本文選題：炎性疼痛 + NR2B　； 參考：《南方醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景炎性疼痛是慢性疼痛產生的重要原因之一,人群患病率高,仍缺乏有效的治療手段。研究表明,中樞敏化是慢性炎性疼痛發(fā)生發(fā)展的重要機制之一,其中脊髓背角 N-甲基-D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)是介導炎性疼痛的關鍵分子,其通過亞基NR2B磷酸化過程介導中樞敏化,抑制NR2B磷酸化可以很好地緩解炎性疼痛癥狀,是治療慢性炎性疼痛的重要靶點。因NR2B參與多種生物過程,其抑制劑可產生多種不良反應和副作用,限制了臨床應用,進一步尋找抑制NR2B磷酸化的藥物和方法就成為目前研究的重點。研究表明,脊髓背角酪氨酸激酶FynSH2結構域與突觸后致密物蛋白95(Postsynaptic density,PSD-95)PDZ3結構域的結合是促進NR2B的磷酸化,介導慢性炎性疼痛發(fā)生發(fā)展的關鍵。本課題組前期研究表明,通過多肽陣列技術明確了 Fyn與PSD-95結合的短肽序列FynP,并利用蛋白結構轉導域技術合成穿膜肽Tat-FynP,經離體實驗證明Tat-FynP可競爭性抑制大鼠脊髓背角(Spinal cord dorsal horn,SCDH)原代神經元Fyn與PSD-95的結合。本研究在前期基礎上,進一步在體檢測鞘內注射Tat-FynP是否可以競爭性抑制炎性痛大鼠SCDH Fyn與PSD-95結合、降低NR2B磷酸化水平從而緩解炎性痛痛覺過敏行為,為臨床治療慢性炎性疼痛提供治療依據。研究方法鞘內給予大鼠組氨酸標記的多肽藥物,免疫組化檢測大鼠脊髓背角神經元并對組氨酸陽性神經元進行計數(shù)評分,明確多肽藥物穿膜效率;免疫印跡檢測大鼠足底注射完全弗氏佐劑(Complete Freund's adjuvant,CFA)致脊髓背角NR2B磷酸化水平的時量變化趨勢;鞘內注射Tat-FynP(突變序列Tat-mFynP作為對照),免疫共沉淀檢測Tat-FynP對Fyn與PSD-95相互作用的影響;炎性痛大鼠鞘內給予不同劑量的Tat-FynP,免疫印跡檢測Tat-FynP對NR2B磷酸化水平的影響,同時檢測Tat-FynP對CFA炎性痛大鼠機械性刺激縮足反應閾值(Mechanical paw withdrawal threshold,MWT)及熱刺激縮足潛伏期(Thermal paw withdrawal latency,TWL)等疼痛行為影響,進一步觀察大鼠放置反射、抓握反射、翻正反射,以判斷大鼠有無運動功能障礙。研究結果與FynP組相比,Tat-FynP組及Tat-mFynP組大鼠脊髓背角組氨酸陽性神經元評分明顯增高(P0.01),而空白組與FynP組大鼠脊髓背角組氨酸陽性神經元評分無明顯差異(P0.05),表明具有Tat穿膜結構的Tat-FynP及Tat-mFynP可有效穿過細胞膜進入神經元內;與空白組大鼠比較,CFA可顯著刺激脊髓背角的NR2B(p-NR2B)磷酸化表達(P0.01),CFA注射后24h達高峰,可至少維持14天;與對照組Tat-mFynP比較,Tat-FynP競爭性抑制Fyn與PSD-95的結合,劑量依賴性降低大鼠脊髓背角的p-NR2B水平(P0.01),緩解CFA引起的MWT及TWL痛覺過敏(P0.01),各組大鼠未出現(xiàn)運動功能障礙。研究結論:基于多肽陣列技術合成的靶向抑制脊髓背角Fyn與PSD-95相互作用的穿膜肽Tat-FynP可有效穿膜并進入大鼠脊髓背角神經元,靶向抑制Fyn與PSD-95的結合,降低p-NR2B水平,緩解CFA炎性痛行為,為治療慢性炎性疼痛提供治療依據。
[Abstract]:In this study , it has been shown that the combination of Fyn and PSD - 95 in rat spinal dorsal horn plays an important role in the development of chronic inflammatory pain . Compared with control group , Fyn and PSD - 95 could effectively penetrate the membrane and enter the dorsal horn neurons of rat spinal cord .

【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R402

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