本文關(guān)鍵詞：新型硫化氫供體和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶熒光探針的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：硫化氫(H2S)是生物體內(nèi)重要的氣體信號分子,參與多種病理生理過程。維持生物體內(nèi)硫化氫濃度平衡至關(guān)重要,硫化氫供體是提供外源性硫化氫的重要工具。γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)是生物體內(nèi)重要的水解酶,催化谷氨�；鶑墓入赘孰幕蛘吆泄劝滨；衔镛D(zhuǎn)移到受體分子,其異常表達與腫瘤、糖尿病等疾病狀態(tài)有關(guān)。對GGT進行選擇性、高靈敏、實時、可視化檢測,對于疾病診斷和病理生理研究具有重要意義。本論文主要開展了以下工作：1.以鄰硝基芐硫醇,4-羥甲基-7-甲氧基香豆素和乙酰丙酸為原料設計合成了一種新型光活化硫化氫供體,并通過1H NMR,13C NMR和MS對其結(jié)構(gòu)進行了表征。該硫化氫供體自身熒光微弱,在經(jīng)過365 nm強光照射后,快速釋放出硫化氫,同時釋放熒光物質(zhì)(7-甲氧基香豆素)乙酰丙酸甲酯。采用亞甲基藍法對光照釋放的硫化氫進行檢測,并用色譜法對光裂解所釋放的(7-甲氧基香豆素)乙酰丙酸甲酯進行了分析檢測。在365nm光照3-9 min時間檢范圍內(nèi),該硫化氫供體的熒光強度與釋放的硫化氫量呈動態(tài)學相關(guān)性。通過監(jiān)測熒光強度的變化,可間接監(jiān)測硫化氫的釋放過程。2.以4-氯-7-硝基苯并呋咱和谷胱甘肽為原料設計合成了一種新的GGT熒光探針,并用MS對其結(jié)構(gòu)進行了表征。此探針在475nm激發(fā)光激發(fā)下,發(fā)出微弱熒光；經(jīng)GGT作用后,相同的激發(fā)波長下,探針溶液發(fā)出明亮的綠色熒光,最大發(fā)射波長為538nm。通過紫外光譜實驗,結(jié)合相關(guān)文獻工作,推測探針對酶的響應機理為酶切谷氨酰胺鍵之后自發(fā)進行S,N-交換。該探針在生理pH條件下具有高穩(wěn)定性、高選擇性,其熒光響應信號與GGT的濃度呈線性相關(guān),線性響應范圍為為1-40 U/L,檢測限為0.13 U/L。激光共聚焦成像實驗表明,該探針可用于活細胞中GGT的可視化檢測。
【關(guān)鍵詞】：硫化氫供體 光敏感 香豆素 熒光探針 谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶
【學位授予單位】：湖南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：O657.3;R446.1
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 第1章 緒論10-24
• 1.1 硫化氫供體研究進展10-15
• 1.1.1 硫化氫供體類型10-14
• 1.1.2 硫化氫供體的藥理作用14-15
• 1.2 酶熒光探針研究進展15-22
• 1.2.1 熒光探針概述15-18
• 1.2.2 基于還原反應的酶熒光探針18-20
• 1.2.3 基于氧化反應的酶熒光探針20
• 1.2.4 基于水解反應的酶熒光探針20-22
• 1.3 課題的提出與研究內(nèi)容22-24
• 第2章 自報告型光活化硫化氫供體的合成及性能研究24-39
• 2.1 前言24-25
• 2.2 實驗部分25-31
• 2.2.1 儀器與試劑25
• 2.2.2 自報告型光活化硫化氫供體的合成25-30
• 2.2.3 自報告型光活化硫化氫供體的性能研究30-31
• 2.3 結(jié)果與討論31-37
• 2.3.1 光照對供體Cou-D-H_2S特征光譜的影響31-32
• 2.3.2 光照時間對供體Cou-D-H_2S熒光強度變化的影響32-33
• 2.3.3 亞甲基藍法檢測硫化氫的標準曲線33
• 2.3.4 光照時間對供體Cou-D-H_2S釋放硫化氫的影響33-35
• 2.3.5 光照下供體Cou-D-H_2S的硫化氫釋放量和熒光強度的關(guān)系35-36
• 2.3.6 供體Cou-D-H_2S的光活化機理驗證36-37
• 2.4 小結(jié)37-39
• 第3章 新型γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶熒光探針的合成及性能研究39-49
• 3.1 前言39
• 3.2 實驗部分39-42
• 3.2.1 儀器與試劑39-40
• 3.2.2 γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶熒光探針的合成40
• 3.2.3 γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶熒光探針的光譜性能測試40-42
• 3.3 結(jié)果與討論42-48
• 3.3.1 探針NBD-GSH對γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶響應的特征熒光光譜42-43
• 3.3.2 探針NBD-GSH對γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的響應動力學43-44
• 3.3.3 探針NBD-GSH對γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的活性依賴性44-45
• 3.3.4 探針NBD-GSH對γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的響應特異性45-46
• 3.3.5 PH對探針N-BD-GSH穩(wěn)定性的影響46
• 3.3.6 探針NBD-GSH對γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶響應機理驗證46-47
• 3.3.7 探針NBD-GSH在活細胞中對γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的檢測47-48
• 3.4 小結(jié)48-49
• 總結(jié)49-50
• 參考文獻50-63
• 附錄A 攻讀學位期間所發(fā)表的論文目錄63-64
• 附錄B 部分化合物譜圖64-71
• 致謝71

  本文關(guān)鍵詞：新型硫化氫供體和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶熒光探針的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：253781