【摘要】：在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的臨床治療過程中,放射治療是一種重要的輔助治療手段,但由于治療過程中NSCLC耐輻射性的存在,嚴(yán)重影響了 NSCLC病人的治療療效和預(yù)后情況。因此,尋找到一個(gè)新穎有效的放療增敏劑是目前亟需解決的問題。研究表明,microRNAs(miRNAs)參與了包括輻射增敏在內(nèi)的許多生物進(jìn)程。本研究發(fā)現(xiàn),miR-365可以通過調(diào)控CDC25A來調(diào)節(jié)NSCLC細(xì)胞的放射敏感性,且miR-365的表達(dá)水平與NSCLC細(xì)胞的放射敏感性呈正相關(guān)。通過MTT和克隆形成實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染miR-365能夠使輻射抵抗的NSCLC細(xì)胞A549的放射敏感性明顯增加,而轉(zhuǎn)染anti-miR-365則能夠使輻射敏感的NSCLC細(xì)胞H460的放射敏感性顯著降低。為了探討miR-365提高NSCLC輻射敏感性的機(jī)制,我們初步篩選出了 miR-365的下游靶基因CDC25A。報(bào)告基因、RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,miR-365可以通過靶向CDC25A的3'UTR來調(diào)節(jié)其mRNA和蛋白表達(dá)水平。此外,我們通過MTT、EdU和克隆形成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),miR-365能夠通過下調(diào)CDC25A的表達(dá)水平進(jìn)而增強(qiáng)NSCLC細(xì)胞A549和H1299的放射敏感性。同時(shí),在體內(nèi)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)的研究中,我們得出與體外實(shí)驗(yàn)一致的結(jié)果,即miR-365能夠?qū)SCLC細(xì)胞產(chǎn)生顯著的輻射增敏作用。綜上所述,miR-365能夠通過靶向CDC25A進(jìn)而發(fā)揮對(duì)NSCLC細(xì)胞的輻射增敏作用。本研究結(jié)果為miR-365在NSCLC放射治療中的功能和潛在機(jī)制提供了新的見解,同時(shí)表明miR-365在NSCLC臨床放療實(shí)踐中具有可觀的應(yīng)用潛力。目的探討用siRNA敲降乙肝病毒X蛋白結(jié)合蛋白(HBXIP)的表達(dá)對(duì)宮頸癌ME-180細(xì)胞的增殖能力及放射敏感性的影響。方法根據(jù)不同的處理方法,分別按兩種分組方式進(jìn)行分組。(1)把宮頸癌ME-180細(xì)胞分為4組:空白對(duì)照組、4Gyγ射線照射組、HBXIP-siRNA轉(zhuǎn)染組以及HBXIP-siRNA++y射線照射聯(lián)合組。采用MTT和克隆形成實(shí)驗(yàn)法來檢測(cè)細(xì)胞增殖;采用qRT-PCR檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2及Bid的表達(dá);Western blot檢測(cè)蛋白激酶AKT的磷酸化水平。(2)把宮頸癌ME-180細(xì)胞分為3組:空白對(duì)照組、HBXIP-siRNA單獨(dú)處理組、HBXIP-siRNA和AKT共轉(zhuǎn)染組。對(duì)3組細(xì)胞進(jìn)行不同劑量的γ射線照射,并采用克隆形成實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)細(xì)胞生長。采用Studentt-test對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果MTT實(shí)驗(yàn)和克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與γ射線照射組相比,HBXIP-siRNA轉(zhuǎn)染+γ射線照射聯(lián)合組的宮頸癌ME-180細(xì)胞增殖率明顯降低(t=11.63、12.17,均P0.01),并伴隨抑凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)的降低(t=10.88,P0.01)和促凋亡蛋白Bid表達(dá)的增高(t=9.31,P0.01)。γ射線照射明顯上調(diào)了 HBXIP蛋白的表達(dá)水平和AKT蛋白的磷酸化水平,而轉(zhuǎn)染HBXIP-siRNA則抑制了γ射線照射導(dǎo)致的AKT磷酸化水平的升高。另外,與HBXIP-siRNA單獨(dú)處理組相比,HBXIP-siRNA和AKT共轉(zhuǎn)染組中HBXIP-siRNA對(duì)宮頸癌ME-180細(xì)胞增殖的影響顯著降低(t=8.96,P0.01)。結(jié)論降低HBXIP蛋白表達(dá)可以抑制輻照誘導(dǎo)的AKT磷酸化水平,進(jìn)而降低宮頸癌ME-180細(xì)胞的增殖能力,同時(shí)增強(qiáng)其放射敏感性。
【圖文】：

４邋Ｇｙ和８邋Ｇｙ邋ｙ射線照射均會(huì)使Ａ５４９細(xì)胞中ｍｉＲ－３６５的表達(dá)水平顯著下逡逑調(diào)；但相比空白處理組，４邋Ｇｙ邋丫射線照射和８邋Ｇｙ邋Ｙ射線照射對(duì)Ｈ４６０細(xì)胞中ｍｉＲ－３６５逡逑表達(dá)水平無顯著影響（圖１－２Ａ，Ｂ）。逡逑２１逡逑

８邋Ｇｙ的丫射線照射�？寺⌒纬蓪�(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與空白處理組相比，轉(zhuǎn)染ｍｉＲ－３６５能逡逑夠顯著增強(qiáng)Ａ５４９細(xì)胞的放射敏感性，而轉(zhuǎn)染ａｎｔｉ－ｍｉＲ－３６５則能夠顯著降低Ｈ４６０逡逑細(xì)胞的放射敏感性。（圖１－３邋Ａ，Ｂ）逡逑Ａ邐Ｒ逡逑＾邋ｔ邋－邐Ａ５４９邐°邐．邐Ｈ４６０逡逑Ｉ邋0．0，，邐Ｘｓ｝邋＾邋００１－邐Ｖｌ逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邐＿§邐－ａ－Ｃｏｎｔｒｏｌ邐＼邐：逡逑Ｉ邐＋—－３６５邐、邐｜邐—ａｎｔｉ－ｍｉＲ－３６５邐、」逡逑Ｚ邋０邋００１４邐０邐１邐２邐＇邐４邐＇邐８邐＇邋Ｚ邋０邋００１邋＇邐０邐＇邐２邐＇邐４邐＇邐８邐＇逡逑ＩＲ邋（Ｇｙ）邐ＩＲ邋（Ｇｙ）逡逑圖１－３邋ＭｉＲ－３６５表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系放射敏感性呈正相關(guān)逡逑克降形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ｍｉＲ－３６５或ａｎｔｉ－ｍｉＲ－３６５對(duì)肺癌Ａ５４９邋（Ａ）或Ｈ４６０邋（Ｂ）細(xì)胞放射敏感逡逑性的影響。與免ｆｔ處埋組相比，轉(zhuǎn)染ｍｉＲ－３６５能使Ａ５４９細(xì)胞的放射敏感性顯著增強(qiáng)，而轉(zhuǎn)染逡逑ａｎｔｉ－ｍｉＲ－３６５則能使Ｈ４６０細(xì)胞的放射敏感性顯著降低。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)３次。＊＊，邋Ｐ＜０．０１；邋？檢逡逑驗(yàn)。逡逑另外，對(duì)Ａ５４９細(xì)胞進(jìn)行４種處理：空白處理、轉(zhuǎn)染ｍｉＲ－３６５、４邋Ｇｙ邋丫射線照射、逡逑轉(zhuǎn)染ｍｉＲ－３６５聯(lián)合４邋Ｇｙ邋Ｙ射線照射。ＭＴＴ實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與空白處理相比，雖然單逡逑獨(dú)的ｍｉＲ－３６５轉(zhuǎn)染或丫射線（４邋Ｇｙ）照射都抑制了邋Ａ５４９細(xì)胞的生長，但生長程度無逡逑統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而ｍｉＲ－３６５與ｙ射線照射聯(lián)合能夠明顯抑制肺癌細(xì)胞Ａ５４９生長
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R734.2;R730.55

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本文編號(hào)：2587992