【摘要】：第一部分USPIO-cy5.5-c RGD的制備、表征目的:制備整合素αvβ3靶向的磁共振(Magnetic Resonance Imaging,MRI)/近紅外熒光成像(near infrared fluorescence imaging,NIRF)雙模態(tài)分子探針,并初步研究其粒徑、穩(wěn)定性、熒光偶聯(lián)情況及MRI表現(xiàn)特征。方法:用高溫?zé)峤夥ê铣蒄e3O4納米顆粒(超小超順磁性氧化鐵,USPIO),將聚乙二醇(PEG)和近紅外熒光染料cy5.5包覆在其表面,偶聯(lián)整合素αvβ3靶向配體環(huán)狀RGD(c RGD),得到USPIO-cy5.5-c RGD分子,利用透射電子顯微鏡(TEM)測其電鏡尺寸,激光粒度儀測其水動力尺寸、zeta電位,紫外分光光度法檢測cy5.5是否偶聯(lián)成功,運(yùn)用MRI、熒光成像檢測其成像性能。結(jié)果:USPIO-cy5.5-c RGD溶液靜置3個月無渾濁、沉淀現(xiàn)象;測得Fe3O4納米顆粒直徑為10.08±0.34nm;USPIO-cy5.5-c RGD的水動力尺寸為46.66±16.31nm,zeta電位為㧟53.87±1.99m V;紫外分光光度法顯示偶聯(lián)cy5.5之后,在USPIO的基礎(chǔ)上增加了一個波峰,該波峰位于690nm處,與cy5.5吸收峰相符,表明cy5.5偶聯(lián)成功;MRI檢查表明USPIO-cy5.5-c RGD可顯著降低T2信號,縮短T2弛豫時間,隨分子探針濃度升高,T2信號下降越明顯,經(jīng)線性擬合得到其弛豫率r2為251.55。結(jié)論:雙模態(tài)分子探針USPIO-cy5.5-c RGD制備成功,在水溶液中有良好的分散性、穩(wěn)定性,可行NIFR成像、顯著降低MRI T2信號。第二部分USPIO-cy5.5-c RGD的體外初步實(shí)驗(yàn)?zāi)康?檢測USPIO-cy5.5 c RGD在體外對HUVEC細(xì)胞生長及遷移能力的影響,研究其與HUVEC細(xì)胞結(jié)合后行體外MR、熒光成像的表現(xiàn),為進(jìn)一步的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供基礎(chǔ)。方法:人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)種于96孔板內(nèi),將前期制備的USPIO-cy5.5-c RGD配成Fe濃度分別為0、10、20、40、80、160μg/ml的溶液,與HUVEC細(xì)胞分別孵育24、48、72小時后,用CCK-8法檢測分子探針USPIO-cy5.5-c RGD對細(xì)胞生長、增殖影響;HUVEC細(xì)胞種于transwell小室,下室培養(yǎng)液加入USPIO-cy5.5 c RGD,Fe濃度分別為0、20、40μg/ml,共孵育24小時后觀察藥物對細(xì)胞遷移能力的影響;HUVEC細(xì)胞與Fe濃度分別為0、5、25、50、100μg/ml的USPIO-cy5.5 c RGD及100μg/ml的USPIO共孵育2小時后行體外MRI、熒光成像顯像,檢測其體外成像表現(xiàn)及結(jié)合效能。結(jié)果:CCK-8結(jié)果顯示在USPIO-cy5.5-c RGD溶液Fe濃度低于80μg/ml時,細(xì)胞與探針共孵育24小時細(xì)胞存活率均高于90%;當(dāng)探針Fe濃度達(dá)到160μg/ml,細(xì)胞存活率為44.2%;共孵育48小時探針Fe濃度為10、20、40μg/ml以及共孵育72小時探針Fe濃度為10、20μg/ml時,細(xì)胞存活率在50%~75%;共孵育48小時探針Fe濃度為80、160μg/ml以及共孵育72小時探針Fe濃度為40、80μg/ml時,細(xì)胞存活率在1%~24%;共孵育72小時探針Fe濃度為160μg/ml時,細(xì)胞存活率1%。Transwell結(jié)果顯示,未添加USPIO-cy5.5 c RGD組穿入下室的細(xì)胞為90±5.27個/視野,20μg/ml組為75±3.33個/視野,40μg/ml組為63±4.15個/視野。體外MRI結(jié)果顯示,USPIO-cy5.5 c RGD的Fe濃度低于100μg/ml時,與之共孵育后的細(xì)胞懸液在T2WI圖像上信號隨共孵育探針濃度升高而降低,相同濃度下與USPIO-cy5.5 c RGD共孵育組比USPIO信號下降更多;熒光成像結(jié)果顯示,與USPIO-cy5.5 c RGD共孵育后的細(xì)胞懸液熒光強(qiáng)度隨共孵育探針濃度升高而升高。結(jié)論:USPIO-cy5.5 c RGD在體外與細(xì)胞共孵育24小時、Fe濃度低于40μg/ml時,對細(xì)胞生長無抑制,探針濃度再升高可出現(xiàn)抑制作用,抑制率隨共孵育時間延長、探針濃度升高而增加;USPIO-cy5.5 c RGD在體外可抑制HUVEC細(xì)胞遷移能力,且抑制程度隨藥物濃度增加而增高;USPIO-cy5.5-c RGD在與細(xì)胞孵育后行MRI、熒光成像效果良好,探針Fe濃度低于100μg/ml時,探針與細(xì)胞的結(jié)合率隨探針濃度升高而升高;相同濃度下,USPIO-cy5.5 c RGD與細(xì)胞結(jié)合的能力比USPIO強(qiáng)。
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【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R445.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2390471