【摘要】：建立了基于免疫磁分離的熒光微球免疫層析法,檢測豬霍亂沙門氏菌。待檢樣品經(jīng)免疫磁分離富集和熱洗脫處理后,用熒光微球免疫層析試紙條進(jìn)行檢測。每毫克納米磁珠標(biāo)記30μg抗體制備的免疫磁珠,對濃度為10~2~10~6CFU/mL的豬霍亂沙門氏菌的捕獲率均大于90%,特異性好;在pH=6時,以300μg/mg豬霍亂沙門氏菌單抗11D8-D4標(biāo)記熒光微球,制備免疫熒光微球;以2.0 mg/mL豬霍亂沙門氏菌單抗5F11-B11噴涂檢測線(T線),以1.0 mg/mL驢抗鼠IgG噴涂質(zhì)控線(C線),制備免疫層析試紙條。采用建立的基于免疫磁分離的熒光微球免疫層析方法檢測豬霍亂沙門氏菌,在PBS緩沖液中檢出限為1.5×10~5CFU/mL,牛奶中檢出限為7.6×10~5CFU/mL,與直接采用熒光微球免疫層析方法檢測相比,檢出限分別降低了10倍和200倍。本方法可有效富集牛奶中的沙門氏菌,避免了基質(zhì)干擾,靈敏度大大提高,具有較好的應(yīng)用前景。
【圖文】：

10010Amountoflabelingantibody（mg/mg）CE（%）80604020020304050A100Amountofimmunomagneticbeads（mg/mL）CE（%）80604020052050100200B100ConcentrationofS.choleraesuis（CFU/mL）CE（%）806040200C2.1×1062.1×1052.1×1042.1×1032.1×102圖1(A)不同抗體標(biāo)記量時的捕獲率;(B)不同IMBs用量時的捕獲率;(C)對不同濃度豬霍亂沙門氏菌的捕獲率Fig．1Captureefficiency(CE)ofimmunomagneticbeads(IMBs)underdifferentconditions:(A)CEwithdifferentamountoflabelingantibody，(B)CEwithdifferentamountofIMBs，and(C)CEwithdifferentcon-centrationsofS．choleraesuis3．4IFMs標(biāo)記條件的優(yōu)化3．4．1IFMs標(biāo)記pH值的優(yōu)化pH值對熒光微球的標(biāo)記影響很大，會影響抗體表面可供偶聯(lián)的活性基團(tuán)的數(shù)量和其暴露程度，從而影響偶聯(lián)率，也可能影響抗體和熒光微球的結(jié)合方式，從而影響IFMs的活性［25］。如表1所示，當(dāng)pH=6時，偶聯(lián)率最高。檢測1．52×107CFU/mL的目標(biāo)菌時，T線的信號值最大。檢測1．9×106CFU/mL目標(biāo)菌時，只有pH=6的條件對應(yīng)試紙條T線出現(xiàn)信號。因此，最佳標(biāo)記條件選擇pH6。表1免疫熒光微球標(biāo)記pH值的優(yōu)化*Table1OptimizationofpHforpreparationofimmunofluorescentmicrospheres(IFMs)(n=3)*pH抗體偶聯(lián)率Conjugatingrate(CＲ，%)熒光微球上偶聯(lián)的抗體AmountofantibodyconjugatedtoIFMs(μg)T線熒光信號值FluorescencesignalofTline(a．u．)1．52×107CFU/mL1．90×106CFU/mL565．5196．5104．7±12．2－677．7233．1295．9±21．864．1±2．2772．3216．9138．9±4．8－870．6211．8113

7.60×1040FM鄄LFA0.01.52×1057.60×1051.52×1063.80×1067.60×1061.52×1067.60×1040.01.52×1057.60×1051.52×1063.80×1067.60×1061.52×1071.52×1083.14×108CFluorescent%signalof%T%line%（a.u.）圖2FM-LFA和基于IMS的FM-LFA檢測靈敏度的比較。(A)檢測PBS基質(zhì)中的豬霍亂沙門氏菌;(B)檢測牛奶中的豬霍亂沙門氏菌;(C)基于IMS的FM-LFA檢測牛奶中的豬霍亂沙門氏菌Fig．2Comparisonofsensitivitybetweenfluorescentmicrosphere(FM)-lateralflowassay(LFA)andFM-LFAbasedonimmunomagneticseparation(IMS):(A)detectionofS．choleraesuisinPBSbyFM-LFAandFM-LFAbasedonIMS;(B)detectionofS．choleraesuisinmilkbyFM-LFAandFM-LFAbasedonIMS;(C)stripsimageofFM-LFAbasedonIMSfordetectionofS．choleraesuisinmilkＲeferences1MaurischatS，BaumannB，MartinA，MalornyB．Int．J．FoodMicrobiol．，2015，193:8－142IwabuchiE，MaruyamaN，HaraA，NishimuraM，MuramatsuM，OchiaiT，HiraiK．J．FoodProtect．，2010，73(11):1993－20003MüllerL，Kjels錙C，F(xiàn)rankC，JensenT，TorpdahlM，S錙borgB，DorleansF，，ＲabschW，PragerＲ，GossnerC．M，Ethel-bergS．Epidemiol．Infect．，2016，144(13):2802－28114WangJY，ChenMH，ShengZC，LiuDF，WuSS，LaiWH．ＲSCAdv．，2015，5(76):62300－623055ZhangZ，XiaoL，LouY，JinM，LiaoC
【作者單位】： 南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;江西省林業(yè)科學(xué)院;江西省疾病預(yù)防控制中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.31271863) 江西省教育廳落地項(xiàng)目(No.KJLD13009) 江西省生豬產(chǎn)業(yè)質(zhì)量安全崗位專家項(xiàng)目(No.JXARS-03)資助~~
【分類號】：R446.6

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本文編號：2539297