發(fā)布時(shí)間：2018-11-03 21:33

【摘要】：目的建立針對(duì)貝氏柯克斯體的快速可視化環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)方法。方法體外合成貝氏柯克斯體的IS1111a基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒。利用在線引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)3組LAMP引物,用實(shí)時(shí)濁度儀篩選出最佳引物,同時(shí)對(duì)羥基萘酚藍(lán)濃度進(jìn)行優(yōu)化,建立可視化LAMP反應(yīng)體系,并評(píng)價(jià)其敏感性和特異性。結(jié)果建立的可視化LAMP反應(yīng)可準(zhǔn)確檢測(cè)出貝氏柯克斯體的重組質(zhì)粒和新橋株,不與其他立克次體產(chǎn)生交叉反應(yīng),最低可檢測(cè)到3.6×10~2拷貝/反應(yīng),較普通聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法的靈敏度提高了一個(gè)數(shù)量級(jí),等同于實(shí)時(shí)濁度法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的檢測(cè)靈敏度。結(jié)論建立的可視化LAMP方法可敏感、特異地檢測(cè)出貝氏柯克斯體感染,操作簡(jiǎn)單快捷,適用于基層衛(wèi)生防疫和疫情現(xiàn)場(chǎng)的病原篩查。
[Abstract]:Objective to establish a rapid visualized loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method for Coxella bassii. Methods the IS1111a gene of Coxella bassii was synthesized in vitro and the recombinant plasmid was constructed. Three sets of LAMP primers were designed with online primer design software. The best primers were screened by real-time turbidimetry. The concentration of hydroxynaphthol blue was optimized to establish a visual LAMP reaction system, and its sensitivity and specificity were evaluated. Results the established visual LAMP reaction could accurately detect the recombinant plasmid and the new bridge strain of Coxella bassii without cross reaction with other Rickettsiae strains, and the minimum was 3.6 脳 10 ~ 2 copies / reaction. The sensitivity of PCR (PCR) method is increased by one order of magnitude, which is equivalent to that of real-time turbidimetric method and real-time fluorescence quantitative PCR method. Conclusion the established visual LAMP method is sensitive and can be used to detect Coxella basicus infection in different places. It is simple and quick to operate and suitable for pathogen screening in primary health epidemic prevention and epidemic field.
【作者單位】： 南京軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所疾病預(yù)防控制所;
【基金】：國(guó)家重大傳染病防治專項(xiàng)(2013ZX10004103;2013ZX10004218) 江蘇省科技支撐計(jì)劃(社會(huì)發(fā)展)項(xiàng)目(BE2013603) 軍隊(duì)重點(diǎn)項(xiàng)目(BWS14J025)
【分類號(hào)】：R440;R535

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本文編號(hào)：2309102