本文選題：神經(jīng)病理痛 + PJ34　； 參考：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究目的以往的研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)損傷和炎癥誘導(dǎo)的DRG和脊髓背角DNA甲基化和組蛋白乙酰化,即所謂的表觀遺傳學(xué),通過調(diào)控相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄,在病理性痛的發(fā)生和發(fā)展過程發(fā)揮重要作用。聚ADP-核糖聚合酶(poly(ADP-ribose)polymerase,PARP)是廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)的一組酶蛋白,其通過對相關(guān)核蛋白聚ADP-核糖基化的修飾參與基因轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。但迄今PARP在神經(jīng)病理性痛中的作用及表達(dá)變化仍不清楚。本研究首先通過鞘內(nèi)注射PARP抑制劑以觀察PARP激活在大鼠腰5脊神經(jīng)結(jié)扎(Lumbar 5 spinal nerve ligation,L5 SNL)引起的神經(jīng)病理性痛中的作用,而后利用Western Blot法進(jìn)一步觀察大鼠L5 SNL后不同時(shí)間脊髓背角PARP-1的表達(dá)變化。研究方法本實(shí)驗(yàn)采用由鄭州大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的體重在200-300g之間的雄性Sprague-Dawley大鼠。通過腰五脊神經(jīng)結(jié)扎(L5 SNL)制備神經(jīng)病理性痛模型,假手術(shù)組僅暴露腰5脊神經(jīng)后關(guān)閉切口。采用預(yù)先鞘內(nèi)置管微量注射PARP抑制劑PJ34,對照組注射等體積的溶劑。通過測定大鼠機(jī)械刺激撤足閾值(Paw withdrawal threshold,PWT)和熱刺激撤足潛伏期(Paw withdrawal latency,PWL)評價(jià)PJ34對大鼠痛行為的影響。大鼠痛行為學(xué)測試實(shí)驗(yàn)分6組:(1)sham組;(2)L5 SNL+saline組;(3)L5 SNL+PJ34 1μg組;(4)L5 SNL+PJ34 5μg;(5)L5 SNL+PJ34 10μg;(6)sham+PJ34 10μg。鞘內(nèi)注射PJ34或saline于鞘內(nèi)置管后,SNL之前開始,每天1次,共7天。為了觀察PJ34對已經(jīng)建立起的神經(jīng)病理性痛的影響,鞘內(nèi)注射藥物于L5 SNL后第7天開始,每天1次,共3天,實(shí)驗(yàn)設(shè)兩組:(1)L5 SNL+saline組;(2)L5 SNL+PJ34 10μg組。為觀察大鼠L5 SNL后脊髓背角PARP-1的表達(dá)變化,將18只SD大鼠隨機(jī)分為六組,每組三只,sham組行假手術(shù),其余各組分別于SNL術(shù)后1、5、7、10、14天取材,取左側(cè)脊髓腰膨大處,測蛋白濃度,用western blot測PARP-1的表達(dá)。研究結(jié)果1大鼠L5 SNL后脊髓背角PARP-1的表達(dá)變化PARP-1為PARP家族的主要活性形式,本研究通過Western Blot法觀察了L5 SNL后第1、5、7、10、14天脊髓背角PARP-1的蛋白表達(dá)變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)L5 SNL能引起脊髓PARP-1蛋白的表達(dá)上調(diào),與假手術(shù)組比較,顯著性差異出現(xiàn)于術(shù)后第1天(P0.05),第7天達(dá)高峰(P0.01),至術(shù)后的第14天,仍維持表達(dá)。這與L5 SNL后的痛覺變化規(guī)律是一致的。2預(yù)先鞘內(nèi)注射(Introthecal injection,i.t.)PARP抑制劑PJ34對L5 SNL后大鼠神經(jīng)病理性痛形成過程的影響大鼠L5 SNL后PWT和PWL明顯下降,與假手術(shù)組以及baseline比較比較,顯著性差異出現(xiàn)于術(shù)后第1天(P0.05),術(shù)后第7天達(dá)最低值(P0.001);預(yù)先鞘內(nèi)注射PJ34能預(yù)防L5 SNL后大鼠PWT和PWL的下降,與鞘內(nèi)注射溶劑組比較,顯著性差異出現(xiàn)在PJ34應(yīng)用后的第3天(P0.05),并且,測試持續(xù)至L5 SNL后的第14天依舊有效,PJ34的作用呈劑量依賴性。單獨(dú)鞘內(nèi)注射PJ34對正常大鼠基礎(chǔ)PWT和PWL沒有影響。3鞘內(nèi)注射PJ34對L5 SNL后已經(jīng)建立起的神經(jīng)病理性痛的影響為觀察PARP抑制劑PJ34對已經(jīng)建立起的神經(jīng)病理性痛的影響,實(shí)驗(yàn)選擇L5 SNL后第7天開始鞘內(nèi)注射PJ34,每天1次,持續(xù)3天,結(jié)果發(fā)現(xiàn)PJ34能部分逆轉(zhuǎn)L5 SNL引起的PWT和PWL的下降。與注射saline組比較,顯著性差異出現(xiàn)在用藥后的第1天(P0.05),停止注藥后測試,依舊有效。研究結(jié)論大鼠L5 SNL可引起脊髓背角PARP-1表達(dá)升高,PARP抑制劑PJ34能顯著減輕L5 SNL引起的神經(jīng)病理性痛。
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本文編號(hào)：1992708