本文選題：膿毒癥 + 血管通透性�。� 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：膿毒癥是由感染引起的全身炎癥反應(yīng),可引起嚴(yán)重的器官功能衰竭,其發(fā)病率和死亡率均很高,嚴(yán)重威脅人類生命健康。血管通透性增加是膿毒癥重要的病理生理過程,是導(dǎo)致器官功能損傷的重要原因之一。關(guān)于膿毒癥血管通透性的機(jī)制與防治有大量研究,并在臨床取得一定的效果,但還有待進(jìn)一步闡明。水通道蛋白(Aquaporin,Aqp)是一種能介導(dǎo)水快速進(jìn)出細(xì)胞的膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,在大鼠體內(nèi)有12種亞型,各亞型在各器官表達(dá)和功能不一。研究發(fā)現(xiàn)Aqp除作為通道調(diào)節(jié)水和甘油及其他小分子物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞外,還能作為細(xì)胞信號(hào)分子介導(dǎo)細(xì)胞的遷移、分化、分泌等功能。目前研究發(fā)現(xiàn)Aqps在腦缺血缺氧再灌注損傷、腫瘤、腎病、視網(wǎng)膜損傷及干燥綜合癥等多種疾病的病理生理過程發(fā)揮著重要作用。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)Aqps在與血管通透性相關(guān)疾病也發(fā)揮作用。Aqps是否參與膿毒癥肺血管通透性的調(diào)節(jié)及哪種Aqp在其中起主要作用目前不清楚。據(jù)此,本課題采用大鼠盲腸結(jié)扎穿孔復(fù)制膿毒癥模型,研究(1)Aqp3在膿毒癥肺血管通透性的作用;(2)Aqp3對(duì)膿毒癥肺血管通透性的調(diào)節(jié)機(jī)制;(3)SS-31通過Aqp3對(duì)膿毒癥肺血管通透性的保護(hù)作用。主要實(shí)驗(yàn)方法:采用盲腸結(jié)扎穿孔復(fù)制膿毒癥模型,提取大鼠原代肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;提取肺靜脈和內(nèi)皮細(xì)胞RNA和總蛋白;使用PCR的方法檢測(cè)肺靜脈中Aqp3的表達(dá)變化;使用蛋白免疫印跡檢測(cè)肺靜脈和內(nèi)皮細(xì)胞Aqp3、Cav-1、Occludin蛋白變化;異硫氰酸熒光素標(biāo)記的熒光白蛋白透過來檢測(cè)肺血管及內(nèi)皮細(xì)胞的通透性;ROS試劑盒測(cè)肺靜脈和內(nèi)皮細(xì)胞ROS變化;使用小RNA對(duì)Aqp3的表達(dá)進(jìn)行干擾。研究?jī)?nèi)容:第一部分Aqp3在膿毒癥肺血管通透性的作用1.采用大鼠盲腸結(jié)扎穿孔復(fù)制膿毒癥模型,取正常和膿毒癥大鼠肺靜脈,提取各組肺靜脈組織RNA,測(cè)各種水通道蛋白R(shí)NA的表達(dá)變化。在動(dòng)物水平通過多批次實(shí)驗(yàn)證明,Aqp的12個(gè)亞型在膿毒癥肺血管的表達(dá)大多增強(qiáng),其中Aqp3的增強(qiáng)趨勢(shì)更明顯。因此猜測(cè)Aqp3在膿毒癥肺血管通透性中起重要作用。2.在動(dòng)物水平,采用大鼠盲腸結(jié)扎穿孔復(fù)制膿毒癥模型,測(cè)膿毒癥6h和膿毒癥12h和假手術(shù)組大鼠肺血管通透性變化,同時(shí)提取各組大鼠肺靜脈,檢測(cè)肺靜脈中Aqp3的表達(dá)變化,初步了解膿毒癥大鼠肺血管通透性的變化和Aqp3表達(dá)變化的關(guān)系。在細(xì)胞水平,提取原代肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,使用LPS(1μg/ml)分別作用肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞6h和12h,觀察LPS刺激后的內(nèi)皮細(xì)胞通透性變化和Aqp3的表達(dá)變化,進(jìn)一步了解LPS刺激肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞后通透性變化和內(nèi)皮細(xì)胞Aqp3表達(dá)變化的關(guān)系。另外,在細(xì)胞水平,提取原代內(nèi)皮細(xì)胞,采用小RNA干擾Aqp3,觀察LPS引起的肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞通透性變化,明確Aqp3在膿毒癥肺血管通透性中的作用。第二部分Aqp3調(diào)節(jié)膿毒癥肺血管通透性的機(jī)制在動(dòng)物水平上,采用大鼠盲腸結(jié)扎穿孔復(fù)制膿毒癥模型,提取膿毒癥6h、12h組和假手術(shù)組大鼠肺靜脈,測(cè)肺靜脈中影響穿細(xì)胞途徑蛋白Cav-1和細(xì)胞旁途徑緊密連接蛋白Occludin的表達(dá)變化。在細(xì)胞水平上,提取原代肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,使用LPS(1μg/ml)作用肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞6h和12h,測(cè)LPS作用不同時(shí)間的肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Cav-1和Occludin的表達(dá)。同時(shí),在細(xì)胞水平,提取原代內(nèi)皮細(xì)胞,使用小RNA干擾Aqp3,測(cè)LPS作用的肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Cav-1和Occludin的表達(dá)。第三部分SS-31通過Aqp3對(duì)膿毒癥肺血管通透性的保護(hù)作用在動(dòng)物水平,采用盲腸結(jié)扎穿孔復(fù)制膿毒癥模型,在模型結(jié)束后經(jīng)尾靜脈注射不同劑量的SS-31(0.5mg/kg,1mg/kg,3mg/kg),觀察給藥后的肺血管通透性變化;另外,復(fù)制膿毒癥模型,模型結(jié)束后尾靜脈注射SS-31(3mg/kg),對(duì)照組尾靜脈注射生理鹽水,取模型組和對(duì)照組大鼠肺靜脈,測(cè)Aqp3表達(dá)和ROS的變化,驗(yàn)證SS-31通過調(diào)節(jié)Aqp3對(duì)膿毒癥肺血管通透性的保護(hù)作用。在細(xì)胞水平,提取原代肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,使用SS-31(0.1μg/ml)預(yù)處理細(xì)胞,觀察LPS(1μg/ml)作用后測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞通透性和Aqp3的表達(dá)及ROS的變化,驗(yàn)證SS-31通過Aqp3對(duì)LPS刺激的肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用。主要研究結(jié)果:第一部分Aqp3在膿毒癥肺血管通透性作用1.膿毒癥大鼠肺靜脈中多種Aqps的RNA表達(dá)增強(qiáng),包括Aqp1,3,4,7,11,12,其中Aqp3增強(qiáng)趨勢(shì)最明顯。在動(dòng)物水平隨著膿毒癥時(shí)間的延長(zhǎng)肺血管通透性和Aqp3的表達(dá)增強(qiáng)越明顯,膿毒癥6h和12h組較假手術(shù)組肺血管通透性和Aqp3的蛋白表達(dá)明顯升高,Aqp3的表達(dá)和通透性的變化一致;在細(xì)胞水平LPS刺激6h和12h肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞通透性顯著增加,Aqp3的蛋白表達(dá)也明顯升高。2.在細(xì)胞水平干擾Aqp3能有效拮抗LPS刺激引起的內(nèi)皮細(xì)胞通透性升高。第二部分Aqp3在膿毒癥肺血管通透性機(jī)制1.膿毒癥后影響跨細(xì)胞途徑蛋白Cav-1表達(dá)增強(qiáng),細(xì)胞旁途徑緊密連接蛋白Occludin的表達(dá)減弱。LPS刺激后肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Cav-1表達(dá)增強(qiáng),Occludin的表達(dá)減弱,與動(dòng)物水平上變化一致。2.細(xì)胞水平上干擾Aqp3后能拮抗LPS刺激肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Cav-1增強(qiáng)和Occludin的減弱。第三部分SS-31通過Aqp3對(duì)膿毒癥肺血管通透性的保護(hù)作用1.膿毒癥后大鼠肺靜脈ROS表達(dá)增加,SS-31預(yù)處理能拮抗膿毒癥ROS的增加;同時(shí)SS-31預(yù)處理膿毒癥大鼠能拮抗膿毒癥肺血管通透性的增加和Aqp3表達(dá)增強(qiáng)。2.LPS刺激后肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ROS表達(dá)增加,SS-31預(yù)處理拮抗LPS刺激引起的內(nèi)皮細(xì)胞ROS的升高;同時(shí)SS-31預(yù)處理LPS刺激的肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞能拮抗內(nèi)皮細(xì)胞通透性和Aqp3表達(dá)的增強(qiáng),與動(dòng)物水平一致。3.SS-31預(yù)處理后能改善膿毒癥大鼠存活率和存活時(shí)間。結(jié)論:1.Aqp3對(duì)膿毒癥肺血管通透性起調(diào)節(jié)作用;2.Aqp3參與膿毒癥肺血管通透性的調(diào)節(jié)可能通過穿細(xì)胞和跨細(xì)胞途徑;3.SS-31對(duì)膿毒癥肺血管通透性具有保護(hù)作用,其作用可能是通過抗氧化來實(shí)現(xiàn)。
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【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R459.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 唐淑萍;劉亞楠;馬宏;;水通道蛋白與腎臟疾病研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥物與臨床;2014年07期

2 趙克森,黃巧冰;血管通透性增高的基本機(jī)制[J];中國(guó)病理生理雜志;2003年04期

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本文編號(hào)：1748216