【摘要】：目的:研究前發(fā)現(xiàn),慶大霉素的亞抑制濃度預(yù)處理可以抑制大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的叢動(dòng)能力,該機(jī)制可能與抑制琥珀酸脫氫酶(SDH)表達(dá),延胡索酸產(chǎn)生減少相關(guān),提示慶大霉素在治療大腸桿菌感染有其自身優(yōu)勢(shì)。本研究通過對(duì)臨床分離菌株及標(biāo)準(zhǔn)菌株分別進(jìn)行慶大霉素預(yù)處理,結(jié)合體內(nèi)外實(shí)驗(yàn),及熒光實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證亞抑制濃度慶大霉素可降低細(xì)菌毒力及其相關(guān)機(jī)制。方法:1利用體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證慶大霉素對(duì)臨床菌株的叢動(dòng)性抑制作用,用肉湯稀釋法測(cè)定臨床菌株的最低抑菌濃度(MIC),進(jìn)而使用1/2MIC的慶大霉素處理菌株,未經(jīng)處理的作為對(duì)照組,兩組各取2ul菌液接種于叢動(dòng)(swarm)平板及游動(dòng)(swim)平板,在室溫下孵育,測(cè)量菌落直徑。2通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證1/2MIC的慶大霉素可以減低細(xì)菌毒力。3大腸桿菌的運(yùn)動(dòng)性主要靠鞭毛,參與鞭毛運(yùn)動(dòng)的基因目前已報(bào)道的有motA、motB等,fliA作為二級(jí)調(diào)控系統(tǒng)亦參與鞭毛合成。通過RT-PCR觀察藥物處理前后fliA的基因表達(dá)量間接推斷其與降低毒力機(jī)制相關(guān),為后續(xù)探討SDH-延胡索酸-fliA信號(hào)通路在慶大霉素抑制大腸桿菌叢動(dòng)性降低毒力的作用機(jī)制提供理論依據(jù)。結(jié)果:1體外驗(yàn)證證實(shí),亞抑制濃度的慶大霉素處理后臨床菌株的叢動(dòng)性明顯抑制。共進(jìn)行了三次實(shí)驗(yàn),每次實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。2體內(nèi)試驗(yàn),購買20g左右昆明雄性小鼠,按標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922和臨床菌株968(分離于尿液標(biāo)本)分組,其中藥物處理的為實(shí)驗(yàn)組,未經(jīng)處理的為對(duì)照組,進(jìn)行腹腔注射小鼠,結(jié)果發(fā)現(xiàn)每組(n=10)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組注射0.5×10~8 cfu、0.5×10~7 cfu的大腸桿菌后,經(jīng)1/2MIC慶大霉素預(yù)處理后的大腸桿菌毒力明顯下降,小鼠48hr內(nèi)死亡率10~8 cfu/ml下,標(biāo)準(zhǔn)菌株由100%降至50%,臨床菌株由100%下降至70%;10~7 cfu/ml下,標(biāo)準(zhǔn)菌株由50%降至0%,臨床菌株由30%下降至0%,結(jié)果表明,在亞抑制濃度的慶大霉素作用下,大腸桿菌的毒力較前減低。因試驗(yàn)時(shí)間有限,后期可繼續(xù)擴(kuò)增試驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量進(jìn)一步驗(yàn)證。3 RT-PCR,慶大霉素預(yù)處理的為實(shí)驗(yàn)組,慶大霉素與延胡索酸共同處理的也為實(shí)驗(yàn)組,不做處理的為對(duì)照組,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR,得出單用慶大霉素處理的fliA表達(dá)量下調(diào),慶大霉素與延胡索酸同時(shí)處理的因延胡索酸濃度fliA表達(dá)量有所不同,PCR結(jié)果為我們提出的假設(shè):慶大霉素抑制SDH轉(zhuǎn)錄,導(dǎo)致延胡索酸合成減少,延胡索酸作為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子引發(fā)鞭毛相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子fliA(σ28)的下調(diào),進(jìn)而導(dǎo)致下游部分鞭毛基因下調(diào),最終使得大腸桿菌叢動(dòng)性下降。結(jié)論:1亞抑制濃度慶大霉素對(duì)大腸桿菌具有抑制其叢動(dòng)性進(jìn)而降低毒力的作用。2亞抑制濃度慶大霉素可通過降低細(xì)菌鞭毛相關(guān)基因表達(dá)量進(jìn)而抑制其運(yùn)動(dòng)性。
【圖文】：

68swarm運(yùn)動(dòng)

1.3.3 通過實(shí)驗(yàn)得到運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖1-2 ATCC 25922 swarm運(yùn)動(dòng) 圖1-3 ATCC 25922 swim運(yùn)（P＜0.05，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義） （P＜0.05，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R446.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2597345