減少,凝血活化,血小板活化和內(nèi)皮細胞功能障礙,使組織型纖溶酶原激活物(Tissue plasminogen activetor,tPA)產(chǎn)生減少、纖溶抑制物增多,因此膿毒癥彌漫性血管內(nèi)凝血(Disseminated intravascular coagulation,DIC)時纖溶受到抑制。四連接素(tetranectin,TN)對纖溶酶原的Kringie4區(qū)有特殊的親和性,能夠與纖溶酶原結(jié)合激活纖溶酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w溶酶,促進溶血。因此我們目前推測TN參與了膿毒癥凝血功能紊亂的發(fā)病過程。目的通過Western Blotting實驗檢測TN在正常人、肺炎患者、膿毒癥患者血漿中的表達水平;檢測TN在正常小鼠血漿、腎臟、肺臟、肝臟、脾臟、心臟、腦組織勻漿液中的表達水平;檢測TN在盲腸結(jié)扎穿孔法(The cecal ligation and perforation,CLP)膿毒癥小鼠模型血漿、肺臟組織勻漿液中的表達水平。有望為膿毒癥的診斷與治療提供有價值的依據(jù)。研究方法1.研究對象的選擇:采用前瞻性、隨機、臨床對照研究(RCT)方法,選擇2016-09-22至2016-12-02在河南大學淮河醫(yī)院體檢科的正常人;2016-09-22至2016-12-02在河南大學淮河醫(yī)院呼吸與危重癥科的肺炎患者和膿毒癥患者;正常小鼠;CLP膿毒癥小鼠模型。2.研究分組:(1)體檢科正常人:正常人5例作為對照組,其中男5例,女0例;年齡42~80歲平均年齡在58.4±2.9歲。(2)肺炎患者:選取肺炎患者6例,其中男6例,女0例;年齡40~80歲,平均年齡在59.6±4.6歲。(3)膿毒癥患者:選取膿毒癥患者8例;其中男8例,女0例;年齡45-80歲,平均年齡60±7.9歲;膿毒癥患者SOFA評分1~6分3例,7~12分3例,13~18分1例,19~24分1例。(4)選擇BALB/c雄性,7-8周正常小鼠1只;CLP膿毒癥小鼠模型21只。3.排除標準3.1膿毒癥患者排除標準:(1)年齡18歲;(2)妊娠及哺乳期婦女;(3)有免疫系統(tǒng)疾病者;(4)HIV陽性者;(5)肝臟或腎臟功能衰竭者;(6)入住RICU48小時者;(7)前6個月內(nèi)接受化療者;(8)目前或前3個月接受糖皮質(zhì)激素或其他免疫調(diào)節(jié)劑、免疫抑制劑治療者。3.2肺炎患者排除標準:(1)肺結(jié)核;(2)肺部腫瘤;(3)非感染性肺間質(zhì)性疾病;(4)肺嗜酸性粒細胞浸潤癥。(5)肺血管炎;(6)肺不張;(7)肺水腫;(8)肺栓塞。4.入選標準:(1)社區(qū)獲得性肺炎指南(2016版)(2)膿毒癥指南3.0(2016版)5.實驗標本:(1)正常人血漿標本;(2)肺炎患者血漿標本;(3)膿毒癥患者血漿標本;(3)正常小鼠血漿、肺臟、肝臟、心臟、脾臟、腎臟、腦組織標本。(4)0h、2h、6h、12h、24h、48h、72hCLP膿毒癥小鼠模型的血漿、肺臟組織標本。6.實驗目的:通過Western Blotting實驗檢測TN在實驗標本中的表達水平。7.最后數(shù)據(jù)分析采用均數(shù)±標準差(sx?)表示,在不同時間點取不同組的樣品數(shù)據(jù),用SPSS 22.0等軟件對結(jié)果進行統(tǒng)計分析,單因素方差分析,重復測量方差分析,P0.05被認為有統(tǒng)計學意義。結(jié)果1.TN在人血漿中的表達水平結(jié)果示:正常人最高,肺炎患者次之,膿毒癥患者最低,(P0.05有統(tǒng)計學意義)。2.TN在正常小鼠臟器中的表達水平結(jié)果示:TN在肺臟組織勻漿液中的表達水平較肝臟、腎臟、脾臟、心臟、腦組織勻漿液中的表達水平明顯高。3.TN在CLP膿毒癥小鼠模型肺臟組織勻漿液中表達水平結(jié)果示:在0h、2h表達水平有升高,在6h、12h的表達水平逐漸下降,在24h、48h、72h時表達水平逐漸升高。4.TN在CLP膿毒癥小鼠模型血漿中的表達水平結(jié)果示:在0h、2h、6h的表達水平逐漸降低,12h較24h的表達水平高,24h、48h、72h的表達水平逐漸升高。結(jié)論1.TN在膿毒癥患者血漿中的表達水平下降。2.TN在正常小鼠臟器中,肺臟組織勻漿液中表達水平最高。3.TN在CLP膿毒癥小鼠模型肺臟組織勻漿液中24h、48h、72h的表達水平與血漿標本中的表達水平基本一致。4.TN在CLP膿毒癥小鼠模型血漿中24h、48h、72h的表達水平逐漸升高推測是肺臟合成導致的。
【圖文】：

圖 3-2(a): TN 在正常小鼠的血漿、肺臟、心臟、腎臟、肝臟、脾臟、腦組中 Western Blotting 結(jié)果的表達。圖 3-2(b)：TN 在肺臟組織勻漿液中的表達水平最高。

圖 3-4(a)：TN 在 CLP 膿毒癥小鼠模型血漿中 Western Blotting 結(jié)果的表達。圖 3-4(b)：TN 在 CLP 膿毒癥小鼠模型血漿中的表達水平示：在 0h、2h、6h 表平逐漸下降，，12h 較 24h 表達水平高，在 24h、48h、72h 表達水平又逐漸升高。
【學位授予單位】：河南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R459.7

【參考文獻】

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本文編號：2599403