【摘要】：1、檸檬黃ELISA檢測方法的建立和隨機(jī)人群暴露水平分析隨著物質(zhì)生活水平的不斷提高,食品安全問題引起了人們的高度重視。檸檬黃是一種使用廣泛的食用色素,可使食品色澤艷麗,提升食物的感觀品質(zhì)。因?yàn)闄幟庶S攝入后會(huì)大部分以原型的形式排出,所以在我國制定的食用色素標(biāo)準(zhǔn)限量范圍之內(nèi)使用檸檬黃是安全的。但是為了提升銷量,一些商家會(huì)出現(xiàn)非法超量使用檸檬黃的情況,造成檸檬黃在人體內(nèi)暴露增加,對(duì)人體造成不利影響。所以,我們需要對(duì)人體檸檬黃內(nèi)暴露情況進(jìn)行監(jiān)測。本文通過制備檸檬黃的單克隆抗體,建立了高靈敏度的ELISA方法,對(duì)576個(gè)人體尿液樣品進(jìn)行了批量檢測,收集檸檬黃在人體內(nèi)暴露情況的數(shù)據(jù)并對(duì)內(nèi)暴露情況進(jìn)行分析。研究目的：研究隨機(jī)人群樣本中檸檬黃的內(nèi)暴露水平。研究方法：采用弗式免疫佐劑免疫BALB/c小鼠,通過細(xì)胞融合技術(shù)篩選特異識(shí)別檸檬黃的單克隆抗體。建立并優(yōu)化靈敏度高的ELISA檢測方法,并對(duì)ELISA方法進(jìn)行方法學(xué)考察。利用建立的ELISA方法對(duì)576個(gè)人體尿液樣本進(jìn)行檢測。研究結(jié)果：經(jīng)細(xì)胞融合、篩選、純化后的檸檬黃單克隆抗體濃度為2.72mg/mL,該抗體與食用色素日落黃、誘惑紅、靛藍(lán)、胭脂紅、亮藍(lán)、莧菜紅均無交叉反應(yīng),特異性良好。所建立的ELISA方法LOD和IC50分別為0.31ng/mL和2.96ng/mL。板內(nèi)變異系數(shù)為3.69%至4.89%,板間的變異系數(shù)為1.17%至4.54%,兩者均小于20%,精密度良好�；厥章蕿�99.14%至108.40%,在80%至120%之間,準(zhǔn)確性良好。與傳統(tǒng)HPLC檢測方法比較,顯示相關(guān)性良好(R2=0.99,n=6),證明該ELISA方法檢測尿樣結(jié)果可靠。576個(gè)尿液樣本中檸檬黃的檢出率為100%,濃度為0.36ng/mL至38.31ng/mL,平均濃度為5.15ng/mL,幾何平均值(GM)為3.70ng/mL。男性尿液樣本中的檸檬黃含量平均值(5.36ng/mL)略高于女性(4.86ng/mL),但無顯著性差異。50歲以下年齡組尿樣中檢測到的檸檬黃的含量顯著高于50以上年齡組(P0.05)。其中,41-50歲年齡組尿液樣本中的檸檬黃含量顯著高于50-60歲年齡組(P0.05)。結(jié)論：建立的ELISA方法可用于人體尿液樣本的檢測,收集了檸檬黃在隨機(jī)人群樣本中的內(nèi)暴露數(shù)據(jù),得到檸檬黃在隨機(jī)人群中的暴露特點(diǎn)。2、已烯雌酚ELISA檢測方法的建立和隨機(jī)人群暴露水平分析在生活水平提高的同時(shí),肉制品及魚蝦類水產(chǎn)品的需求日益增多,促進(jìn)了養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展。為了提高牲畜及魚蝦等產(chǎn)品的產(chǎn)量,縮短生長周期,養(yǎng)殖人員或飼料生產(chǎn)廠家會(huì)向飼料中非法添加生長激素,如己烯雌酚,達(dá)到提高收益的目的,從而通過食物鏈造成水和土壤中己烯雌酚的污染及人體己烯雌酚內(nèi)暴露。作為一種雌激素,孕期婦女暴露于已烯雌酚中會(huì)增加后代的癌癥風(fēng)險(xiǎn),并會(huì)影響少年兒童的正常生長發(fā)育。所以我們通過制備已烯雌酚的單克隆抗體,建立了高靈敏度檢測已烯雌酚的ELISA方法,對(duì)已烯雌酚人體內(nèi)暴露情況進(jìn)行監(jiān)測。并通過576個(gè)樣品的批量檢測,收集已烯雌酚在人體內(nèi)暴露情況的數(shù)據(jù)并進(jìn)行內(nèi)暴露分析。研究目的：研究隨機(jī)人群樣本中已烯雌酚的內(nèi)暴露水平。研究方法：采用弗式免疫佐劑和快速免疫佐劑分別免疫BALB/c小鼠,通過細(xì)胞融合技術(shù)篩選特異識(shí)別已烯雌酚的單克隆抗體。建立并優(yōu)化靈敏度高的ELISA檢測方法,并對(duì)ELISA方法進(jìn)行方法學(xué)考察。利用建立的ELISA方法對(duì)576個(gè)人體尿液樣本進(jìn)行檢測。研究結(jié)果：經(jīng)細(xì)胞融合、篩選、純化后的已烯雌酚單克隆抗體濃度為8.32mg/mL該抗體與兩種雌激素雌酮和雌二醇以及兩種結(jié)構(gòu)類似物雙酚A及沙丁胺醇均無交叉反應(yīng),特異性良好。所建立的ELISA方法LOD和ICs0分別為0.29ng/mL和3.33ng/mL。板內(nèi)變異系數(shù)為8.79%至15.74%,板間的變異系數(shù)為3.25%至10.23%,兩者均小于20%,精密度良好�；厥章蕿�91.20%至118.07%,在80%至120%之間,準(zhǔn)確度良好。與傳統(tǒng)HPLC檢測方法比較,顯示相關(guān)性良好(R2=0.99,n=6),證明該ELISA方法檢測尿樣結(jié)果可靠。576個(gè)尿液樣本中已烯雌酚的檢出率為98.78%,濃度為LOD至42.85ng/mL,平均濃度為4.70ng/mL,幾何平均值(GM)為3.50ng/mL。男性中已烯雌酚的平均值為5.07ng/mL,高于女性(P0.05)。年齡41-50歲的人群平均值最高,為5.60ng/mL。超過50歲的人群有相對(duì)較低的已烯雌酚含量。結(jié)論：建立的ELISA方法可用于人體尿液樣本的檢測,收集了已烯雌酚在隨機(jī)人群樣本中的內(nèi)暴露數(shù)據(jù),得到已烯雌酚在隨機(jī)人群中的暴露特點(diǎn)。
【圖文】：

逡逑１０巧ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠通過弗式免疫佐劑背部多點(diǎn)注射免疫３次后，通過小鼠暇逡逑眶取血檢測了血清效價(jià)。由圖２．１可看出，在血清稀釋５００倍時(shí)，３、４、５、６號(hào)小逡逑鼠的ＯＤ值較高，但當(dāng)稀釋至４０００倍時(shí)，４號(hào)和６號(hào)小鼠ＯＤ值出現(xiàn)了明顯的降逡逑低。由圖２．２可看出，，５至１０號(hào)小鼠在ＯＤ值為１．０時(shí)的抑制率均可這到８０％Ｗ逡逑上。綜合考慮抗體效價(jià)與靈敏度，我們選擇５號(hào)小鼠進(jìn)行細(xì)胞融合。逡逑Ｍ１／５００逡逑１２３４５６７８９邐１０逡逑Ｔｈｅ邋ｎｕｍｂｅｒ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ逡逑圖２．１邋１０只梓模黃免疫小鼠血清稀釋５００倍和４０００倍時(shí)的ＯＤ值逡逑Ｆｉｇ邋２．１邋ＯＤ邋ｖａｌｕｅ邋ｏｆ邋ｔｅｎ邋ｉｍｍｕｚｅｄ邋ｍｉｃｅ邋０打邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｓｅｒｕｍ邋ｄｉｌｕｔｉｏｎ逡逑１８逡逑
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R446.12

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本文編號(hào)：2563784