本文選題：血管內(nèi)超聲　切入點：RGD微泡　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景及目的:急性冠脈事件通常在沒有任何預(yù)警的情況下導(dǎo)致患者死亡或者殘疾,研究顯示,易損斑塊(vulnerable plaque,VP)是導(dǎo)致急性冠脈事件重要的發(fā)病機(jī)制。因此,早期準(zhǔn)確地識別易損斑塊具有十分重要的社會和學(xué)術(shù)價值。既往研究顯示動脈壁及斑塊內(nèi)新生滋養(yǎng)血管與斑塊穩(wěn)定性和心血管事件的發(fā)生密切相關(guān)。但是目前各種影像技術(shù)對新生滋養(yǎng)血管成像存在兩方面的不足:一方面滋養(yǎng)血管和斑塊內(nèi)新生血管分子的成像對成像分辨率的要求較高,限制了新生血管分子成像在大動物和人體的應(yīng)用;另一方面現(xiàn)有影像技術(shù)不能區(qū)分是成熟滋養(yǎng)血管還是新生滋養(yǎng)血管,缺乏對新生滋養(yǎng)血管的成像特異性。冠狀動脈血管內(nèi)超聲(Intravascular ultrasound,IVUS)具有良好的空間分辨率、實時成像等特點,而整合素αvβ3被認(rèn)為是新生血管標(biāo)志物,與斑塊穩(wěn)定性具有密切聯(lián)系。本研究嘗試?yán)煤袑Ζ羦β3整合素具有極高親和力的環(huán)狀RGD(精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸,Arg-Gly-Asp)微泡,進(jìn)行IVUS超聲增強成像,驗證RGD靶向微泡介導(dǎo)血管內(nèi)超聲(IVUS)能否通過增強超聲灰階信號反映斑塊新生滋養(yǎng)血管密度。方法:1.RGD靶向微泡制備:二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素(DSPE-PEG2000-Biotin)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、聚乙二醇2000(PEG2000)等脂質(zhì)材料按一定比例制備成生物素化脂質(zhì)微泡。再加入抗生蛋白鏈菌素,室溫孵育15min,PBS洗滌3次;然后加入生物素化環(huán)狀RGD,4°C靜置過夜后棄下清液,制備成RGD靶向微泡。同樣方法制備生物素化環(huán)狀RAD(精氨酸-丙氨酸-天門冬氨酸,Arg-Ala-Asp)同型對照微泡。顯微鏡下觀察兩種微泡大小及形態(tài),庫爾特計數(shù)儀測量RGD靶向微泡與RAD同型對照微泡的平均粒徑及濃度。2.實驗動物模型及分組:清潔級雄性新西蘭大白兔12只購于廣東省實驗動物中心,體重2.5-3.0kg,隨機(jī)分成實驗組(6只)和對照組(6只)。實驗組予以高脂飲食(1%膽固醇,5%豬油,94%基礎(chǔ)飼料)喂養(yǎng)2周后,經(jīng)3%戊巴比妥鈉30mg/kg耳緣靜脈注射誘導(dǎo)麻醉,穿刺右股動脈送入4F動脈鞘,經(jīng)動脈鞘送入3.5mmPTCA球囊導(dǎo)管至胸主動脈,8-1OkPa壓力擴(kuò)張后,自胸主動脈開始拉動球囊至腹主動脈末端,重復(fù)3次,青霉素80萬U腹腔內(nèi)注射3天。對照組6只不做處理。2組均自由飲水,單籠喂養(yǎng)12周。3.IVUS體外成像:3%濃度的瓊脂糖溶液500 ml,冷卻凝固形成一個具有中空管道的瓊脂糖塊模型。在中空管道兩端連接銜接裝置,入口端接蠕動泵,出口端接流出管裝置。然后經(jīng)流出管送入40 MHz IVUS導(dǎo)管探頭固定于瓊脂模型中空管道中,采用Boston scientific公司iLab IVUS超聲機(jī)對PBS及RGD靶向微泡進(jìn)行實時成像,觀察微泡體外高頻基波成像特點。4.IVUS體內(nèi)成像:實驗動物經(jīng)3%戊巴比妥鈉耳緣靜脈誘導(dǎo)麻醉,仰臥位固定于兔臺,備皮、消毒、鋪巾,暴露左側(cè)股動脈,直視下插入5F橈動脈鞘管,采用Boston scientific公司iLab IVUS超聲機(jī),將40 MHz單頻IVUS導(dǎo)管送至左腎動脈近心端1 cm處。完全隨機(jī)順序注入2mlRGD微泡或RAD微泡,5ml生理鹽水沖洗。微泡注入5min后IVUS導(dǎo)管以0.5 mm/s速度機(jī)械自動回撤導(dǎo)管至髂總動脈分叉處,圖像采集速度為30幀/s,不同微泡間及注射前后增益及濾波條件保持不變。一種微泡注射成像后,體外高機(jī)械指數(shù)超聲徹底破壞微泡,再行另一種微泡成像。IVUS圖像脫機(jī)分析,分別采用MCE超聲彩色編輯軟件進(jìn)行彩色編輯,IPP(Image-Pro Plus)軟件分析超聲灰度圖像,對微泡注入后感興趣區(qū)域平均灰度增強強度(Mean enhancement in region of interest,MERI)值進(jìn)行分析。5.HE染色及免疫組化:IVUS成像后,經(jīng)耳緣靜脈過量注射3%戊巴比妥鈉處死動物,取腹主動脈,固定于4%多聚甲醛,常規(guī)包埋切片后行HE染色及αvβ3免疫組化染色,測量微血管密度(Microvascular Vascular Density,MVD)值。6.統(tǒng)計學(xué)分析:采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,所有數(shù)值均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,統(tǒng)計學(xué)采用兩獨立樣本t檢驗或單因素方差分析,Bonferroni進(jìn)行多重比較。P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1.RGD靶向微泡表征庫爾特計數(shù)儀顯示RGD粒徑范圍約1.76～8.62μm,平均粒徑大小約為2.48±0.33μm,濃度約3.65×108個/ml;RAD粒徑約為1.84～8.35μm,平均粒徑大小約為2.51±0.30μm,濃度約3.37×108個/ml。在普通光學(xué)顯微鏡下可見,RGD與RAD成透亮的微氣泡,大小形態(tài)均勻,分散良好,未見明顯聚集成團(tuán)現(xiàn)象。2.IVUS體外成像PBS組,血管內(nèi)超聲未見顯像;RGD微泡在體外40 MHz基波成像模式下呈散在光亮的點狀回聲,分布均勻,未見明顯聚集成團(tuán),顯示了良好的聲學(xué)顯影特性。3.IVUS體內(nèi)成像采用MCE超聲彩色編輯軟件編輯后,對照組基線水平、RAD微泡及RGD微泡造影成像后,超聲信號強度未見明顯差異。實驗組中RGD微泡造影后,與基線水平及RAD微泡造影成像相比,超聲信號明顯增強,增強部位主要集中于動脈粥樣血管外膜及斑塊肩部。IPP軟件定量分析MERI顯示,對照組中基線水平(10.37±4.32)和RAD(9.99±2.81)、RGD(11.22±4.71)微泡增強相比無差異(P0.05)。實驗組中實驗組RGD(76.44±31.48)微泡增強后MERI值比基線水平(5.69±4.25)和RAD(7.36±6.18)微泡增強明顯升高(P0.01)。4.HE染色及免疫組化HE染色顯示,對照組管壁無增厚,平滑肌細(xì)胞排列整齊,呈長梭形,實驗組可見內(nèi)膜明顯增厚,大量脂質(zhì)沉積的動脈粥樣硬化斑塊。αvβ3免疫組化結(jié)果顯示,對照組未見新生血管形成,實驗組內(nèi)可見大量新生血管,新生血管主要集中于動脈粥樣硬化血管外膜及斑塊肩部。測量微血管密度(MVD),對照組為0.38±0.26 個/mm2,實驗組為 3.96 ±0.84 個/mm2(P0.01)。.結(jié)論:RGD靶向微泡介導(dǎo)血管內(nèi)超聲(IVUS)能通過增強超聲灰階信號對反映斑塊新生滋養(yǎng)血管密度,有望用于對動脈粥樣硬化病變診斷及斑塊穩(wěn)定性的評估。
[Abstract]:Objective : To study the effects of different imaging techniques on the imaging resolution , such as DSPE - PEG2000 - PEG , DPPC , PEG2000 , etc . In order to study the characteristics of high frequency fundamental wave imaging in vitro , a 40 MHz single - frequency IVUS catheter was injected into the hollow conduit of the left renal artery . Results : In the experimental group , RGD ( 76.44 鹵 31.48 ) and RAD ( 9.99 鹵 2.81 ) , RGD ( 11.22 鹵 4.71 ) showed no significant difference compared with baseline ( 5.69 鹵 4.25 ) and RAD ( 9.99 鹵 2.81 ) . Conclusion : RGD - targeted microbubble - mediated intravascular ultrasound ( IVUS ) is expected to be used to evaluate the diagnosis of atherosclerotic lesion and plaque stability by enhancing the ultrasound gray scale signal to reflect plaque neovascularization .

【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R541.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 徐秀霞;宋竹清;徐健蓉;胡巧;;RGD靶向微泡造影劑的制備及其黏附效能[J];中國醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志;2015年02期

2 王威琪,余建國,汪源源;關(guān)于醫(yī)學(xué)超聲中的諧波和次諧波[J];中華超聲影像學(xué)雜志;1999年03期

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本文編號：1697351