本文關(guān)鍵詞：高脂肥胖對腸道微生態(tài)、短鏈脂肪酸的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:腸道作為機體最大的消化器官,其中定居著大量的微生物群落,參與對物質(zhì)的消化與吸收,并且其發(fā)酵的代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)在維持腸道健康和正常功能的行駛方面起著至關(guān)重要的作用。腸上皮細胞(intestinal epithelial cells,IECs)為腸道的第一道保護屏障,與腸道內(nèi)環(huán)境直接接觸。本實驗研究了在肥胖情況下腸道中微生物群落及其代謝產(chǎn)物SCFAs的變化情況,并探討這種變化因素對腸上皮細胞的影響。方法:(1)為研究肥胖情況下,腸道中微生物群落的變化情況,將適齡C57BL/6小鼠分為肥胖組(HFD)與正常組(LFD,6周后,分別取其腸道內(nèi)容物。通過Miseq高通量測序技術(shù)分別對腸道中微生物群落進行檢測和鑒定,確定腸道微生態(tài)的變化。(2)為建立快速檢測糞便中SCFAs的方法,并確定此種檢測結(jié)果的穩(wěn)定性。分別取不同種屬來源的糞便,氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(Gas chromatography mass spectrometry,GC-MS)方法分別檢測糞便中SCFAs,探究在生理狀態(tài)下,糞便中SCFAs的存在形式,并確定GC-MS方法的可行性和穩(wěn)定性。(3)取上述肥胖小鼠及正常對照小鼠結(jié)腸內(nèi)容物,通過GC-MS的方法測定其中SCFAs的含量,探究在肥胖情況下,糞便中SCFAs的變化趨勢。(4)為研究在腸道疾病如腸炎情況下,糞便中SCFAs的存在方式,將適齡C57BL/6小鼠分為腸炎組(DSS)和正常組(NC),7天后,分別取其腸道內(nèi)容物,GC-MS測定糞便中SCFAs含量,確定在腸炎狀態(tài)下,糞便中SCFAs的變化情況。(5)體外試驗中,為研究丁酸對腸上皮細胞的影響,將腸上皮細胞SW48細分為6中處理組,分別為正常組(NC)、LPS處理組(LPS)、丁酸處組(BU)、丁酸-LPS共同處理組(BU+LPS)、TSA處理組(TSA)、TSA-LPS共同處理組(TSA+LPS),觀察丁酸、TSA對細胞生長狀態(tài)的影響,通過CCK-8探究細胞的增殖能力,并通過流式、western blot及定量測定其細胞表面TLR4的表達情況,再以不同濃度丁酸和TSA處理細胞,確定不同濃度下的丁酸及TSA對細胞表面TLR4表達的影響。為確定丁酸對TLR4下游信號通路的影響,western blot檢測上述6種處理組中下游信號通路中各種信號分子的表達情況。結(jié)果:(1)通過Miseq測序技術(shù)檢測細菌16s r RNA結(jié)果發(fā)現(xiàn),與正常對照組相比較,肥胖小鼠腸道中微生物豐富度及多樣性下降并且S24-7及擬桿狀菌屬數(shù)量明顯減少,但脫硫弧菌屬增多。(2)GC-MS檢測正常C57BL/6小鼠結(jié)腸內(nèi)容物及新鮮糞便、SD大鼠糞便及健康成人糞便中SCFAs結(jié)果發(fā)現(xiàn),在正常情況下,糞便中SCFAs以乙酸、丙酸、丁酸及戊酸為主,就其含量而言,乙酸含量最多,丁酸、丙酸次之,戊酸含量相對較低,并且在不同的哺乳動物糞便中,各種SCFAs有相似的存在形式。(3)通過GC-MS對肥胖小鼠糞便中SCFAs檢測發(fā)現(xiàn),在肥胖情況下,各種SCFAs都有不同程度的下降,其中丁酸下降較為明顯。(4)肥胖為誘發(fā)腸炎的一個影響因素,通過GC-MS測定腸炎小鼠糞便中SCF As的變化情況,結(jié)果表明,在腸炎情況下,糞便中SCFAs的變化與在肥胖情況下的變化趨勢相似,除乙酸外的丙酸、丁酸及戊酸含量都發(fā)生了明顯的下降,其中以丁酸含量下降尤為明顯。(5)體外實驗中,以丁酸及TSA處理腸上皮細胞發(fā)現(xiàn),丁酸及TSA處理后的細胞生長狀態(tài)較差并且對細胞增殖起抑制作用,這種抑制作用具有濃度依賴效應。流式、western blot及定量檢測細胞表面TLR4發(fā)現(xiàn),丁酸及TSA處理后會上調(diào)細胞表面TLR4的表達,而降低處理濃度后這種上調(diào)作用依然存在。結(jié)論:(1)通過Miseq高通量測序技術(shù)對腸道內(nèi)微生物群落的檢測及鑒定發(fā)現(xiàn),當肥胖發(fā)生時,腸道內(nèi)微生態(tài),與正常情況比較,發(fā)生了明顯的變化。(2)GC-MS可快速檢測糞便中的SCFAs,并有可能應用于臨床等腸道疾病的輔助診斷。(3)在肥胖及腸炎等疾病狀態(tài)下,糞便中各種SCFAs含量都發(fā)生了明顯的下降。(4)丁酸可上調(diào)細胞表面TLR4的表達,并調(diào)節(jié)細胞下游信號的轉(zhuǎn)導。
【關(guān)鍵詞】：短鏈脂肪酸(short-chain fatty acids SCFAs) 糞便 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(Gas chromatography mass spectrometry GC-MS) Miseq高通量測序 腸道微生態(tài) 腸上皮細胞(intestinal epithelial cells IECs)
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R589.2;R446.1
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-14
• 第一章 緒論14-24
• 1.1 腸道微生態(tài)與疾病14-16
• 1.1.1 腸道微生物群落多樣性分析14-15
• 1.1.2 腸道微生態(tài)與疾病15
• 1.1.3 腸道微生態(tài)與肥胖15-16
• 1.2 短鏈脂肪酸及其作用機制16-19
• 1.2.1 SCFAs的吸收與代謝16-17
• 1.2.2 SCFAs與腸道疾病17
• 1.2.3 SCFAs的作用機制17-19
• 1.3 腸上皮細胞與腸道疾病19
• 1.4 氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用原理及應用19-21
• 1.4.1 氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用原理19-20
• 1.4.2 GC-MS方法的應用20-21
• 1.5 本實驗研究目的、實驗設(shè)計、實驗方法及研究意義21-24
• 1.5.1 研究目的21
• 1.5.2 實驗設(shè)計21-22
• 1.5.3 實驗方法22-23
• 1.5.4 研究意義23-24
• 第二章 腸道中微生物群落多樣性分析24-32
• 2.1 實驗動物24
• 2.2 實驗材料24
• 2.3 肥胖小鼠模型的建立24
• 2.4 檢測方法24-25
• 2.4.1 Miseq測序流程25
• 2.4.2 測序數(shù)據(jù)分析25
• 2.5 結(jié)果25-31
• 2.5.1 肥胖小鼠及正常對照小鼠糞便中微生物序列OTU聚類分析25-26
• 2.5.2 肥胖小鼠及正常對照小鼠糞便中微生物豐度及多樣性分析26-29
• 2.5.3 肥胖小鼠及正常對照小鼠腸道中微生物群落結(jié)構(gòu)組分分析29-31
• 2.6 討論31-32
• 第三章 建立氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測糞便中短鏈脂肪酸的方法32-43
• 3.1 實驗動物32
• 3.2 肥胖小鼠模型的建立32
• 3.3 腸炎小鼠模型的建立32-33
• 3.4 實驗材料33-34
• 3.4.1 主要實驗試劑及材料33-34
• 3.4.2 實驗儀器34
• 3.5 實驗方法34-36
• 3.5.1 糞便及腸內(nèi)容物的采集34
• 3.5.2 糞便樣本的處理34-35
• 3.5.3 儀器的測定35
• 3.5.4 小鼠腸組織熒光定量PCR35-36
• 3.6 結(jié)果36-41
• 3.6.1 GC-MS測定正常生理狀態(tài)下糞便中的SCFAs36-38
• 3.6.2 GC-MS測定肥胖及疾病情況下腸道糞便中SCFAs38-41
• 3.7 討論41-43
• 第四章 丁酸對腸上皮細胞表面TLR4表達的影響43-57
• 4.1 研究對象43
• 4.2 實驗材料43-45
• 4.2.1 實驗試劑43-44
• 4.2.2 實驗儀器44-45
• 4.3 實驗方法45-48
• 4.3.1 CCK-8 測定細胞增殖實驗45
• 4.3.2 熒光定量PCR45-46
• 4.3.3 流式細胞術(shù)-第一通道（細胞表面標記）46
• 4.3.4 聚丙烯酰胺凝膠電泳SDS-PAGE（Western Blot）46-48
• 4.4 結(jié)果48-55
• 4.4.1 丁酸對腸上皮細胞生物學行為的影響48-50
• 4.4.2 丁酸上調(diào)細胞表面TLR4受體的表達50-55
• 4.5 討論55-57
• 第五章 主要結(jié)論和展望57-58
• 5.1 主要結(jié)論57
• 5.2 展望57-58
• 參考文獻58-65
• 第六章 文獻綜述 短鏈脂肪酸生理作用作用的研究65-71
• 參考文獻69-71
• 致謝71-72
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的文章72

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 秦環(huán)龍;梁勇;;腸道微生態(tài)變化及臨床應用[J];中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2011年12期

2 王經(jīng)邦;洪黎民;;仔鰻腸道微生態(tài)的重建與嗜食性研究[J];中國微生態(tài)學雜志;1991年01期

3 ;首屆廣東省腸道微生態(tài)學研討會紀要[J];中國微生態(tài)學雜志;1997年02期

4 魏開敏;;腸道微生態(tài),保護人健康[J];祝您健康;2012年11期

5 楊東山,肖鈞剛,高翔;嬰幼兒腸道微生態(tài)平衡失調(diào)115例臨床分析[J];武警醫(yī)學;2000年10期

6 江月斐,勞紹賢;胃腸道微生態(tài)與中醫(yī)藥研究概況[J];中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志;2003年03期

7 金紅芝,李X寶;人腸道微生態(tài)系統(tǒng)的研究進展[J];自然雜志;2004年02期

8 毛萌;兒童腸道微生態(tài)系統(tǒng)的特點與疾病[J];臨床兒科雜志;2005年10期

9 孫建琴;;腸道微生態(tài)與健康[J];營養(yǎng)健康新觀察;2009年02期

10 江美玲;許岸高;;腸道微生態(tài)和老齡化[J];醫(yī)學綜述;2012年17期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 雷虹;付斌;平文祥;;Lb.paracasei HD1.7對小鼠腸道微生態(tài)體系的影響[A];2008年中國微生物學會學術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

2 袁杰力;;腸道微生態(tài)研究的概況和進展[A];2012中國消化系疾病學術(shù)大會論文匯編[C];2012年

3 馮穎;;腸道微生態(tài)的維持與改善[A];營養(yǎng)健康新觀察（第三十九期）：腸道微生態(tài)與健康[C];2007年

4 吳愛成;;99例胃腸道感染患者腸道微生態(tài)的分析[A];第三屆全國臨床檢驗實驗室管理學術(shù)會議論文匯編[C];2005年

5 劉長寶;崔乃強;;活血清胰湯對腸道微生態(tài)作用的實驗研究[A];第七屆全國中西醫(yī)結(jié)合普通外科臨床及基礎(chǔ)研究學術(shù)會議論文匯編[C];2001年

6 李丹;任愛民;王紅;;抗生素相關(guān)性腸炎的研究進展[A];第二屆全國藥物性損害與安全用藥學術(shù)會議——抗感染藥物不良反應與臨床安全應用專題研討會論文匯編[C];2010年

7 張萬岱;姚永莉;;胃腸道微生態(tài)及相關(guān)性病征的診治進展[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學會第十五次全國消化系統(tǒng)疾病學術(shù)研討會論文匯編[C];2003年

8 陳燁;;腸道微生態(tài)與腸粘膜屏障[A];2012中國消化系疾病學術(shù)大會論文匯編[C];2012年

9 陳德昌;;廣譜抗生素對腸道微生態(tài)環(huán)境的影響[A];中國病理生理學會危重病醫(yī)學專業(yè)委員會第八屆全國大會暨中華呼吸病學會呼吸生理和重癥監(jiān)護學組年會論文集[C];2008年

10 萬獻堯;張久之;;重視重癥患者腸道微生態(tài)的改變[A];重癥醫(yī)學——2011[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 何艷娟;平衡腸道微生態(tài)讓你的美“由內(nèi)而外”[N];中國食品報;2013年

2 復旦大學附屬華東醫(yī)院營養(yǎng)科 馮穎;人類對于腸道微生態(tài)的認識步入新境界(上)[N];中國食品報;2010年

3 張旭;腸道微生態(tài)平衡——健康的基礎(chǔ)[N];中國醫(yī)藥報;2005年

4 何艷娟;平衡腸道微生態(tài) 警惕抗生素濫用[N];中國食品報;2013年

5 王其玲邋馬偉杭 胡玲;保護體內(nèi)的“植被”[N];健康報;2007年

6 香紅星;走進微生物世界讓這個“小精靈”為你增效[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2006年

7 復旦大學附屬華東醫(yī)院營養(yǎng)科 馮穎;人類對于腸道微生態(tài)的認識步入新境界(下)[N];中國食品報;2010年

8 記者 李禾;如何防止微生態(tài)營養(yǎng)失衡？[N];科技日報;2007年

9 周勝華;大學新生謹防“水土不服”[N];中國中醫(yī)藥報;2002年

10 山東龍力生物科技有限公司;雙歧桿菌在腸道微生態(tài)中的地位[N];中國食品報;2009年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 歸崎峰;腸道微生態(tài)在肺癌中的作用及機制研究[D];浙江大學;2015年

2 李冠楠;氟脅迫對不同抗性家蠶腸道微生態(tài)環(huán)境的影響[D];西南大學;2015年

3 侯天舒;電針對潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠腸道微生態(tài)及宿主代謝的影響研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2012年

4 彭鑫;《傷寒論》陽明、太陰病證與腸道微生態(tài)及人體反應性關(guān)系研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2008年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 冉曦;腹盆腔放療模擬照射小鼠腸道微生態(tài)的變化與腸炎發(fā)生的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

2 吳水蕓;高脂肥胖對腸道微生態(tài)、短鏈脂肪酸的影響[D];江蘇大學;2016年

3 姚玉川;慢性消化疾病患者腸黏膜屏障功能障礙的測定及其與腸道微生態(tài)失衡的關(guān)系[D];第一軍醫(yī)大學;2004年

4 付斌;Lb.paracasei HD1.7對小鼠腸道微生態(tài)體系的影響[D];黑龍江大學;2008年

5 郭樂;蘋果酵素對小鼠腸道微生態(tài)的恢復重建作用[D];大理學院;2015年

6 向蕓慶;不同飼料飼養(yǎng)家蠶其腸道微生態(tài)優(yōu)勢菌群的類型組成及差異性研究[D];西南大學;2010年

7 何一偉;艾滋病患者腸道微生態(tài)初步研究[D];廣州醫(yī)科大學;2014年

8 韓曉霞;電針對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸道微生態(tài)的保護作用研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2012年

9 梁錦俊;虛實推拿治療小兒急性非細菌感染性腹瀉的臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2010年

10 楊文翠;谷氨酰胺對急進高原缺氧大鼠腸道微生態(tài)影響的實驗研究[D];蘭州大學;2010年

  本文關(guān)鍵詞：高脂肥胖對腸道微生態(tài)、短鏈脂肪酸的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：253773