發(fā)布時(shí)間：2018-04-05 04:28

  本文選題：腸道病毒　切入點(diǎn)：亞型　出處：《中國病原生物學(xué)雜志》2017年10期

【摘要】：目的建立SYBR Green實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,以期用于EV71亞型檢測(cè)。方法根據(jù)中國大陸手足口病病原,設(shè)計(jì)多亞型EV71VP1基因特異性引物,PCR擴(kuò)增VP1基因片段,并與pEASY-T1載體連接,構(gòu)建pEASY-T1-VP1重組質(zhì)粒,以此為標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,評(píng)價(jià)方法的敏感性、特異性和穩(wěn)定性,并利用該方法檢測(cè)門診初診手足口病患者的咽喉拭子標(biāo)本。結(jié)果建立的實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好(R2=0.993),擴(kuò)增效率為107.1%;方法的檢測(cè)下限為(8.48×100)~(8.48×101)拷貝/μl之間,變異系數(shù)1%;非手足口病病原體無擴(kuò)增信號(hào),手足口病患者咽喉拭子陽性率為52.3%(45/86)。陽性樣品測(cè)序后與NCBI比對(duì),符合率為100%。結(jié)論建立的SYBR Green實(shí)時(shí)熒光定量PCR敏感、特異,可用于多亞型EV71感染的檢測(cè)。
[Abstract]:Objective to establish a real-time quantitative SYBR Green PCR method for the detection of EV71 subtypes.Methods according to the pathogeny of hand, foot and mouth disease in mainland China, the VP1 gene fragment was amplified by designing multi-subtype EV71VP1 gene specific primers and ligated with pEASY-T1 vector to construct pEASY-T1-VP1 recombinant plasmid.The sensitivity, specificity and stability of the method were evaluated.Results the standard curve of real-time fluorescence quantitative PCR has a good linear relationship, the amplification efficiency is 107.1, the detection limit of the method is 8.48 脳 100 脳 10 ~ (-1) copy / 渭 l, the coefficient of variation is 1 / 渭 l, and the pathogen of non-hand, foot and mouth disease has no amplification signal.The positive rate of throat swabs was 52.3%.The positive samples were compared with NCBI after sequencing, and the coincidence rate was 100%.Conclusion the SYBR Green real-time quantitative PCR is sensitive and specific, and can be used for the detection of multiple subtypes of EV71 infection.
【作者單位】： 吉林醫(yī)藥學(xué)院檢驗(yàn)學(xué)院;
【基金】：吉林省衛(wèi)生廳青年項(xiàng)目(No.2015Q042) 吉林省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(No.2016B326)
【分類號(hào)】：R440;R725.1

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本文編號(hào)：1713216